益膽湯防治膽囊膽固醇結(jié)石作用機制及SCF/c-Kit信號通路分析

何守敏 王守銘 吳大慶 丁小鳳 傅軍 王梽 鄭清盛

【摘要】 目的：探討益膽湯防治膽囊膽固醇結(jié)石作用機制，分析SCF/c-Kit信號通路。方法：將60只豚鼠隨機均等分為A、B、C三組。其中A組行常規(guī)飼料飼養(yǎng)，B組給予含高膽固醇的飼料進行飼養(yǎng)，C組行高膽固醇的飼料+益膽湯飼養(yǎng)。喂養(yǎng)6周后處死豚鼠以檢測膽固醇結(jié)石生成情況。同時行Western blot法、RT-PCR法對小鼠膽組織中的c-Kit及SCF的含量進行檢測。結(jié)果：A組成石率低于C組，且兩組均低于B組（P<0.05）;B組膽固醇濃度及膽汁酸濃度高于C組，且兩組均高于A組（P<0.05），A組致石指數(shù)與C組較為一致，均顯著低于B組（P<0.05）;B組與A組豚鼠組織中，其c-Kit與SCF及GAPDH基因有效擴增，B組c-Kit與SCF的mRNA的表達明顯低于A組（P<0.05）。而C組在c-Kit與SCF蛋白表達上明顯高于B組，且均低于A組（P<0.05）。結(jié)論：益膽湯能夠有效提高豚鼠體內(nèi)SCF/c-Kit的表達，防治膽囊膽固醇結(jié)石效果較好。

【關(guān)鍵詞】 益膽湯 膽囊膽固醇結(jié)石 SCF/c-Kit信號通路

[Abstract] Objective： To study the prevention and treatment of gallbladder cholesterol calculus mechanism beneficial gall soup， analysis of SCF/c-Kit signaling pathways. Method： The equality of 60 guinea pigs were randomly divided into A， B， C three groups. The number control line of conventional breeding， group B was given feed containing high levels of cholesterol in breeding， feed line high cholesterol group C + breeding benefit bile soup. Six weeks after feeding guinea pigs were executed to detect cholesterol calculus formation. Line and Western blot method， PT-PCR method for small dept c-Kit and SCF levels in the organization for testing. Result： The composition of A stone rate was lower than that of group C， and the two groups were lower than that of group B （P<0.05）. Cholesterol and bile acid concentrations higher than group B， group C and two groups were higher than group A （P<0.05）， group A and C of stone index were more consistent and significantly lower than that of group B （P<0.05）. Group B and group A guinea pig in the organization， its c-Kit and SCF and GAPDH gene amplification effectively， the result shows， group B c-Kit with SCF mRNA expression were significantly lower than the control group （P<0.05）. While C-Kit and SCF protein expression in group C were significantly higher in group B， and were lower than that of group A （P<0.05）. Conclusion： The beneficial gall soup can effectively improve the expression of SCF/c-Kit in guinea pigs， the effect of prevention and treatment of gallbladder cholesterol calculus.

[Key words] Yidan Decoction Gallbladder cholesterol stone SCF/c-Kit signaling pathway

First-authors address： Peoples Hospital Affiliated to Fujian University of Traditional Chinese Medicine， Fuzhou 350001， China

脛骨創(chuàng)傷后骨髓炎骨缺損是由于創(chuàng)傷所引發(fā)的骨組織感染，特別是在青壯年群體中的發(fā)生率較高，已成為一個嚴重影響患者健康和生活質(zhì)量的公共衛(wèi)生問題[1-2]。當前脛骨創(chuàng)傷后骨髓炎骨缺損治療主要以手術(shù)為主，不同的手術(shù)治療方案對患者的術(shù)后恢復及臨床療效均存在一定的差異性[3]。據(jù)相關(guān)資料顯示，給予患者適宜的手術(shù)方案對其治療具有積極影響，但目前臨床上關(guān)于患者具體的手術(shù)方案仍待探討[4-5]。因此，筆者特選取筆者所在醫(yī)院就診的100例脛骨創(chuàng)傷后骨髓炎骨缺損患者展開隨機對照研究，對患者進行不同的手術(shù)治療，主要探討Ilizarov環(huán)形外固定與傳統(tǒng)清創(chuàng)內(nèi)固定治療脛骨創(chuàng)傷后骨髓炎骨缺損的有效性及安全性，并為臨床選擇適當治療方法提供依據(jù)，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2015年11月-2017年11月診治的100例脛骨創(chuàng)傷后骨髓炎骨缺損患者作為研究對象。納入標準：（1）患者經(jīng)臨床檢查均符合脛骨創(chuàng)傷后骨髓炎骨缺損相關(guān)診斷標準[6];（2）結(jié)合病史、實驗室檢查和影像學表現(xiàn)等即可明確診斷;（3）年齡25～60歲，性別不限。退出標準：（1）存在嚴重內(nèi)科疾病、惡性腫瘤以及慢性傳染性疾病者;（2）伴有近關(guān)節(jié)的骨缺損者;（3）意識模糊者;（4）有糖尿病及手術(shù)禁忌證者。采用隨機數(shù)字表法分為對照組50例和觀察組50例。對照組：男31例，女19例;年齡27～60歲，平均（45.31±2.42）歲;致傷原因：交通事故傷20例，墜落傷16例，其他14例。觀察組：男30例，女20例;年齡28～55歲，平均（45.97±2.65）歲;致傷原因：交通事故傷19例，墜落傷18例，其他13例。兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

首先所有患者均采用硬膜外麻醉，仰臥位，規(guī)范消毒并鋪巾。

對照組行傳統(tǒng)清創(chuàng)內(nèi)固定治療。首先取出原內(nèi)置物，清除壞死組織。以骨刀鑿除骨面貼附的骨痂及炎性纖維，拆除內(nèi)固定，徹底清創(chuàng)后，改為骨外固定架固定，骨髓腔置入沖洗引流管，縫合切口，處理創(chuàng)面，術(shù)畢。

觀察組行Ilizarov環(huán)形外固定技術(shù)進行治療。術(shù)前7 d內(nèi)需進行細菌培養(yǎng)及抗生素的藥敏試驗，同時還需以抗生素藥物進行預防性治療。徹底沖洗病灶部位并對硬化骨質(zhì)及斷端疤痕組織等病變部位進行徹底清除，清創(chuàng)后，安裝Ilizarov環(huán)形外固定器，固定時采用3～6枚直徑2.5 mm的全針及1～3枚直徑4.5 mm的半針，調(diào)整恢復患者的肢體長度。穿針時注意選用肌間隙，以避開血管神經(jīng)。手術(shù)全程遵循Ilizarov技術(shù)原則，根據(jù)通道穿針、術(shù)中DR透視機確認穿針位置。根據(jù)病灶位置和骨缺損部位不同，截骨線與穿針部位應相距至少1 cm。單節(jié)段截骨時采用微創(chuàng)閉合鉆孔截骨器，輕微扭轉(zhuǎn)Ilizarov外固定器以確定骨質(zhì)是否完全離斷，完全離斷后拉張鋼針，處理創(chuàng)面，術(shù)畢。術(shù)后繼續(xù)使用抗生素治療10 d，患者切口預后可指導膝關(guān)節(jié)及踝關(guān)節(jié)進行系統(tǒng)的功能鍛煉，并定期行X線檢查。

1.3 觀察指標及評價標準

（1）術(shù)后相關(guān)指標：骨延長區(qū)域礦化時間、骨延長長度、帶架時間、愈合指數(shù)。其中骨延長區(qū)域礦化時間是指骨延長至預定長度后開始，每4周拍1次X線片，觀察到延長段骨礦化與兩端骨密度相似，且延長段出現(xiàn)連續(xù)骨皮質(zhì)時間;骨延長長度采用X線片觀察患肢與健肢長度差;愈合指數(shù)為獲得1 cm骨延長所需要的治療天數(shù)，即愈合指數(shù)=總治療天數(shù)（d）/獲得的骨延長長度（cm）。（2）觀察兩組治療前后下肢功能：按照踝關(guān)節(jié)骨折復位放射學評價標準，對膝關(guān)節(jié)和踝關(guān)節(jié)可活動度進行評分，分值越高則恢復越好。（3）記錄治療期間有無再發(fā)骨折、外固定支架松動、術(shù)后下肢感覺及跟腱攣縮等并發(fā)癥發(fā)生情況。

1.4 統(tǒng)計學處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0統(tǒng)計學軟件進行分析和處理，術(shù)后療效指標等計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，安全性等計數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗，按α=0.05為檢驗水準，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 術(shù)后相關(guān)指標

觀察組骨延長區(qū)域礦化時間、骨延長長度、帶架時間、愈合指數(shù)均優(yōu)于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 下肢功能評分

治療前，兩組下肢功能各指標比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;治療后，觀察組的膝關(guān)節(jié)和踝關(guān)節(jié)功能評分均明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表2。

2.3 安全性

觀察組總并發(fā)癥發(fā)生率明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表3。

3 討論

隨著近年來交通、建筑事業(yè)的飛速發(fā)展，由直接暴力、間接暴力、高能量撞擊等因素導致的創(chuàng)傷性脛腓骨骨折且合并嚴重軟組織缺損的發(fā)生率逐年遞增，且多為開放性骨折類型，應而患者的大段脛腓骨極易污染導致慢性骨髓炎伴皮膚軟組織壞死，臨床治療難度較大，嚴重影響患者的生活質(zhì)量及身心健康[7-8]。因此，對脛骨創(chuàng)傷后骨髓炎骨缺損治療選擇合適的手術(shù)方案頗為關(guān)鍵。

筆者采用Ilizarov環(huán)形外固定與傳統(tǒng)清創(chuàng)內(nèi)固定治療脛骨創(chuàng)傷后骨髓炎骨缺損的療效和安全性進行比較?，F(xiàn)代醫(yī)學治療脛骨創(chuàng)傷后骨髓炎骨缺損清除壞死病灶是有效治療此病的前提條件，傳統(tǒng)清創(chuàng)內(nèi)固定是經(jīng)反復多次手術(shù)將創(chuàng)面內(nèi)感染控制后再行植骨以促進骨端愈合，但臨床治療周期長、存在較高的感染復發(fā)率[9]。因此，脛骨創(chuàng)傷后骨髓炎骨缺損的治療是臨床醫(yī)生面臨的一項難題。除長期應用抗生素外，手術(shù)治療是主要的措施[10]。Ilizarov環(huán)形外固定器為難治性骨髓炎骨缺損提供了一種全新的治療方式，對于許多難治性小腿脛骨骨髓炎、骨缺損病例的治療打開了一種全新的局面。自1951年蘇聯(lián)伊里扎洛夫首次介紹Ilizarov環(huán)形外固定器以來，Ilizarov環(huán)形外固定技術(shù)在骨科創(chuàng)傷、骨病、先天性畸形等疾病的治療中廣泛應用，是骨科領域里一個新的里程碑[11-12]。本文結(jié)果顯示：觀察組的骨延長區(qū)域礦化時間、骨延長長度、帶架時間及愈合指數(shù)均優(yōu)于對照組，說明通過Ilizarov環(huán)形外固定技術(shù)治療效果良好，因其手術(shù)創(chuàng)傷小，對局部血運影響小，受局部皮膚及軟組織的條件限制也較小，手術(shù)操作簡單，肢體延長是牽拉性組織再生的過程，考慮到神經(jīng)、血管、肌肉等軟組織對牽拉速度的順應性反應，以避免軟組織張力增加引起的不良反應，過快的延長會導致神經(jīng)、血管牽拉傷;而且一定程度的負重及關(guān)節(jié)功能鍛煉能夠促進骨的生長愈合。另外從下肢功能評分結(jié)果來看，經(jīng)過治療后患者的膝關(guān)節(jié)、踝關(guān)節(jié)功能評分均較治療前顯著增加，說明應用Ilizarov環(huán)形外固定器能幫助患者早期離床活動，減少痛苦，減輕關(guān)節(jié)的強直，以提高療效;除此之外，從本文并發(fā)癥結(jié)果看出，觀察組的再發(fā)骨折、外固定支架松動、術(shù)后下肢感覺及跟腱攣縮總發(fā)生率均低于采用傳統(tǒng)清創(chuàng)固定方法的對照組，由此表明，對患者采取Ilizarov環(huán)形外固定器有助于減少并發(fā)癥，提高安全性，更易被患者所接受。

綜上所述，Ilizarov環(huán)形外固定與傳統(tǒng)清創(chuàng)內(nèi)固定治療脛骨創(chuàng)傷后骨髓炎骨缺損患者中各有其優(yōu)勢，但后者臨床療效更顯著，不僅有效縮短骨延長區(qū)域礦化時間和帶架時間，術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率低等優(yōu)點，可作為脛骨創(chuàng)傷后骨髓炎骨缺損的理想方法。

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（收稿日期：2019-06-10） （本文編輯：郎序瑩）