血清腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合Ki-67、HSP90α檢測肺癌的診斷價值及臨床意義

張翠紅,夏云亞,胡 佩,仇家高

(高郵市人民醫(yī)院：1.檢驗科；2.病理科,江蘇高郵 225600)

在全球范圍內(nèi)，肺癌在不同地區(qū)、不同人種中都是主要癌癥發(fā)病和癌癥死因之一。隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展、空氣質(zhì)量改變等原因，肺癌多年占據(jù)我國惡性腫瘤死亡首位，病死率高、預(yù)后差、且發(fā)病年齡有年輕化趨勢[1]。早發(fā)現(xiàn)早治療依舊是改善其預(yù)后的最有效手段。

當(dāng)前用于癌癥篩查的腫瘤標(biāo)志物包括癌胚抗原(CEA)、神經(jīng)特異度烯醇化酶(NSE)、細(xì)胞角質(zhì)素片段抗原21-1(CYFRA21-1)等[2]。但上述抗原在很多良性病變，如胸腹水、直腸息肉等的檢測中也會出現(xiàn)陽性結(jié)果[3]，對肺癌的檢測靈敏度和特異度相對較差。Ki-67是一種細(xì)胞核抗原，基因定位于10號染色體上，其功能與有絲分裂密切相關(guān)，多表達(dá)于增殖旺盛的細(xì)胞中，可做為細(xì)胞增殖旺盛的標(biāo)志物[4]。已有研究者發(fā)現(xiàn)，Ki-67與一些腫瘤的惡性程度呈正相關(guān)，如肺癌、惡性淋巴瘤、乳腺癌等[5]。HSP90α是一種細(xì)胞質(zhì)蛋白質(zhì)，具有分子伴侶功能，能夠維持癌基因蛋白的穩(wěn)定性[6]。因此探索不同腫瘤標(biāo)志物的組合方式用于提高肺癌的診斷效能。本研究旨在探討目前臨床上已有的血清腫瘤標(biāo)志物CEA、NSE、CYFRA21-1聯(lián)合Ki-67和HSP90α針對肺癌進(jìn)行篩查診斷的特異度和靈敏度，以求探索出高靈敏度和高特異度的肺癌篩查手段，達(dá)到早發(fā)現(xiàn)早治療的目的，指導(dǎo)臨床應(yīng)用。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年8月至2017年7月本院收治的肺癌患者(均為初治肺癌患者)58例(肺癌組)，其中男性患者30例、女性患者28例，年齡31～84歲，平均(52.3±17.9)歲，患者經(jīng)細(xì)胞學(xué)和病理檢查為腺癌18例、鱗癌26例、小細(xì)胞癌14例。納入及排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者均無接受化療及其他治療史；(2)無心、肝、腎等重要器官的感染、貧血、病變和內(nèi)分泌及相關(guān)的代謝疾??；(3)無其他器官的腫瘤病史和家族史。此外，選取同期本院收治的50例肺部良性腫瘤患者作為對照組，其中男26例、女24例，年齡30～84歲，平均(55.1±16.4)歲，兩組患者的一般資料對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)本院倫理會審核通過，受試者知情并簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1血清腫瘤標(biāo)志物測定 在清晨空腹時采集兩組患者的靜脈血約3 mL，室溫靜置30 min后，5 000 r/mim，4℃離心10 min以徹底分離血清組分，離心后吸取血清組分，置于-20 ℃冰箱保存待測。采用Roche Elecsys2010電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(羅氏，美國)對三種血清腫瘤標(biāo)志物：CEA、NSE、CYFRA21-1的水平進(jìn)行測定。將CEA>15 μg/L，NSE>16.3 μg/L，CYFRA21-1>3.3 μg/L時判定為陽性。

1.2.2Ki-67水平的測定 手術(shù)后獲取肺癌組患者的癌及癌旁組織，并制成石蠟標(biāo)本，采用免疫組化法測定Ki-67水平，采用免疫組化試劑盒(Cell Signaling Technology，美國)進(jìn)行測定，操作步驟按嚴(yán)格試劑盒中提供的說明書進(jìn)行。選擇兩位具有豐富經(jīng)驗的病理科醫(yī)生進(jìn)行閱片，每個切片選取5個高倍視野，對每個視野進(jìn)行計數(shù)的細(xì)胞個數(shù)為100個，Ki-67為陽性信號為棕色顆粒，位于細(xì)胞核。將Ki-67在細(xì)胞中的表達(dá)率(即陽性細(xì)胞占總細(xì)胞的比例)分為四個等級：<5%(-)，5%～25%(+)，>25%～50%(++)，>50%(+++)，同時將Ki-67表達(dá)率>5%時判定為陽性。

1.2.3HSP90α水平測定 HSP90α測定采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)試劑盒(普羅吉生物科技有限公司)進(jìn)行，操作步驟嚴(yán)格按試劑盒中提供的說明書進(jìn)行。具體操步驟為在清晨空腹時采用EDATA-K2抗凝管收集兩組患者靜脈血約2 mL，5 000 r/min，4 ℃離心10 min后搜集血漿組分，置于-20 ℃冰箱保存待測。采用ELISA法測定血漿中的HSP90α水平。當(dāng)HSP90α>82.060 ng/mL時，判定為陽性，HSP90α<82.060 ng/mL時，判定為陰性。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者血清腫瘤標(biāo)志物和HSP90α表達(dá)水平對比 肺癌組患者的三種血清腫瘤標(biāo)志物：CEA、NSE和CYFRA21-1的水平均高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。肺癌組患者HSP90α表達(dá)水平及陽性率均高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)見表1～2。

表1 兩組患者血清腫瘤標(biāo)志物和HSP90α表達(dá)水平對比

表2 兩組患者HSP90α表達(dá)水平及陽性率對比

2.2不同類型肺癌患者腫瘤標(biāo)志物的陽性率對比 腺癌患者的CEA陽性率顯著高于鱗癌患者和小細(xì)胞癌患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。小細(xì)胞癌患者的NSE陽性率顯著高于腺癌患者和鱗癌患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。鱗癌患者的CYFRA21-1顯著高于腺癌患者和小細(xì)胞癌患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，詳見表3。

表3 不同類型肺癌患者腫瘤標(biāo)志物的陽性率對比[n(%)]

2.3肺癌患者癌及癌旁組織Ki-67表達(dá)水平對比 通過對術(shù)后35例肺癌組患者癌及癌旁組織Ki-67表達(dá)水平對比的結(jié)果顯示：Ki-67在癌組織中表達(dá)的陽性率為85.7%(30例)，而癌旁組織中Ki-67的陽性率則為0%(0例)，見表4。

表4 肺癌患者癌及癌旁組織Ki-67表達(dá)水平對比(n)

2.4血清腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合Ki-67、HSP90α檢測肺癌的特異度和靈敏度對比 Ki-67單一檢測肺癌的靈敏度最高(85.7%)，HSP90α單一檢測肺癌的特異度最高(90.0%)，血清腫瘤標(biāo)志物CEA、NSE和CYFRA21-1聯(lián)合Ki-67、HSP90α檢測肺癌的靈敏度達(dá)到100%。見表5。

表5 血清腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合Ki-67、HSP90α檢測肺癌的特異度和靈敏度對比

注：-表示無此項

3 討 論

血清中的CEA、NSE、CYFRA21-1是目前臨床上用于肺癌檢測的常用指標(biāo)。CEA最早發(fā)現(xiàn)于胎兒和結(jié)腸癌相關(guān)組織中，是最廣譜的腫瘤標(biāo)志物，常見于胃癌、肺癌、乳腺癌等惡性腫瘤[7-8]。CEA用于肺腺癌的檢測能顯著提高肺腺癌的檢出水平，本研究中腺癌患者的CEA陽性率顯著高于鱗癌患者和小細(xì)胞癌患者(P<0.05)。NSE是小細(xì)胞肺癌最靈敏和特異的腫瘤標(biāo)志物，本研究中小細(xì)胞癌患者NSE陽性率顯著高于腺癌和鱗癌患者(P<0.05)；但是NSE非常不穩(wěn)定，在檢測過程中發(fā)生溶血會導(dǎo)致結(jié)果升高，從而導(dǎo)致誤判[8-10]。CYFRA21-1是檢測肺癌的經(jīng)典指標(biāo)，本研究結(jié)果顯示其對鱗癌最為敏感(陽性率61.5%)，對腺癌、小細(xì)胞癌的靈敏度依次降低，與已有的文獻(xiàn)報道一致[11-13]。綜上可知：僅靠血清腫瘤標(biāo)志物來對肺癌進(jìn)行診斷的檢測靈敏度和特異度相對較差，無法很好地描述腫瘤的特性，易造成臨床誤判，因此需聯(lián)合其他的標(biāo)志物進(jìn)行多維診斷，才能提高診斷的準(zhǔn)確率。

Ki-67是一種細(xì)胞核抗原，由于其功能與有絲分裂密切相關(guān)，可作為細(xì)胞增殖旺盛的標(biāo)志物，已有研究者發(fā)現(xiàn)其與一些腫瘤的惡性程度呈正相關(guān)[14]。比較Ki-67在癌組織和癌旁組織中的陽性率，認(rèn)為Ki-67對腫瘤檢測的特異度較高，避免了其他抗原可能產(chǎn)生的良性病變導(dǎo)致檢測結(jié)果陽性的誤判。HSP90α是一種細(xì)胞質(zhì)蛋白質(zhì)，具有分子伴侶功能，能夠維持癌基因蛋白的穩(wěn)定性，在正常情況下僅在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，但當(dāng)細(xì)胞發(fā)生惡變或在應(yīng)激狀態(tài)下時，其表達(dá)增多并在胞外分泌表達(dá)[15]。2013年，羅永章團(tuán)隊通過肺癌臨床試驗證明血漿HSP90α是一種全新的腫瘤標(biāo)志物。目前已經(jīng)有商業(yè)化的HSP90α檢測試劑盒被批準(zhǔn)上市，在臨床應(yīng)用于癌癥抗原篩查。有研究對手術(shù)和內(nèi)科治療的肺癌患者血漿中Hsp90α含量進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)其水平變化與患者病情變化具有相關(guān)性[16]。本研究中肺癌組患者HSP90α表達(dá)水平及陽性率均顯著高于對照組(P<0.05)，進(jìn)一步支持了上述論據(jù)。

本研究結(jié)果顯示：Ki-67單一檢測肺癌的靈敏度最高(87.9%)，HSP90α單一檢測肺癌的特異度最高(90.0%)。臨床上，常對多種抗原進(jìn)行篩查以保證篩查結(jié)果的可靠性。本研究將3種對肺癌具有一定相關(guān)性的血清抗原分別與Ki-67、HSP90α的篩查結(jié)果進(jìn)行交叉評價。結(jié)果顯示血清腫瘤標(biāo)志物CEA、NSE和CYFRA21-1同時聯(lián)合三種血清抗原、Ki-67和HSP90α進(jìn)行篩查時，靈敏度可達(dá)到100%，提示在篩查過程中將很少出現(xiàn)漏診現(xiàn)象，同時可保證特異度>75%。臨床上，對于癌癥的篩查多依賴于對多種抗原的聯(lián)合檢測結(jié)果。鑒于對于癌癥應(yīng)采取早發(fā)現(xiàn)早治療的指導(dǎo)方針，在臨床篩查中，應(yīng)將檢測靈敏度作為考慮的首要因素。

4 結(jié) 論

血清腫瘤標(biāo)志物CEA、NSE和CYFRA21-1聯(lián)合Ki-67和HSP90α進(jìn)行肺癌的篩查具有較高的靈敏度，對臨床篩查具有指導(dǎo)意義。