“南薯88”莖葉多糖的分離純化，結(jié)構(gòu)鑒定及其生物活性的研究

劉 露，侯怡鈴，王 梅，趙大群，譚春梅，劉興麗，侯萬儒，丁 祥*

（1.西華師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，西南野生動植物資源保護教育部重點實驗室，四川 南充 637009；2.南充市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院 國家甘薯改良中心南充分中心，四川 南充637001）

紅薯是旋花科一年生的草本植物[1]。紅薯為我國主要的糧食，有食用、飼養(yǎng)等多種用途?！澳鲜?8”[2]是四川省南充市農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘薯研究所在1980年用晉專7號作母本，美國紅作父本進行有性雜交后培育選擇而成的品種。該品種在1988年3月通過四川省品種委員會審定，1991年通過國家審定，1992年獲得國家科技進步一等獎?！澳鲜?8”自育成以來，因其產(chǎn)量高、適應(yīng)性廣、熟食品質(zhì)優(yōu)而受到廣大農(nóng)戶的喜愛，并長期作為國家區(qū)試驗對照種，在長江中下游薯區(qū)覆蓋率一度超過70%。

多糖又稱多聚糖（polysaccharide），是由至少十個單糖通過糖苷鍵聚合組成的聚合物。多糖在藥理學(xué)和生理學(xué)等方面起著不同的作用，它們作為細胞壁與環(huán)境之間的屏障，具有介導(dǎo)宿主-病原物相互作用，形成生物膜結(jié)構(gòu)的功能。近年來，由于活性多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化及降血糖[3]的功能而廣泛受到關(guān)注。同時活性多糖能夠多途徑、多環(huán)節(jié)、多靶點的調(diào)控免疫系統(tǒng)，激活免疫細胞并活化補體，促進生成細胞因子。植物多糖分布范圍廣，原料來源簡便，在醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、食品等領(lǐng)域具有獨特的作用[4-5]。

本研究以南充市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院專利品種“南薯88”為對象，運用熱水浸提技術(shù)、柱層析技術(shù)分離純化“南薯 88”多糖（N88P-1），通過紅外光譜技術(shù)（IR），高效凝膠滲透色譜（HPGPC），高效液相色譜色譜（HPLC）和核磁共振譜（1H NMR和13C NMR）等對“南薯88”多糖（N88P-1）進行結(jié)構(gòu)鑒定；并對“南薯88”多糖（N88P-1）的抗氧化活性和免疫調(diào)控能力做了初步探究。為進一步研究“南薯88”多糖（N88P-1）的藥理作用、構(gòu)效關(guān)系和更為廣泛的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要材料與儀器

1.1.1 主要材料“南薯88”莖葉由四川省南充市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院提供；無水乙醇購買于安徽安特生物化學(xué)有限公司；氯化鈉購于成都市科龍化工試劑廠；DEAE纖維素購于生興生物技術(shù)（南京）有限公司；葡萄糖，果糖，阿拉伯糖，甘露糖，半乳糖，木糖；ABTS溶液（本實驗室提供）；DPPH溶液（本實驗室提供）；cell counting kit（CCK-8 細胞計數(shù)試劑盒）購買于上海碧云天生物技術(shù)研究所，PBS緩沖液（本實驗室提供）；RPMI1640培養(yǎng)基，無酚紅，購于gibco公司；0.5%Trypsin-EDTA購于gibco公司；胎牛血清購于Clark Bioscience，實驗藥品均為分析純。

1.1.2 主要實驗儀器小鼠巨噬細胞RAW264.7、B淋巴細胞、T淋巴細胞購買于中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細胞生物學(xué)研究所；CO2恒溫培養(yǎng)箱；超凈工作臺；紫外分光光度計；電子天平；96孔微量培養(yǎng)板；徠卡倒置顯微鏡；臺式低溫高速離心機；Epoch酶標(biāo)儀；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；電熱恒溫水浴鍋；高效液相色譜儀；徠卡DMI 3000倒置熒光顯微鏡。

1.2 方法

1.2.1 “南薯88”多糖（N88P-1）的提取稱取烘干后的南薯88莖葉300 g，剪成小段再放于粉碎機中粉碎；以料液比1∶3的比例在水浴鍋90℃蒸餾水中煮6 h，煮3次[6]；收集上清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至200 mL，加入4倍體積無水乙醇[7]，用玻璃棒攪拌有絮狀沉淀產(chǎn)生，離心收集沉淀，烘干后得到“南薯88”多糖（N88P-1）的粗多糖[8]。

1.2.2 “南薯88”多糖（N88P-1）的分離純化使用DEAE cellulose-52 色譜柱[9]（2 cm×60 cm），自然沉降柱填料。精密稱取“南薯88”多糖（N88P-1）的粗多糖5 g，溶解于5 mL蒸餾水中，離心后的上清液加入 DEAE cellulose-52 色譜柱 （2 cm×60 cm），配制 不 同 濃 度 的 NaCl 溶 液 （0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mol/L）作為流動洗脫相，流速2 mL/min，每管收集5 mL的洗脫液于試管中，采用硫酸苯酚法[10]，在490 nm波長下測定吸光度值，橫坐標(biāo)為管數(shù)，縱坐標(biāo)為吸光度值做洗脫曲線圖。并將收集的“南薯88”多糖命名為N88P-1。

1.2.3 N88P-1的分子量測定稱取5 mg N88P-1樣品用1 mL蒸餾水溶解，超聲5 min。用高效凝膠滲透色譜法（HPGPC）測定N88P-1的分子量。測得的數(shù)據(jù)用GPC軟件與葡聚糖制備標(biāo)準曲線對照得到分子量[11-12]。

1.2.4 N88P-1的紅外譜分析稱取N88P-1樣品5 mg，在研缽中與KBr粉末一起研細后壓片，在傅里葉紅外光譜儀4 000 cm-1～400 cm-1[13]的范圍內(nèi)掃描。

1.2.5 N88P-1的核磁共振分析稱取N88P-1樣品20 mg溶解于D2O中，常溫下在核磁共振儀上測定，400 MHz測1H NMR譜，150 MHz測13C NMR譜[14]。

1.2.6 N88P-1的水解稱取N88P-1 20 mg到安瓿瓶，加入2 mol/L的TFA溶液[15]5 mL，110℃完全密封水解6 h，離心除殘渣，烘干，用蒸餾水洗3次除去三氟乙酸，然后再加幾滴甲醇，烘干后用水溶解，得到完全酸水解產(chǎn)物，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.7 N88P-1的單糖組成分析N88P-1經(jīng)過三氟乙酸水解后得到完全酸水解產(chǎn)物，通過高效液相色譜儀[16]對N88P-1進行單糖組成分析。 色譜條件為：4.6 mm×250 mm，5 μm 色譜柱； 柱溫：25 ℃；流動相：75% 乙腈；流速：1.4 mL/min；RID檢測器溫度：35 ℃；進樣量：5 μL。

1.2.8 N88P-1對ABTS+自由基清除能力的測定將N88P-1樣品用蒸餾水配制成濃度梯度（0.5、1、2、3、4、5、10 mg/mL）， 取配制好的各濃度溶液 2 mL于試管，分別加入2 mL ABTS+自由基工作液，振蕩混合，室溫放置20 min，測定吸光度值A(chǔ)1；同時取配制好的各濃度溶液2 mL，分別加入2 mL蒸餾水，測得734 nm處的吸光度值A(chǔ)2；再測定734 nm處2 mL蒸餾水與2 mL ABTS+自由基工作液的吸光值，記為A0。重復(fù)測三次，陽性對照組為VC。ABTS+自由基清除能力 =[1-（A1-A2）/A0]×100%[17]。

1.2.9 N88P-1對DPPH-自由基清除能力的測定將N88P-1樣品用蒸餾水配制成濃度梯度（0.5、1、2、3、4、5、10 mg/mL），取配制好的各濃度溶液 2 mL，加入2.0 mL 0.2 mmol/L DPPH-溶液[18-19]，測定517 nm處的吸光度值A(chǔ)1；同時測定2 mL樣品溶液與2 mL水在517 nm處的吸光度值A(chǔ)2；在517 nm處測定水和DPPH-溶液的吸光度值A(chǔ)0。重復(fù)測3次，陽性對照組為VC。

DPPH-清除能力 =[（A1-A2）/A0]×100%。

1.2.10 N88P-1對T、B細胞和RAW264.7細胞的增殖作用用細胞計數(shù)試劑盒 CCK-8[20]（cell counting kit） 法測定 N88P-1對 T、B細胞和RAW264.7細胞的增殖實驗中的細胞數(shù)。用培養(yǎng)液溶解N88P-1多糖，用0.22 μm濾器除菌儲存?zhèn)溆?，用時用培養(yǎng)液逐級稀釋（2.5、5、10、20、40、80 μg/mL）。取對數(shù)生長期的T、B細胞和RAW264.7細胞，更換新鮮的培養(yǎng)液，并用培養(yǎng)液稀釋至2×105細胞/mL，將PBS緩沖液加入96孔板的四周，保持無菌的水環(huán)境，再在其余的孔加入100 μL細胞稀釋液。在37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，依次加入100 μL細胞培養(yǎng)液 （空白對照）、LPS（終質(zhì)量濃度10 μg/mL，陽性對照）以及不同濃度的N88P-1溶液，在37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。每孔加入CCK-8溶液5 μL繼續(xù)培養(yǎng)3 h，測定450 nm下吸光值，記錄結(jié)果。繪制以濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)的曲線，并拍照。

1.2.11 統(tǒng)計與分析所有數(shù)據(jù)均用mean±SD表示，用t-test檢驗差異的顯著性，與對照組對比顯著用 * 表示，P＜0.05，極顯著用 ** 表示，P＜0.01。

2 結(jié)果與分析

2.1 N88P-1 EAE cellulose-52色譜柱層析分級結(jié)果

DEAE cellulose-52纖維素柱填料為陰離子交換劑，是一種顆粒大小為50 μm的高度交聯(lián)纖維素。多用于分離提純多糖、核苷酸等生物大分子。多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物，再以比色法測定。本研究采用DEAE cellulose-52色譜柱，用不同濃度的 NaCl溶液（0 mol/L、0.1 mol/L、0.2 mol/L、0.3 mol/L、0.4 mol/L、0.5 mol/L）作為流動洗脫相，采用硫酸苯酚法在490 nm測定多糖的吸光度值，洗脫曲線如圖1所示，用0.1 mol/LNaCl洗脫時出現(xiàn)一個較大的洗脫峰，合并0.1 mol/L NaCl段中第4～8管中的多糖溶液，濃縮干燥后得到淡黃色無定型粉末，即“南薯 88”多糖（N88P-1）。

2.2 N88P-1高效凝膠滲透色譜（HPGPC）結(jié)果

本研究采用高效凝膠滲透色譜法 （HPGPC）測定N88P-1的分子量。結(jié)果顯示（見圖2），在14 min左右出現(xiàn)單一峰，曲線呈對稱分布的鐘罩型曲線，提示N88P-1是單一多糖成分，無其他雜質(zhì)。同時，測得的N88P-1的重均分子量為14 328 D，數(shù)均分子量為4 707 D，峰值分子量為7 199 D，多分散系數(shù)為 3.04（見圖 3）。

圖1 N88P-1的DEAE cellulose-52纖維素柱層析洗脫曲線Fig.1 Chromatogram of N88P-1 on a DEAE cellulose-52 column

圖2 N88P-1的高效凝膠滲透色譜Fig.2 High performance gel permeation chromatogram of N88P-1

圖3 N88P-1的分子量Fig.3 Molecular weight of N88P-1

2.3 N88P-1的FTIR譜分析

傅里葉紅外光技術(shù)（FTIR）是對多糖的酯化度進行定量分析的方法，操作簡單，重現(xiàn)性好。本研究采用傅里葉紅外光技術(shù)在4 000～460 cm-1范圍內(nèi)測定N88P-1的紅外吸收。數(shù)據(jù)如圖4所示，3 444.81 cm-1出現(xiàn)的一處寬吸收峰寬吸收峰指定為O-H的伸縮振動峰，這說明N88P-1存在分子內(nèi)或分子間氫鍵；1 640.20 cm-1指定為C=O的伸縮振動峰；1 401.27 cm-1附近的吸收峰是由 C-H的變角振動引起。以上顯示了多糖在1 400～4 000 cm-1范圍內(nèi)的特征吸收峰。在指紋峰區(qū)域范圍內(nèi)950～1 250 cm-1的一組峰是2種C-O的伸縮振動引起的，1種是C-O-C的振動峰，另1種是C-O-H的吸收峰（N88P-1的吸收峰在1 102.25 cm-1和1 041.70 cm-1處）。該結(jié)果進一步證明此物質(zhì)為多糖結(jié)構(gòu)，特征峰明顯，且成分單一，無其他結(jié)構(gòu)特征峰，應(yīng)為純品多糖。

圖4 N88P-1的紅外分析Fig.4 Fourier transform infrared spectra of N88P-1

2.4 N88P-1的1H-NMR譜分析

N88P-1的1H-NMR譜如圖5所示，結(jié)果顯示N88P-1雜質(zhì)含量較少。在δ 4.93～δ 4.86存在單糖異頭氫信號。 δ 3.19～δ 4.39為各單糖中2-6位碳上的氫信號峰的重疊，其中 δ 3.18～δ 3.30可指示為單糖亞甲基上的氫信號。 δ 4.08～δ 4.39可指示為單糖3位碳上的氫信號。δ 4.67則指示為溶劑重水的氫信號。

圖5 N88P-1的1H NMR譜數(shù)據(jù)Fig.5 1H NMR spectra of N88P-1

2.5 N88P-1的高效液相色譜（HPLC）結(jié)果

采用高效液相色譜法（HPLC）測定多糖的單糖組成，此方法操作簡單，靈敏度高，反應(yīng)條件溫和。本研究通過三氟乙酸（TFA）得到N88P-1的完全酸水解產(chǎn)物，采用高效液相色譜法得到高效液相色譜，再對比各種單糖的出峰時間分析N88P-1的單糖組成。結(jié)果顯示，在保留時間為7.294 min及7.955 min處有兩處明顯的吸收峰 （圖7），與單糖（包括葡萄糖，甘露糖，果糖等）的高效液相圖譜（圖6）對比發(fā)現(xiàn)，該兩處吸收峰分別與甘露糖（保留時間為7.386 min）和半乳糖（保留時間為8.014 min）的吸收峰吻合。提示N88P-1由甘露糖和半乳糖兩種單糖組成，同時吸收峰峰面積比值提示甘露糖和半乳糖兩種單糖比例為1∶1。

圖6 高效液相圖譜Fig.6 Analysis of standard monosaccharides by HPLC

圖7 高效液相色譜法測定N88P-1的單糖組分分析Fig.7 Component monosaccharides analysis of N88P-1 by HPLC

2.6 N88P-1對ABTS自由基的清除能力

適當(dāng)?shù)难趸瘎笰BTS氧化為綠色，如果存在抗氧化物，就會抑制綠色產(chǎn)物的生成?？寡趸锏臐舛炔煌瑫斐葾BTS的產(chǎn)物顏色改變，抗氧化物越強則產(chǎn)物的顏色越淺，并在734 nm的波長下測定吸光度值，計算總抗氧化能力。如圖8所示，在一定濃度的范圍內(nèi)，N88P-1對ABTS自由基的清除率和N88P-1濃度有一定的量效關(guān)系，ABTS自由基的清除率隨著N88P-1濃度的增加而逐步增加。在低濃度（＜2 mg/mL）時，提高N88P-1濃度，清除率增加明顯；同時其IC50值為0.48 mg/mL。當(dāng)N88P-1的濃度為3 mg/mL時，清除率可達到最大值。其后再增加N88P-1的濃度，對ABTS的清除率提高不大。值得注意的是，低濃度的VC對ABTS自由基的清除作用強于N88P-1，但隨著濃度的增大N88P-1和維生素C清除能力接近。

圖8 N88P-1對ABTS自由基的清除能力Fig.8 ABTS radical cation scavenging activity of N88P-1

2.8 N88P-1對DPPH自由基的清除能力

DPPH溶液是一種在517 nm波長處有一個特征吸收峰，為紫色的一種化合物。適當(dāng)?shù)淖杂苫宄齽cDPPH自由基反應(yīng)導(dǎo)致反應(yīng)顏色變淺，517 nm處測定的吸光度值也會變小，所以判定DPPH自由基的清除效果可以通過測定吸光度。本實驗研究N88P-1對DPPH自由基的清除能力結(jié)果如圖9所示，在低濃度的范圍內(nèi)，N88P-1對DPPH自由基的清除率與濃度呈正相關(guān)，IC50值為0.96 mg/mL，其中，N88P-1對DPPH自由基清除的最適濃度為3 mg/mL。

圖9 N88P-1對DPPH自由基的清除能力Fig.9 Scavenging effect of N88P-1 on 1，1-dipheyl-2-picrydrazyl radicals

2.9 N88P-1對T淋巴細胞的增殖作用

T淋巴細胞簡稱T細胞，由骨髓中的造血干細胞遷移到胸腺內(nèi)分化成熟，成為具有免疫活性的T細胞。成熟的T細胞能與靶細胞特異性結(jié)合，直接殺傷靶細胞，或釋放淋巴因子，使得免疫效應(yīng)增強，主要參與機體的細胞免疫。T增殖效果如圖10所示，對照組為濃度為10 μg/mL的LPS。N88P-1在2.5～80 μg/mL的濃度范圍內(nèi)，與T細胞增殖效果呈正相關(guān)；N88P-1 濃度為 5～10 μg/mL 時，T 細胞增殖效果顯著（P＜0.05），在濃度為 20～80 μg/mL 時，T 細胞增殖效果為極顯著（P＜0.01）；當(dāng)N88P-1濃度在40 μg/mL 時達到最大值（P＜0.01），繼續(xù)增大濃度，細胞受到周圍環(huán)境的影響導(dǎo)致細胞增殖效果反而下降。

T細胞的增殖形態(tài)如圖11所示。 隨著N88P-1濃度的增大，細胞加速分裂，變大成團。在用40 μg/mL的N88P-1濃度刺激時，細胞成團最多且最大。

圖10 N88P-1對T細胞增殖的影響Fig.10 Effect of N88P-1 on the cell proliferation of T cell

圖11 N88P-1對T細胞形態(tài)的影響Fig.11 Effect the cell morphology of T cell by N88P-1

2.1 0 N88P-1對B淋巴細胞增殖的影響

B淋巴細胞來源于骨髓的多能干細胞，能夠分泌抗體，是體液免疫的主要介質(zhì)。B細胞的增值效果如圖12所示，對照組為10 μg/mL的LPS。N88P-1在濃度為2.5～10 μg/mL時，增殖效果顯著；在濃度為20～80 μg/mL的時，增殖效果達到極顯著 （P＜0.01）；在40 μg/mL的濃度增殖效果亦為最好。 從形態(tài)上看，B細胞呈規(guī)則的圓形，明顯的集簇生長。本研究的B細胞增殖形態(tài)如圖13所示，B細胞懸浮在培養(yǎng)孔中，生長狀態(tài)良好，受到N88P-1刺激后，細胞體積變大后聚成團，增殖能力旺盛。

激活巨噬細胞后能在抵御感染和抗腫瘤方面發(fā)揮著重要作用。本研究采用CCK-8法檢測巨噬細胞增殖效果如圖14所示，N88P-1濃度為2.5 μg/mL時，增殖并不顯著；濃度為5 μg/mL時增殖效果顯著（P＜0.05）；N88P-1 濃度繼續(xù)增加為 10～40 μg/mL時，N88P-1對巨噬細胞增殖效果為極顯著 （P＜0.01）；但是，當(dāng)N88P-1濃度為80 μg/mL時，增殖效果反而降低為顯著（P＜0.05）。

圖12 N88P-1對B細胞增殖的影響Fig.12 Effect of N88P-1 on the cell proliferation of B cell

巨噬細胞體積大，有偽足且有馬蹄狀單核，在細胞板中培養(yǎng)的時候易于沉降和貼壁。本研究巨噬細胞增殖形態(tài)如圖15所示。在N88P-1的刺激下，巨噬細胞伸出偽足，進行分裂；在圖15中可以看出，空白組的巨噬細胞多呈圓形；而N88P-1實驗組的巨噬細胞伸出偽足，只有少量的圓形細胞，提示N88P-1能有效的促進巨噬細胞的增殖作用。

圖13 N88P-1對B細胞形態(tài)的影響Fig.13 Effect the cell morphology of B cell by N88P-1

圖14 N88P-1對巨噬細胞增殖的影響Fig.14 Effect of N88P-1 on the cell proliferation of RAW264.7 cell

3 討論與結(jié)語

蛋白質(zhì)、核酸與多糖共同構(gòu)成人體內(nèi)三大物質(zhì)。蛋白質(zhì)與核酸的發(fā)展較為成熟，相比之下的多糖因復(fù)雜性和多樣性而發(fā)展較晚，因此，對多糖結(jié)構(gòu)鑒定都提出了巨大挑戰(zhàn)。本研究以南充市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院專利品種“南薯88”為對象，用熱水浸提法，DEAE-cellulose column進行柱層析分離純化后得到多糖純品（N88P-1）。分別進行高效凝膠滲透色譜（HPGPC），紅外光譜技術(shù)（IR）和核磁共振技術(shù)（NMR）等現(xiàn)代化技術(shù)對N88P-1進行了初步的結(jié)構(gòu)分析；結(jié)果顯示，N88P-1由半乳糖和甘露糖組成，且比例為1∶1。這是首次確定“南薯88”多糖（N88P-1）的單糖類型和含量，為進一步確定“南薯88”多糖（N88P-1）的精細結(jié)構(gòu)提供了很好的基礎(chǔ)。

圖15 N88P-1對巨噬細胞形態(tài)的影響Fig.15 Effect the cell morphology of RAW264.7 cell by N88P-1

活性氧產(chǎn)生于細胞或組織的正常生理代謝等過程，活性氧能夠?qū)Φ鞍踪|(zhì)、核酸等生物大分子產(chǎn)生損傷。本研究采用ABTS+和DPPH-檢測N88P-1的總抗氧化能力。結(jié)果顯示，一定范圍內(nèi)的N88P-1濃度具有清除ABTS+自由基的能力，且對ABTS自由基的清除能力強于對DPPH自由基的清除能力。當(dāng)N88P-1的質(zhì)量濃度為3 mg/mL時，對ABTS+和DPPH-自由基的清除能力均達到最高值。DPPH作為一種穩(wěn)定的自由基，可以捕獲其他的自由基。而N88P-1是一種高分子化合物，隨著質(zhì)量濃度的增加，糖鏈相互纏繞，很難與DPPH自由基反應(yīng)，因此可能導(dǎo)致DPPH自由基清除率降低。

免疫細胞中T細胞、B細胞和巨噬細胞在人體免疫系統(tǒng)中起著非常重要的作用。本研究分別用N88P-1激活T細胞、B細胞、巨噬細胞的增殖來調(diào)控免疫活性。N88P-1在20～80 mg/mL的質(zhì)量濃度下，對B細胞和T細胞增殖效果為極顯著 （P＜0.01）；在10～40 mg/mL的質(zhì)量濃度下，對巨噬細胞增殖效果為極顯著（P＜0.01），提示N88P-1對巨噬細胞的增殖作用強于對T淋巴細胞核B淋巴細胞的增殖作用。但值得注意的是，N88P-1在40 mg/mL的質(zhì)量濃度下對3種免疫細胞的增殖效果均達到最佳。

綜上，“南薯88”多糖（N88P-1）作為一類生物大分子，對不同類型自由基具有不同的清除效率，且對不同的免疫細胞具有不同的增殖效果，可以作為一種天然來源的抗氧化劑及免疫調(diào)控劑資源。但是關(guān)于“南薯88”多糖（N88P-1）的精細結(jié)構(gòu)及抗氧化作用和免疫調(diào)控作用的相關(guān)分子機制還有待于進一步研究。