清熱燥濕方保留灌腸對大腸濕熱型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型Th1/Th2的影響

鄭鳳萍 羅巨利 王愛華

【摘要】 目的：探究清熱燥濕方保留灌腸對大腸濕熱型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型Th1/Th2的影響。方法：選取SD成年大鼠40只，SPF級，體重180～200 g，湖南中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供，雌雄各半，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機分為四組：A組（正常組）、B組（空白對照組）、C組（治療組）、D組（對照組），每組10只。A組不建模，B、C、D組建立潰瘍性結(jié)腸炎模型，B組不使用藥物，C組使用清熱燥濕方保留灌腸，D組使用柳氮磺吡啶灌腸。治療2周后觀察血清TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10水平變化。結(jié)果：A組TNF-α、IL-1β均低于B、D組，IL-4、IL-10、Th1/Th2均高于B、D組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），A組上述指標與C組比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;C組TNF-α、IL-1β均低于B、D組，IL-4、IL-10、Th1/Th2均高于B、D組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論：清熱燥濕方保留灌腸對大腸濕熱型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠具有炎癥因子調(diào)節(jié)作用。

【關(guān)鍵詞】 清熱燥濕方; 大腸濕熱型; 潰瘍性結(jié)腸炎; 大鼠; 炎癥

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.27.078 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2019）27-0-02

Effect of Retention Enema with Qingre Zaoshi Prescription on Th1/Th2 in Rats with Ulcerative Colitis of Damp-heat Type of Large Intestine/ZHENG Fengping，LUO Juli，WANG Aihua.//Chinese and Foreign Medical Research，2019，17（27）：-182

【Abstract】 Objective：To explore the effect of retention enema with Qingre Zaoshi Prescription on Th1/Th2 in rats with ulcerative colitis of damp-heat type of large intestine.Method：Forty adult SD rats，SPF grade，weighing 180-200 g，were randomly divided into four groups：group A（normal group），group B（blank control group），group C（treatment group） and group D（control group），with 10 rats in each group.Group A did not model ulcerative colitis.Group B，C and D established ulcerative colitis model.Group B did not use drugs.Group C used retention enema with Qingre Zaoshi Prescription.Group D used sulfasalazine enema with Sulfasalazine.Serum levels of TNF-α，IL-1β，IL-4 and IL-10 were observed after 2 weeks of treatment.Result：The levels of TNF-α and IL-1β in group A were significantly lower than those in groups B and D，IL-4，IL-10 and Th1/Th2 were significantly higher than those in group B and D（P<0.05）.There was no significant difference among the above indicators compared with group C（P>0.05）.TNF-αand IL-1βin group C were significantly lower than those in group B and D，and IL-4，IL-10 and Th1/Th2 were significantly higher than those in group B and D（P<0.05）.Conclusion：Retention enema with Qingre Zaoshi Prescription can regulate inflammatory factors in rats with ulcerative colitis of damp-heat type of large intestine

【Key words】 Qingre Zaoshi Prescription; Damp-heat type of large intestine; Ulcerative colitis; Rats; Inflammation

First-authors address：First Hospital Affiliated to Hunan University of Traditional Chinese Medicine，Changsha 410007，China

潰瘍性結(jié)腸炎作為一種炎性腸病，病變以結(jié)直腸黏膜及黏膜下層為主，常表現(xiàn)為腹瀉、腹痛、黏液膿血便等。潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機制不明，但普遍認為免疫功能紊亂是主要致病因素，治療以調(diào)節(jié)機體紊亂機制為主[1-2]。中醫(yī)上認為潰瘍性結(jié)腸炎歸屬于“腸擗”“泄瀉”范疇，以本虛標實為主要病癥，脾胃虛弱或感受外邪，導(dǎo)致出現(xiàn)脾虛兼濕毒之邪內(nèi)蘊所致[3-4]。有研究表明清熱燥濕方對潰瘍性結(jié)腸炎患者具有顯著療效。但查閱文獻發(fā)現(xiàn)對于清熱燥濕方對潰瘍性結(jié)腸炎患者的作用機制的報道相對較少，因此本研究通過對SD大鼠建立潰瘍性結(jié)腸炎模型，探究清熱燥濕方保留灌腸對Th1/Th2的影響，具體如下。

1 資料與方法

1.1 實驗動物及建模方案

選取湖南中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供成年SD大鼠40只，均為SPF級，體重180～200 g，雌雄各半，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機分為四組：A組（正常組）、B組（空白對照組）、C組（治療組）、D組（對照組），每組10只。A組不建模，B、C、D組建立潰瘍性結(jié)腸炎模型，具體如下：采取高脂、高糖飼料喂養(yǎng)，平均溫度（30±2）℃，濕度80%～95%，持續(xù)時間10 d造成濕熱型。第11天采用3%葡聚糖硫酸鈉自由食用7 d建立潰瘍性結(jié)腸炎模型，總歷時17 d。在B、C、D組中隨機挑選2只SD大鼠，采用7%水合氯醛麻醉后，取結(jié)腸組織病理學分析，證實造模成功。

1.2 方法

A組和造模成功后B組常規(guī)喂養(yǎng)同時采用生理鹽水灌腸;

C組采用清熱燥濕方灌腸，清熱燥濕方（苦參15 g，黃芩15 g，白頭翁20 g，地榆20 g，白及12 g，石榴皮15 g，五倍子15 g）取400 ml清水浸泡20 min后煎煮30 min后過濾2次，按照實驗動物與成人劑量體型系數(shù)換算法計算大鼠每日灌腸用量約為20 ml;D組采用柳氮磺胺吡啶（上海福達制藥有限公司，0.25 g，批號201310001）0.5 g/（kg·d），計算方法同上，進行灌腸。

1.3 觀察指標

四組均連續(xù)灌腸2周后采用7%水合氯醛麻醉后取腹主動脈血，在3 000 r/min離心機下離心15 min，去上層清液采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清中TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10表達水平。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件包對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料以（x±s）表示，組間兩兩比較若方差齊時選擇LSD法，方差不齊時選擇Tamhane法進行方差分析;計數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

A組TNF-α、IL-1β均低于B、D組，IL-4、IL-10、Th1/Th2均高于B、D組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），A組上述指標與C組比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;C組TNF-α、IL-1β均低于B、D組，IL-4、IL-10、Th1/Th2均高于B、D組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

3 討論

有研究表明，在促炎癥因子與抗炎癥因子的共同作用下，機體可維持正常的免疫動態(tài)平衡，一旦出現(xiàn)應(yīng)激或者外界因素的影響，動態(tài)平衡破壞會導(dǎo)致出現(xiàn)炎性腸病[5-6]。清熱燥濕方在臨床上已廣泛得到應(yīng)用，并在炎性腸病的治療中臨床效果顯著，因此理論上清熱燥濕方對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠免疫紊亂具有一定改善作用[7-8]。Th細胞作為T細胞的輔助細胞，Th1以細胞免疫為主，Th2以體液免疫為主，Th1/Th2在體內(nèi)處于動態(tài)平衡，當出現(xiàn)炎癥時會出現(xiàn)偏離，出現(xiàn)免疫反應(yīng)，當機體炎癥消失后會分泌抑制因子，防止免疫擴大損傷正常機體[9]。清熱燥濕方中以白頭翁為君藥，苦能清熱、溫能燥濕為主;苦參、地榆為臣藥，配合君藥共奏清熱利濕功效;白及、石榴皮、五倍子、黃芩共為佐藥，增強收斂止瀉、清熱利濕之功，諸藥合用，對潰瘍性結(jié)腸炎具有一定臨床意義[10]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，建模后炎癥因子TNF-α、IL-1β均顯著升高，抗炎癥因子IL-4、IL-10顯著降低，因此出現(xiàn)C組Th1/Th2水平顯著低于A組。有研究表明柳氮磺胺吡啶對炎性腸病，灌腸時在腸道微生物作用下分解為5-氨基水楊酸，該物質(zhì)具有一定抗菌消炎和免疫抑制作用，但該藥起效時間較短，多以短期用藥為主[11-12]。本研究發(fā)現(xiàn)C組TNF-α、IL-1β均低于D組，IL-4、IL-10、Th1/Th2均高于D組，表明清熱燥濕方對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠抗炎機制強于柳氮磺胺吡啶，分析原因在于柳氮磺胺吡啶起效時間較短，綜合療效不如清熱燥濕方，有利于穩(wěn)定Th1/Th2動態(tài)平衡。

綜上所述，清熱燥濕方對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠抗炎機制可能與促進Th1/Th2平衡相關(guān)。

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（收稿日期：2019-05-05） （本文編輯：馬竹君）