葉酸代謝基因多態(tài)性及血漿同型半胱氨酸水平與新生兒早產(chǎn)、出生體重的關(guān)系

王瑞 吳淑貞 陳娟 李藝英

[摘要]目的 探討葉酸代謝基因多態(tài)性及血漿同型半胱氨酸（Hcy）水平與新生兒早產(chǎn)、出生體重的關(guān)系。方法 選取2016年1月～2017年12月在我院產(chǎn)檢并最終在我院分娩的孕婦344例作為研究對象，于孕早期采集口腔黏膜標(biāo)本進(jìn)行檢測，根據(jù)基因檢測結(jié)果，對葉酸代謝障礙遺傳風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行分級(jí)，將其分為中/高風(fēng)險(xiǎn)組182例，無/低風(fēng)險(xiǎn)組162例，同時(shí)采血檢測其Hcy水平。分析Hcy水平與新生兒早產(chǎn)、出生體重的相關(guān)性，比較兩組的早產(chǎn)發(fā)生率等。結(jié)果 Hcy水平與新生兒出生體重成正相關(guān)（r=0.143，P=0.008）;MTRR A66G基因型與新生兒早產(chǎn)成正相關(guān)（r=0.126，P=0.019）;基因型總風(fēng)險(xiǎn)與新生兒早產(chǎn)成正相關(guān)（r=0.120，P=0.026）。中/高風(fēng)險(xiǎn)組的早產(chǎn)率高于無/低風(fēng)險(xiǎn)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.027）。分娩巨大兒的孕婦Hcy水平高于分娩正常出生體重兒及低出生體重兒的孕婦，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;葉酸代謝障礙不同風(fēng)險(xiǎn)程度出生體重分布比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.483）。結(jié)論 葉酸利用能力與早產(chǎn)具有相關(guān)性，葉酸代謝障礙中/高風(fēng)險(xiǎn)組的早產(chǎn)發(fā)生率顯著升高;新生兒出生體重受孕母Hcy水平影響，孕母Hcy水平與新生兒出生體重成正相關(guān)。

[關(guān)鍵詞]葉酸代謝基因多態(tài)性;早產(chǎn);同型半胱氨酸;出生體重

[中圖分類號(hào)] R714.1? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-4721（2019）2（b）-0004-04

早產(chǎn)指妊娠滿28周至不足37周（196～258 d）間分娩者。此時(shí)娩出的新生兒稱為早產(chǎn)兒，體重為1000～2499 g。早產(chǎn)兒各器官發(fā)育尚不夠健全，出生孕齡越小，體重越輕，其預(yù)后越差。早產(chǎn)兒容易在新生兒期發(fā)生嚴(yán)重疾病或死亡，我國出生1歲以內(nèi)死亡的嬰兒約2/3為早產(chǎn)兒[1]。早產(chǎn)兒如果得不到適當(dāng)治療，幸存下來的嬰兒將面臨更高的終身殘疾和低生活質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)。雖然世界衛(wèi)生組織多次提出關(guān)于改善早產(chǎn)結(jié)果的干預(yù)措施建議，但目前有關(guān)早產(chǎn)的預(yù)防和改善的結(jié)果并不令人滿意，調(diào)查顯示發(fā)展中國家早產(chǎn)發(fā)生率約為15%，我國的早產(chǎn)發(fā)生率為5%～15%，發(fā)達(dá)國家控制較好，美國為12%～13%，其他發(fā)達(dá)國家為5%～9%，但近年來有呈上升趨勢[2]。早產(chǎn)的病因、發(fā)病機(jī)制尚未闡明。隨著分子醫(yī)學(xué)的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)早產(chǎn)可能通過遺傳和環(huán)境的相互作用而發(fā)病[3-4]，其中葉酸代謝障礙就是其中的一個(gè)研究熱點(diǎn)。一些酶基因的突變可影響體內(nèi)活性葉酸水平及同型半胱氨酸（Hcy）水平，造成葉酸代謝異常和葉酸利用能力下降[5]。一些研究表明，Hcy的積累成為各種發(fā)育障礙的危險(xiǎn)因素[6]?；蚨鄳B(tài)性與葉酸、Hcy及早產(chǎn)發(fā)生、出生體重的關(guān)系成為近年產(chǎn)科及生化、遺傳學(xué)等領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。本研究旨在探討葉酸代謝基因多態(tài)性及血漿Hcy水平與早產(chǎn)、出生體重的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月～2017年12月在我院產(chǎn)檢并最終在我院分娩的單胎妊娠的孕婦344例作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①漢族婦女;②年齡18～45歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①夫妻雙方有遺傳病史;②孕婦有宮頸手術(shù)史;③孕婦有吸煙史。本研究已經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，入組女性均自愿參加并簽署知情同意書。于孕早期（8～12周）采集口腔黏膜標(biāo)本，同時(shí)采血檢測其Hcy水平，根據(jù)3個(gè)DNA 單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（MTHFR C677T、 A1298C 和 MTRR A66G）的檢測結(jié)果分為高度風(fēng)險(xiǎn)、中度風(fēng)險(xiǎn)、低風(fēng)險(xiǎn)和未發(fā)現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)4級(jí)，其中，中/高風(fēng)險(xiǎn)組182例;無/低風(fēng)險(xiǎn)組162例。中/高風(fēng)險(xiǎn)組中，年齡21～43歲，平均（29.36±3.88）歲;孕齡30～41周，平均（38.60±1.57）周;體重指數(shù)（BMI）17.90～36.59 kg/m2，平均（25.79±4.01）kg/m2;高血壓5例，糖尿病22例。無/低風(fēng)險(xiǎn)組中，年齡22～43歲，平均（29.80±4.68）歲;孕齡31～41周，平均（38.75±1.26）周;BMI 16.23～40.98 kg/m2，平均（25.83±4.27）kg/m2;高血壓7例，糖尿病23例。兩組的年齡、孕齡、BMI，高血壓、糖尿病發(fā)生率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 葉酸代謝障礙遺傳檢測與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估? 采集受檢者的口腔黏膜上皮細(xì)胞，利用柱式抽提試劑盒抽提樣本DNA，采用Taqman-MGB技術(shù)，檢測MTHFR C677T、A1928C和MTRR A66G的基因多態(tài)性。

1.2.2 血漿Hcy測定? 采集受檢者口腔黏膜上皮細(xì)胞當(dāng)天，采取受檢者靜脈血5 ml采用雅貝公司的IMX全自動(dòng)快速免疫分析儀測定血漿Hcy水平。

1.3 觀察指標(biāo)

新生兒早產(chǎn)發(fā)生率和新生兒出生體重。根據(jù)測量的新生兒出生體重值，可分為低出生體重、正常體重和巨大兒，其中低出生體重是指出生體重<2500 g者，2500 g≤出生體重<4000 g者為正常體重，出生體重≥4000 g者則為巨大兒。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用Pearson相關(guān)分析統(tǒng)計(jì)連續(xù)變量間的相關(guān)性;計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)或方差分析;計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同葉酸代謝基因型、Hcy與早產(chǎn)、出生體重的相關(guān)性

血漿Hcy水平與出生體重成正相關(guān)（r=0.143，P=0.008），MTRR A66G基因型及基因型總風(fēng)險(xiǎn)與早產(chǎn)呈成相關(guān)性（r=0.126，P=0.019;r=0.12，P=0.026）（表1）。

2.2 不同基因型下血漿Hcy水平的比較

葉酸代謝不同基因型下血漿Hcy水平比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說明葉酸代謝不同基因型對血漿Hcy水平無影響。根據(jù)基因型推測出的葉酸代謝障礙總風(fēng)險(xiǎn)也同樣對血漿Hcy水平無影響（表 2）。

2.3 早產(chǎn)危險(xiǎn)因素的單因素分析

早產(chǎn)者血漿Hcy水平低于足月產(chǎn)者，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.186）。葉酸代謝障礙中/高風(fēng)險(xiǎn)組的早產(chǎn)發(fā)生率為28.0%，高于無/低風(fēng)險(xiǎn)組的17.9%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.027），葉酸代謝高/中風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生早產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)是低/無風(fēng)險(xiǎn)的1.8倍（OR=1.8）（表3）。

2.4 新生兒出生體重影響因素的單因素分析

分娩巨大兒的孕婦Hcy水平高于分娩正常出生體重兒及低出生體重兒的孕婦，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;葉酸代謝障礙不同風(fēng)險(xiǎn)程度出身體重分布比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.483）（表4）。

3討論

葉酸是細(xì)胞生長和分裂的一種基本維生素，但不能在人體中合成，因此必須從外界獲取。獲取的葉酸在體內(nèi)主要通過甲基化和轉(zhuǎn)硫兩種方式代謝，在葉酸代謝途徑中涉及的一些酶的基因多態(tài)性與神經(jīng)管缺陷、心血管疾病、唐氏綜合征、自發(fā)性流產(chǎn)、淋巴細(xì)胞白血病、乳腺癌、胃癌、食管癌、阿爾茨海默病和其他疾病有關(guān)[7-9]。MTHFR是一種與葉酸代謝有關(guān)的速率限制酶，它催化5-亞甲基四氫葉酸及10-亞甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)化為5-甲基四氫葉酸，并繼而轉(zhuǎn)化為Hcy和甲硫氨酸[10]。目前已經(jīng)確定了近20個(gè)基因突變，最常見的MTHFR突變包括C677T和A1298C，該基因突變將導(dǎo)致酶活性降低。由于個(gè)體遺傳體質(zhì)差異的存在，有一部分人由于MTHFR、MTRR基因發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)突變而導(dǎo)致其對葉酸的利用能力降低，使不同的孕婦補(bǔ)充等量葉酸后，體內(nèi)的葉酸活性產(chǎn)物濃度卻存在差異[11]。

多項(xiàng)研究表明，MTHFR、MTRR基因多態(tài)性是葉酸代謝障礙發(fā)生的遺傳易感性因素。杜景云等[2]對440例孕婦MTHFR活性的檢測及其等位基因與基因型頻率分析，發(fā)現(xiàn)早產(chǎn)臨產(chǎn)孕婦組MTHFR活性遠(yuǎn)低于健康孕婦組（P<0.001）。所有5個(gè)單核苷酸多態(tài)性（SNPs）（rs4846049、rs1476413、rs180131、rs180133、rs9651118）基因型分布都符合 Hardy-Weinberg平衡，其中rs1801131和rs180133在早產(chǎn)臨產(chǎn)孕婦組與同孕周健康孕婦組的基因型分布有顯著差異。但Wang等[12]的研究團(tuán)隊(duì)研究了11個(gè)涉及葉酸代謝和早產(chǎn)的基因中12個(gè)SNPs之間的聯(lián)系，發(fā)現(xiàn)與葉酸代謝途徑相關(guān)的12個(gè)SNPs基因型分布中沒有一個(gè)顯示出與早產(chǎn)具有顯著差異，在這項(xiàng)研究中篩選的12個(gè)SNPs并不是早產(chǎn)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

本研究通過研究葉酸代謝基因多態(tài)性與早產(chǎn)及出生體重的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)葉酸代謝障礙高風(fēng)險(xiǎn)者的早產(chǎn)發(fā)生率明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義且通過早產(chǎn)危險(xiǎn)因素單因素分析發(fā)現(xiàn)，葉酸代謝障礙中/高風(fēng)險(xiǎn)組的早產(chǎn)發(fā)生率為28.0%，高于無/低風(fēng)險(xiǎn)組的17.9%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.027），葉酸代謝高/中風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生早產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)是低/無風(fēng)險(xiǎn)的1.8倍（OR=1.8）。因此可通過孕早期檢查葉酸代謝障礙，及早發(fā)現(xiàn)葉酸代謝障礙風(fēng)險(xiǎn)者，并為高風(fēng)險(xiǎn)及中風(fēng)險(xiǎn)孕婦提供補(bǔ)充葉酸方案預(yù)防早產(chǎn)，改善妊娠結(jié)局及新生兒預(yù)后。同時(shí)，發(fā)現(xiàn)MTRR A66G基因型與早產(chǎn)具有相關(guān)性。鑒于本研究納入的樣本數(shù)量有限、地域有限制，該結(jié)論仍需要擴(kuò)大樣本量、嚴(yán)控?cái)?shù)據(jù)質(zhì)量進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證研究。

另外，本研究發(fā)現(xiàn)，葉酸代謝障礙不同風(fēng)險(xiǎn)程度下出生體重分布比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但孕期母血Hcy水平與新生兒體重成正相關(guān)。根據(jù)文獻(xiàn)資料，孕期母血Hcy水平與胎兒生長的關(guān)系是有爭議的[13-18]。最早研究Hcy與胎兒生長受限關(guān)系的團(tuán)隊(duì)是Burke等[14]，他們的研究結(jié)論是高Hcy血癥并不會(huì)導(dǎo)致胎兒生長受限發(fā)生率增高。加拿大學(xué)者Infante-Rivard等[15]提出了不同的觀點(diǎn)，其用2年時(shí)間進(jìn)行了一項(xiàng)病例對照研究，發(fā)現(xiàn)孕期母血Hcy水平與新生出生體重成負(fù)相關(guān)。然而，國內(nèi)學(xué)者賴毓冕[16]的研究報(bào)道，新生兒出生體重受孕期母血Hcy水平影響，早產(chǎn)孕婦血漿Hcy水平升高會(huì)顯著增加分娩小于胎齡兒的危險(xiǎn)。國外學(xué)者Yeter等[17]的研究結(jié)果亦發(fā)現(xiàn)胎兒生長受限組的產(chǎn)婦血漿Hcy水平與對照組相比顯著升高。但該兩項(xiàng)研究前者是通過研究早產(chǎn)孕婦血漿Hcy水平，后者則是在產(chǎn)后24 h內(nèi)檢測的母血Hcy水平，與本研究方案均不一樣。近期韓國學(xué)者Choi等[18]的一項(xiàng)關(guān)于孕婦血清Hcy的前瞻性研究，通過監(jiān)測孕早中晚期的血漿Hcy水平，并追蹤孕婦及新生兒結(jié)局，發(fā)現(xiàn)在孕期母血Hcy水平和孕產(chǎn)婦或新生兒結(jié)局之間未觀察到顯著的關(guān)聯(lián)。以上各個(gè)研究結(jié)果的不一致可能與血漿Hcy水平受影響因素多、研究對象背景不同、檢測方法不一致、孕期母血Hcy水平正常參考值不統(tǒng)一、高Hcy血癥定義無法界定有關(guān)?；谶@一點(diǎn)，本研究認(rèn)為，Hcy水平與新生兒出生體重的關(guān)系還需要進(jìn)一步大樣本的研究來闡明。

通過本研究發(fā)現(xiàn)，葉酸代謝障礙中/高風(fēng)險(xiǎn)組的早產(chǎn)發(fā)生率高于無/低風(fēng)險(xiǎn)組，葉酸代謝高/中風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生早產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)是低/無風(fēng)險(xiǎn)的1.8倍，且孕婦MTRR A66G基因型與早產(chǎn)存在顯著相關(guān)性;孕期母血Hcy水平與新生兒體重成正相關(guān)。因此，對于有葉酸缺乏，尤其伴有編碼MTRR的基因突變的孕婦建議及時(shí)補(bǔ)充葉酸，糾正葉酸缺乏，將有利于預(yù)防早產(chǎn)的發(fā)生，具有重要的優(yōu)生學(xué)意義。

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（收稿日期：2018-08-31? 本文編輯：許俊琴）