降溫方式對(duì)鴨梨采后FAD及LOX基因表達(dá)及其褐變的影響

樊曉嵐，李月圓，張引引，韓云云，李 玲，閆師杰,*，肖麗霞*

（1.天津農(nóng)學(xué)院園藝園林學(xué)院，天津 300384；2.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山西 太谷 030801；3.天津農(nóng)學(xué)院食品科學(xué)與生物工程學(xué)院，天津 300384；4.天津市農(nóng)副產(chǎn)品深加工技術(shù)工程中心，天津 300384；5.揚(yáng)州大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225127）

鴨梨（Pyrus bretschneideri Rehd cv. Yali）是薔薇科梨屬植物，因果柄突起形似鴨頭而得名，屬中國(guó)白梨[1]。鴨梨屬耐貯運(yùn)梨品種，適時(shí)（9月中旬）采后適當(dāng)處理并貯于0 ℃可延長(zhǎng)貯藏期至次年的5～6月份，但是流通環(huán)節(jié)中發(fā)生的果心褐變現(xiàn)象（黑心病）很大程度影響了其商品價(jià)值[2-3]。鴨梨在入庫(kù)后30～50 d開(kāi)始出現(xiàn)果心褐變，至150～180 d時(shí)褐變大規(guī)模爆發(fā)[4]，其中30～50 d出現(xiàn)的褐變稱(chēng)為早期褐變，此時(shí)鴨梨果心部位出現(xiàn)少量褐變[5]，但果肉仍為雪白色，認(rèn)為是機(jī)體組織冷耐受能力不足引起的低溫傷害，而貯藏晚期150～180 d褐變組織逐漸發(fā)展至果肉部位，直至果實(shí)組織全部褐變，完全失去銷(xiāo)售價(jià)值，此時(shí)發(fā)生的褐變多歸納為衰老造成的機(jī)體紊亂。在一些對(duì)植物抗冷品種選育的研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)植物細(xì)胞膜脂中不飽和脂肪酸（unsaturated fatty acids，UFA）含量高時(shí)，機(jī)體表現(xiàn)出對(duì)低溫的適應(yīng)性[6]。同時(shí)在一些對(duì)易發(fā)生冷害熱帶水果的研究中也發(fā)現(xiàn)，隨冷藏時(shí)間延長(zhǎng)，機(jī)體UFA與飽和脂肪酸（saturated fatty acid，SFA）的比率降低，認(rèn)為UFA含量與冷害發(fā)生密切相關(guān)[7]。脂肪酸去飽和酶（fatty acid desaturase，F(xiàn)AD）能催化機(jī)體內(nèi)SFA特定位置形成雙鍵以形成UFA，在一些模式作物中過(guò)表達(dá)ω-3FAD可以大大提高植株中UFA含量[8]，從而顯著提高其抗冷性[9]。對(duì)桃果實(shí)的研究顯示，ω-3FAD基因轉(zhuǎn)錄本含量的下降是果實(shí)冷害發(fā)生的重要原因[10]。另外，脂氧合酶（lipoxygenase，LOX）在高等植物中存在較多，其能催化一些多不飽和脂肪酸（一般是順,順-1,4戊二烯結(jié)構(gòu)）轉(zhuǎn)變?yōu)镾FA，參與了機(jī)體多種氧化、過(guò)氧化作用，被認(rèn)為是調(diào)控機(jī)體成熟衰老的關(guān)鍵酶[11-12]。楊青珍[13]研究了獼猴桃以?xún)煞N降溫方式降至貯藏溫度后，貯藏期間其冷害與LOX活性的關(guān)系。目前關(guān)于ω-3FAD的研究多集中在番茄[14]、桃[15]、香蕉[16]、石榴[17]等果實(shí)采后貯藏中的參與機(jī)制等，但在鴨梨中鮮見(jiàn)報(bào)道；LOX表達(dá)與鴨梨褐變形成的相關(guān)性已得到證實(shí)，但其作用機(jī)制仍不清楚。

因此本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)研究不同方法降溫后鴨梨貯藏期間果心褐變指數(shù)、果心脂肪酸組成、FAD基因表達(dá)情況、LOX活力與LOX基因表達(dá)情況，從抗冷性角度解釋緩慢降溫減少鴨梨褐變的深層機(jī)理，為鴨梨采后貯藏研究提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

鴨梨采自河北省石家莊市深州市大城北村，于2015年9月13日采摘（根據(jù)農(nóng)戶(hù)大量采收經(jīng)驗(yàn)，9月中旬為適時(shí)采收），選擇單果質(zhì)量約（230±10）g、無(wú)蟲(chóng)害、無(wú)機(jī)械損傷的果實(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。采摘后套網(wǎng)套裝入內(nèi)襯微孔膜（大小80 cm×75 cm、厚度0.05～0.06 mm、孔徑15～20 μm，由國(guó)家農(nóng)產(chǎn)品保鮮工程技術(shù)研究中心生產(chǎn)），分裝60 箱，每箱25 個(gè)果實(shí)。將實(shí)驗(yàn)材料用廂式貨車(chē)裝載，常溫運(yùn)輸?shù)教旖蜣r(nóng)學(xué)院。

常用化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純；反轉(zhuǎn)錄試劑盒（RR047A PrimeScript? RT reagent Kit with gDNA Eraser）、熒光定量試劑盒（RR820A TB Green? Premix Ex Taq? II） 寶日醫(yī)生物技術(shù)（北京）有限公司；引物由上海生工公司合成。

1.2 儀器與設(shè)備

Thermo 2000c型紫外分光光度計(jì) 美國(guó)Thermo Fisher Scientific科技有限公司；PX2聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）儀 德國(guó)Thermo公司；LX-200迷你離心機(jī) 海門(mén)市其林貝爾儀器公司；CFX Connect溫度梯度定量PCR儀、ChemiDoc X RST凝膠成像儀 美國(guó)Bio-Rad公司；A11 BS25分析研磨機(jī)德國(guó)IKA公司；雪花狀制冰機(jī) 上海迭戈生物科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理

分別采用急速降溫和緩慢降溫對(duì)鴨梨進(jìn)行處理。30 箱急速降溫處理（0 ℃預(yù)冷24 h，此時(shí)微孔膜敞開(kāi)）后，直接放入（0.0±0.5）℃貯藏（此時(shí)微孔膜蓋上）；另外30 箱緩慢降溫處理果實(shí)于12 ℃預(yù)冷24 h，待果品溫度為12 ℃開(kāi)始降溫，每5 d降2 ℃，共30 d降至0 ℃貯藏。每貯藏30 d進(jìn)行一次實(shí)驗(yàn)，隨機(jī)從每個(gè)處理分別選取45 個(gè)果實(shí)，30 個(gè)用于觀察果心褐變情況，另15 個(gè)取果心組織進(jìn)行液氮冷凍，并于-80 ℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩①A藏0 d的鴨梨果實(shí)（即為剛采摘的新鮮鴨梨）相應(yīng)處理作為對(duì)照材料。

1.3.2 果心褐變指數(shù)測(cè)定

熟悉常用量具的性能和使用方法，掌握產(chǎn)品各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)，嚴(yán)格執(zhí)行企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、檢驗(yàn)規(guī)程，進(jìn)行產(chǎn)品加工過(guò)程的質(zhì)量檢驗(yàn)和控制，以及產(chǎn)品的實(shí)驗(yàn)和測(cè)試，對(duì)生產(chǎn)加工過(guò)程中出現(xiàn)的產(chǎn)品質(zhì)量問(wèn)題進(jìn)行處理和分析，并及時(shí)反饋，針對(duì)現(xiàn)場(chǎng)做好制程解析，并進(jìn)行改善活動(dòng)，嚴(yán)格執(zhí)行各項(xiàng)規(guī)章制度和工作紀(jì)律，樹(shù)立服務(wù)生產(chǎn)的意識(shí)。

隨機(jī)選擇的30 個(gè)果實(shí)，每10 個(gè)為一組，共3 組。沿果實(shí)赤道部位橫切，依據(jù)果心橫切面褐變面積和程度劃分褐變級(jí)別，褐變級(jí)別與計(jì)算方法參考何利華等[18]的方法。

1.3.3 鴨梨果心部位脂肪酸含量的測(cè)定與雙鍵指數(shù)的計(jì)算

果心組織脂肪酸的提取和含量測(cè)定參考何子順等[19]的方法。雙鍵指數(shù)（double binding index，DBI）計(jì)算參考Shen Wenyun等[20]的方法。

1.3.4 LOX活力的測(cè)定

LOX酶液制備及活力測(cè)定參照閆師杰等[2]方法。以每毫克果肉每分鐘在234 nm波長(zhǎng)處吸光度變化0.01為一個(gè)酶活力單位（U），單位為U/mg。

1.3.5 鴨梨果心部位總RNA的提取及檢測(cè)

參考何利華[18]、Gasic[21]等的方法提取RNA，使用核酸蛋白儀測(cè)定波長(zhǎng)260 nm和280 nm處吸光度，檢測(cè)總RNA純度；經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA完整性。如果電泳圖完整且OD260nm/OD280nm均在1.9～2.1之間，說(shuō)明提取的總RNA質(zhì)量高，適合用于下一步實(shí)驗(yàn)。

引物參考美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心（National Center for Biotechnology Information，NCBI）登錄的中國(guó)白梨基因組信息，使用Primer premier 5軟件在FAD1、FAD2、FAD3基因保守區(qū)設(shè)計(jì)一對(duì)跨內(nèi)含子引物；LOX引物參照本實(shí)驗(yàn)室已獲得的鴨梨LOX片段序列設(shè)計(jì)[22]；內(nèi)參基因引物為鴨梨PbActin。實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄（quantitative real time reverse transcription， qRT）-PCR引物序列見(jiàn)表1。

表 1 qRT-PCR特異性引物序列Table 1 Speci fi c primer sequences used for qRT-PCR

1.3.7 cDNA第一條鏈獲取與熒光定量PCR

使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒獲取cDNA第一條鏈，第一步去除基因組DNA，反應(yīng)體系包括500 ng/μL RNA、2 μL 5×gDNA Eraser Buffer、1 μL gDNA Eraser，加RNase Free dH2O至10 μL，42 ℃孵育2 min；第二步反轉(zhuǎn)錄，反應(yīng)體系包括10 μL第一步反應(yīng)液、1 μL PrimeScript RT Enzyme Mix1、1 μL RT Primer Mix、4 μL 5×PrimeScript Buffer 2、4 μL RNase Free dH2O，總體積為20 μL；反應(yīng)液混勻后立即進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：37 ℃孵育15 min，85 ℃熱激5 s。cDNA溶液于-20 ℃保存或立即用于PCR反應(yīng)。

熒光定量PCR使用熒光定量試劑盒。qRT-PCR反應(yīng)采用25 μL體系：12.5 μL 2×SYBR Premix Ex TaqTMII（Tli RNaseH Plus）、2 μL上引物、2 μL下引物（10 μmol/L）、1 μL cDNA模板(100 ng/μL)、7.5 μL ddH2O；qRT-PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性30 s，95 ℃變性5 s，60 ℃退火30 s，共30 個(gè)循環(huán)。

以鴨梨PbActin基因?yàn)閮?nèi)參基因，以降溫前（貯藏0 d）樣品中相關(guān)基因表達(dá)量為標(biāo)尺，采用2-ΔΔCt方法計(jì)算基因相對(duì)表達(dá)量。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

采用SPSS 16.0軟件對(duì)以上實(shí)驗(yàn)所獲數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，使用Duncan法比較平均值之間的差異性，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。用Excel 2010軟件繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同降溫方式對(duì)鴨梨貯藏過(guò)程中果心褐變指數(shù)的影響

圖 1 不同降溫方式對(duì)鴨梨冷藏期間果心褐變指數(shù)的影響Fig. 1 Effect of different cooling methods on core-browning index of Yali pears during cold storage

由圖1可知，鴨梨急速降溫組與緩慢降溫組分別于貯藏30 d和60 d開(kāi)始出現(xiàn)果心褐變。隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，鴨梨果心褐變指數(shù)呈不同程度增長(zhǎng)趨勢(shì)。其中，緩慢降溫組褐變指數(shù)增長(zhǎng)趨勢(shì)比急速降溫組緩和，同一貯藏期，在60～180 d急速降溫組褐變指數(shù)極顯著大于緩慢降溫組（P＜0.01）。貯藏結(jié)束時(shí)（180 d），緩慢降溫組的褐變指數(shù)僅0.05%，而急速降溫組高達(dá)0.31%。以上結(jié)果說(shuō)明，對(duì)于適時(shí)采收的鴨梨（9 月中旬），采用緩慢降溫處理方法能有效延緩果實(shí)衰老，抑制鴨梨果心褐變。

2.2 不同降溫方式對(duì)鴨梨貯藏過(guò)程中果心脂肪酸含量的影響

膜脂上脂肪酸分布影響著細(xì)胞膜流動(dòng)性，UFA比例越高流動(dòng)性越好。在遇到低溫環(huán)境時(shí)，較高的膜流動(dòng)性保證了細(xì)胞正常的物質(zhì)交換，機(jī)體的抗冷性也就越高[23]。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到鴨梨果心部脂肪酸主要包括硬脂酸（C16:0）、棕櫚酸（C18:0）、油酸（C18:1）、亞油酸（C18:2）、亞麻酸（C18:3）。經(jīng)兩種降溫處理后鴨梨貯藏期間果心部位脂肪酸分布如表2所示。鴨梨果心的SFA以棕櫚酸為主，UFA以亞油酸和亞麻酸為主。鴨梨果心中UFA含量最高的是亞油酸，其次是油酸、亞麻酸。貯藏30 d，緩慢降溫組果心中3 種UFA含量均顯著高于急速降溫組（P＜0.05）；貯藏60～180 d期間急速降溫組果心亞麻酸含量均顯著高于緩慢降溫組（P＜0.05）。整體來(lái)看，緩慢降溫很好地保持了貯藏初期（0～30 d）鴨梨果心部位UFA含量，而急速降溫由于直接置于0 ℃，機(jī)體通過(guò)一系列調(diào)控作用產(chǎn)生更多的UFA來(lái)增強(qiáng)抗冷性，以適應(yīng)溫度驟變，這是植物體內(nèi)自發(fā)產(chǎn)生的低溫應(yīng)答機(jī)制[24]。

表 2 不同降溫方式下鴨梨貯藏過(guò)程中果心部位各種脂肪酸含量及雙鍵指數(shù)的變化Table 2 Change in fatty acid contents and double-binding index in core tissue of pears subjected to different cooling treatments

DBI是衡量組織中脂肪酸不飽和度的重要指標(biāo)。如表2所示，貯藏期間鴨梨果心DBI整體呈先增加后下降的變化趨勢(shì)，緩慢降溫組和急速降溫組分別在貯藏的120 d和60 d出現(xiàn)最大值。與急速降溫組比較，緩慢降溫組的DBI變化相對(duì)平緩，較好地維持了果實(shí)品質(zhì)。在貯藏期間，急速降溫組鴨梨果心脂肪酸不飽和度均顯著大于緩慢降溫組，冷藏環(huán)境誘導(dǎo)了機(jī)體的抗冷反應(yīng)；而相比緩慢降溫，急速降溫使鴨梨抗冷反應(yīng)更劇烈，果心中UFA總含量、脂肪酸不飽和度均顯著高于緩慢降溫的鴨梨，導(dǎo)致果實(shí)出現(xiàn)冷害癥狀，果心褐變嚴(yán)重。

2.3 不同降溫方式對(duì)鴨梨貯藏過(guò)程中果心部位FAD相對(duì)表達(dá)量的影響

圖 2 不同降溫方式對(duì)鴨梨貯藏過(guò)程中果心部位FAD相對(duì)表達(dá)量的影響Fig. 2 Relative expression levels of FAD gene in core tissue of Yali pears during cold storage after different cooling treatments

目前經(jīng)全基因組測(cè)序確定白梨ω-3FAD共3 個(gè)，本實(shí)驗(yàn)根據(jù)中國(guó)白梨基因組信息中3 個(gè)ω-3FAD基因序列設(shè)計(jì)引物，為FAD1、FAD2、FAD3。由圖2A可知，急速降溫果實(shí)FAD1在0～30 d時(shí)明顯上調(diào)，120 d達(dá)到峰值（4.3），120～180 d下降至初始值附近。緩慢降溫組FAD1基因在貯藏30～150 d不活躍。由圖2B可知，F(xiàn)AD2基因在貯藏期間是受到抑制的，經(jīng)急速降溫與緩慢降溫處理后，貯藏各時(shí)期FAD2相對(duì)表達(dá)量均低于初始值，且同一貯藏時(shí)間急速降溫的FAD2相對(duì)表達(dá)量顯著高于緩慢降溫（P＜0.05）。由圖2C可知，F(xiàn)AD3在鴨梨貯藏中較為活躍，貯藏前30 d，相對(duì)表達(dá)量明顯上調(diào)，30 d時(shí)緩慢降溫組和急速降溫組分別為初始表達(dá)量的2.0、5.4 倍，且貯藏30～150 d，急速降溫組FAD3相對(duì)表達(dá)量顯著高于緩慢降溫組（P＜0.05）。總之，對(duì)于3 個(gè)ω-3FAD，貯藏30～180 d中，急速降溫組中3 個(gè)基因都被低溫誘導(dǎo)，在120 d達(dá)到峰值后下降并趨于平緩，與果心褐變指數(shù)120 d達(dá)到最大值相吻合，這與魏雯雯[15]在桃中研究結(jié)果相一致。而緩慢降溫組，因?yàn)榻?jīng)過(guò)梯度降溫，在貯藏期間（30～180 d）鴨梨受冷害情況有所緩解，在貯藏結(jié)束180 d時(shí)，3 個(gè)基因相對(duì)表達(dá)量才達(dá)到最大值，這在葡萄柚[25]的貯藏實(shí)驗(yàn)中也有相同的發(fā)現(xiàn)。

2.4 不同降溫方式對(duì)鴨梨貯藏過(guò)程中果心部位LOX活力及LOX基因相對(duì)表達(dá)量的影響

LOX廣泛存在于植物體內(nèi)，啟動(dòng)生物膜上UFA發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)，生成一系列生物活性物質(zhì)，在植物生長(zhǎng)發(fā)育、果實(shí)成熟衰老和脅迫應(yīng)答等方面發(fā)揮重要功能[26]。由圖3A可知，兩個(gè)處理組的鴨梨LOX活力均為先上升后下降然后上升的趨勢(shì)。其中，在貯藏0～90、150～180 d，急速降溫組的LOX活力都高于緩慢降溫組。貯藏0 d，由于田間熱未散去，且鴨梨衰老度低，LOX活力處于較低水平。在0～30 d，緩慢降溫經(jīng)歷30 d梯度降溫，溫度較高，使鴨梨保持較高的生理代謝水平，受到冷害脅迫不嚴(yán)重，因此LOX活力水平低于急速降溫處理，這與韓云云等[27]的研究結(jié)果一致。隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，緩慢降溫與急速降溫組在60 d時(shí)LOX活力達(dá)到峰值，此時(shí)在30～60 d果心褐變指數(shù)都有不同程度的升高（圖1），這是因?yàn)? ℃低溫脅迫誘導(dǎo)LOX活力升高，導(dǎo)致膜結(jié)構(gòu)完整性下降，加劇了低溫對(duì)鴨梨果實(shí)的傷害，但是由于緩慢降溫的LOX活力稍低于急速降溫處理，因此果心褐變沒(méi)有急速降溫處理嚴(yán)重。

圖 3 不同降溫方式對(duì)鴨梨貯藏過(guò)程中果心部位LOX活力（A）及LOX基因相對(duì)表達(dá)量（B）的影響Fig. 3 LOX activity (A) and relative expression level of LOX gene (B) in core tissue of Yali pears during cold storage after different cooling treatments

由圖3B可知，兩個(gè)處理組LOX基因相對(duì)表達(dá)量均呈現(xiàn)先緩慢上升至高峰后逐漸下降，貯藏末期又上升的趨勢(shì)。貯藏0～30 d，急速降溫組LOX相對(duì)表達(dá)量急劇升高，可能是由于鴨梨從室溫下突然進(jìn)入（0±1）℃的冷庫(kù)環(huán)境，受到的冷害脅迫激活了LOX基因的表達(dá)，加速了膜脂過(guò)氧化。貯藏30～150 d期間，急速降溫組的LOX相對(duì)表達(dá)量高于緩慢降溫組，說(shuō)明緩慢降溫處理抑制了LOX基因的表達(dá)，從而延緩鴨梨果心褐變的發(fā)生。

3 討 論

減少鴨梨果心褐變發(fā)生一直都是研究鴨梨貯藏的熱點(diǎn)問(wèn)題。有研究指出緩慢降溫處理適時(shí)采收的鴨梨，可以有效抑制其果心褐變，延長(zhǎng)貯藏期，提高貯藏品質(zhì)[28]，這是因?yàn)檫m時(shí)采收的鴨梨抗冷能力較差，急速降溫處理會(huì)使果實(shí)發(fā)生冷害，導(dǎo)致果心褐變[29]。本實(shí)驗(yàn)中的鴨梨采于9月中旬，屬于適時(shí)采收，采用緩慢降溫處理降低了果心褐變指數(shù)，這與以往的研究結(jié)果相一致。

低溫貯藏可延緩成熟衰老進(jìn)程，是維持采后果實(shí)品質(zhì)最有效的方法之一。然而冷敏果實(shí)在低溫貯藏過(guò)程中易發(fā)生生理失調(diào)，造成冷害，導(dǎo)致品質(zhì)下降[30]。植物冷害主要涉及膜流動(dòng)性改變[31]、代謝酶活性降低[32]等；因此當(dāng)植物處于低溫時(shí)，會(huì)啟動(dòng)對(duì)低溫脅迫的響應(yīng)，體內(nèi)為了防止細(xì)胞大量失水調(diào)節(jié)滲透勢(shì)，減少酶活力的降低程度，保護(hù)膜結(jié)構(gòu)使其處于穩(wěn)定狀態(tài)。相應(yīng)地，細(xì)胞膜組成成分也發(fā)生改變，UFA含量增加，有利于植物抗冷[33-34]；因此急速降溫處理中，受到低溫誘導(dǎo)，果心中UFA含量增加，以適應(yīng)環(huán)境溫度驟變。ω-3FAD基因也受冷害誘導(dǎo)，急速降溫組相對(duì)表達(dá)量變化較大，而緩慢降溫由于程序降溫，減少了冷害傷害，這與對(duì)番茄[35]、蜜瓜[36]的研究結(jié)果相一致。LOX能夠催化膜脂過(guò)氧化作用，增加脂質(zhì)的不飽和度，改變細(xì)胞膜的流動(dòng)性，從而導(dǎo)致細(xì)胞膜完整性的損失和透過(guò)性加大，造成細(xì)胞膜區(qū)室化的打破，為多酚氧化酶與酚類(lèi)底物提供反應(yīng)場(chǎng)所，使組織產(chǎn)生不可逆的損傷，最終引起褐變等代謝紊亂[37-38]。另外在荔枝[39]、香蕉[40]、龍眼[41]和皇冠梨[42]中也發(fā)現(xiàn)，LOX作用于細(xì)胞膜，造成膜脂降解和區(qū)室化分布被打破，從而引起果實(shí)褐變。本實(shí)驗(yàn)中，由于急速降溫組中LOX活力以及相對(duì)表達(dá)量在貯藏大部分時(shí)期高于緩慢降溫組；因此急速降溫的果心褐變情況比緩慢降溫嚴(yán)重，也印證了上述觀點(diǎn)。因此，對(duì)于9月中旬（適時(shí)采收）的鴨梨，采用緩慢降溫的方法貯藏，能顯著降低果心褐變指數(shù)，較好地維持貯藏品質(zhì)。

4 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)采用急速降溫和緩慢降溫方式對(duì)采后鴨梨進(jìn)行處理，通過(guò)測(cè)定果心褐變指數(shù)、果心中脂肪酸含量、3個(gè)ω-3FAD基因相對(duì)表達(dá)量、LOX活力和LOX基因相對(duì)表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)急速降溫導(dǎo)致鴨梨果心褐變嚴(yán)重，同時(shí)為了抵御低溫脅迫，相應(yīng)的UFA含量增加，受冷害影響貯藏期間ω-3FAD表達(dá)量增加，LOX活力升高，導(dǎo)致膜完整性下降，并且低溫激活LOX基因表達(dá)，加速了膜脂過(guò)氧化，降低鴨梨貯藏品質(zhì)。因此，對(duì)于適時(shí)（9月中旬）采收的鴨梨，可以采用緩慢降溫的方法維持鴨梨的品質(zhì)。