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    靈芝三萜的研究與應(yīng)用進(jìn)展

    2019-04-02 03:43:12虎虓真甘建紅陶寧萍王錫昌許長(zhǎng)華
    食品科學(xué) 2019年5期
    關(guān)鍵詞:三萜類三萜靈芝

    劉 維,虎虓真,朱 莉,甘建紅,2,盧 瑛,2,陶寧萍,2,王錫昌,2,許長(zhǎng)華,2,*

    (1.上海海洋大學(xué)食品學(xué)院,上海 201306;2.上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術(shù)研究中心,農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品貯藏保鮮質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室(上海),國(guó)家淡水水產(chǎn)品加工技術(shù)研發(fā)分中心(上海),上海 201306)

    靈芝屬(Ganoderma)真菌屬于擔(dān)子菌門(Basidiomycota)、傘菌綱(Agaricomycetes)、多孔菌目(Polyporales)、靈芝科(Ganodermataceae)。2015年版《中國(guó)藥典》將能用作中藥材的靈芝規(guī)定為真菌赤芝(G. lucidum Karst,GLK)和紫芝(G. japonicrn L.loyd)干燥子實(shí)體的總稱。靈芝在我國(guó)常作為中藥材使用,首載于最早的藥物學(xué)專著《神農(nóng)本草經(jīng)》,并被歸為上品。已知的靈芝品種約108 種[1],最常見的為GLK,其次為紫芝。靈芝含有多種生物活性成分,目前研究較多的有多糖類[2-4]、三萜類[5]、多肽核苷類[6-7]、無(wú)機(jī)微量元素(鍺[8]、硒[9])等。

    靈芝三萜(Ganoderma lucidum triterpenoids,GLTs)是從靈芝中分離得到的活性成分之一,具有較高的藥用價(jià)值。與另一活性物質(zhì)靈芝多糖相比,對(duì)其研究及應(yīng)用并不廣泛。為深入了解GLTs類化合物,本文對(duì)這一活性物質(zhì)進(jìn)行詳細(xì)地綜述,主要概述其基本理化性質(zhì),歸納近5 年其在體內(nèi)外藥理活性實(shí)驗(yàn)中的研究進(jìn)展,探究其發(fā)酵工藝條件優(yōu)化和分離純化方法,整理發(fā)酵分離所得純化產(chǎn)物的常用品質(zhì)監(jiān)控技術(shù),總結(jié)其在功能性食品中的應(yīng)用,并提出在實(shí)際應(yīng)用中所存在的問(wèn)題,展望未來(lái)發(fā)展趨勢(shì),以期日后能為靈芝功能性食品的生產(chǎn)和臨床醫(yī)學(xué)研究提供更多的理論參考。

    1 理化性質(zhì)

    GLTs可從不同品種的靈芝中分離獲得,其含量是鑒定靈芝品質(zhì)優(yōu)劣的重要指標(biāo)之一[10]。1982年,自Takashi等[11]首次分離到靈芝酸(ganoderic acid,GA)A和GAB,迄今已鑒定的GLTs種類達(dá)300多種[12]。GLTs的化學(xué)結(jié)構(gòu)較復(fù)雜,相對(duì)分子質(zhì)量一般在400~600之間,脂溶性較高,難溶于水。多數(shù)GLTs具有苦味,苦味越強(qiáng)則GLTs含量越高[11]。從靈芝孢子粉、子實(shí)體、菌絲體及發(fā)酵液的提取物中分離出多種三萜類成分,大多是以GA為主的具有高度氧化性的羊毛甾烷衍生物,多為極性分子,揮發(fā)性弱。圖1為典型的羊毛甾烷三萜骨架[13]。

    圖 1 典型的羊毛甾烷三萜骨架[13]Fig. 1 Backbone structure of typical lanostane triterpenoid[13]

    根據(jù)分子結(jié)構(gòu)不同,三萜類化合物可分為單環(huán)、雙環(huán)、三環(huán)、四環(huán)、五環(huán)和鏈狀三萜。根據(jù)異戊二烯定則,多數(shù)三萜被認(rèn)為是由6 個(gè)異戊二烯(30 個(gè)碳)縮合而成的。依據(jù)碳原子數(shù)目的不同可分為C24、C27及C30 3 種。根據(jù)官能團(tuán)和側(cè)鏈將其命名為GA、GA甲酯、赤靈酸、靈赤酸、靈赤酸甲酯、靈芝孢子酸、GLK孢子內(nèi)酯、靈芝醇、靈芝醛和靈芝內(nèi)酯等[14]。其結(jié)構(gòu)式中多含羥基,在紅外光譜中有較強(qiáng)的羥基吸收峰;在紫外光譜250、237 nm和365 nm波長(zhǎng)處有特征吸收峰;在質(zhì)譜裂解過(guò)程中GLTs會(huì)失去側(cè)鏈。

    2 藥理活性

    GLTs結(jié)構(gòu)和種類的多樣性決定了其藥理學(xué)和生物學(xué)活性的多樣性,包括抗氧化、保肝護(hù)肝、增強(qiáng)免疫、抗腫瘤、降血脂血糖、防治心血管疾病、緩解哮喘、抗人類免疫缺陷1型病毒(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)及HIV-1蛋白酶活性、抑制組胺釋放、抑制血小板聚集和防治癲癇等作用。

    2.1 抗氧化性

    通過(guò)測(cè)定1,1-二苯基-2-苦肼基(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基與羥自由基(·OH)的清除率可知,樹舌靈芝的總?cè)婆c多糖均具有一定的抗氧化活性,且GLTs的抗氧化能力比多糖強(qiáng),因此GLTs可作為天然防腐劑的新來(lái)源[15]。DPPH自由基清除效果顯示,GLTs比茶多酚的清除率高、效果好[16]。Tel-?ayan等[17]對(duì)樹舌環(huán)氧酸G、E、A和Δ22-豆甾烯醇進(jìn)行了抗氧化活性和抗膽堿酯酶活性評(píng)估,結(jié)果表明乙酸乙酯提取物在所有測(cè)試中表現(xiàn)出最好的抗氧化活性,其中Δ22-豆甾烯醇在β-胡蘿卜素亞油酸實(shí)驗(yàn)中顯示出較高的脂質(zhì)過(guò)氧化抑制活性,半抑制濃度(half maximal inhibitory concentration,IC50)為(160.39±2.16)μg/mL。松杉靈芝中的9 種GA混合物通過(guò)抑制異丙腎上腺素誘導(dǎo)的Fas/Fas配體表達(dá)、減輕氧化應(yīng)激和防止細(xì)胞凋亡,達(dá)到保護(hù)小鼠心臟的功效[18]。

    2.2 免疫調(diào)節(jié)活性

    GLK中的三萜類化合物能通過(guò)增加白細(xì)胞介素-6和腫瘤壞死因子的表達(dá)來(lái)刺激免疫應(yīng)答,經(jīng)GLK三萜治療后,小鼠的脾臟和胸腺的免疫器官指數(shù)明顯增加,GLK三萜類化合物在體外和體內(nèi)均具有抗肺癌免疫調(diào)節(jié)活性和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用[19]。通過(guò)皮膚實(shí)驗(yàn)和抗原特異性血清中的免疫球蛋白E檢測(cè)鑒定每名哮喘患者的特異性過(guò)敏情況,各項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果表明GAβ能有效恢復(fù)患者外周血單核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)的輔助性T1細(xì)胞/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞-輔助性T1細(xì)胞平衡,使白細(xì)胞介素-5、干擾素-γ、白細(xì)胞介素-10和白細(xì)胞介素-12水平上升[20],使哮喘癥狀得到有效緩解。Su Limin等[21]證明GA乙二酯(GA ethyl ganoderate C2,CBLZ-7)對(duì)體外胞囊的形成具有有效的抑制作用,其能夠下調(diào)佛司可林誘導(dǎo)的癌蛋白/絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路的活化,結(jié)果表明GLTs及其純化單體CBLZ-7是治療囊性腎病的潛在藥物。Choi等[22]研究了12 種羊毛脂三萜烯在小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7中抗炎和對(duì)血紅素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)的誘導(dǎo)作用,結(jié)果證實(shí)7 種二十碳三烯(GT-1、GT-2、GT-3、GT-4、GT-5、GT-7和GT-12)能誘導(dǎo)HO-1蛋白的表達(dá),且HO-1表達(dá)與這些化合物在RAW264.7細(xì)胞中的抗炎反應(yīng)顯著相關(guān)。通過(guò)測(cè)定29 種羊毛烷三萜對(duì)由脂多糖激活的小膠質(zhì)細(xì)胞BV-2中的一氧化氮產(chǎn)生的抑制作用來(lái)測(cè)試它們的抗炎活性,IC50介于(3.65±0.41)~(28.04±2.81)μmol/L之間[23]。GAC1可通過(guò)阻斷核因子κB活化和抑制PBMCs產(chǎn)生腫瘤壞死因子、干擾素-γ和白細(xì)胞介素-17A等促炎性細(xì)胞因子,治療胃腸道的慢性炎性疾病克羅恩病[24]。Chen等[25]從松山靈芝(G. tsugae)中提取的三萜類化合物可抑制T細(xì)胞組胺釋放,具有抗過(guò)敏作用。GLTs和外源性神經(jīng)節(jié)苷脂的協(xié)同作用可有效改善大鼠癲癇腦損傷,其可能是通過(guò)影響反映腦組織損傷及炎癥反應(yīng)的S蛋白-β、神經(jīng)元特異性烯醇化酶、C反應(yīng)蛋白和降鈣素基因相關(guān)肽蛋白表達(dá)而起到保護(hù)腦神經(jīng)元的作用[26]。

    2.3 抗腫瘤活性

    從靈芝中分離的GLTs具有廣譜的抗癌特性,主要包括對(duì)癌細(xì)胞的抗轉(zhuǎn)移、抗增殖和抗血管生成活性能力,但具體作用效果及其抗腫瘤機(jī)制還有待進(jìn)一步研究,需得到體內(nèi)實(shí)驗(yàn)及臨床實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步驗(yàn)證。目前的研究揭示了GLTs在誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡和抑制端粒酶活性方面的作用,并且其對(duì)健康細(xì)胞的毒性低。Sillapapongwarakorn等[27]篩選了208 種GLTs,并通過(guò)對(duì)接軟件AutoDock4選擇性地穩(wěn)定潛在G-四聯(lián)體DNA(potential G-quadruplex DNA,pG4DNA)。結(jié)果表明,GAA和GADf表達(dá)出高度的結(jié)合親和力,并選擇性地結(jié)合到pG4DNA的側(cè)溝上,抑制端粒酶活性,可作為抗癌劑。閆征等[28]探究了3 種三萜化合物與5 種腫瘤細(xì)胞的劑量-效應(yīng)關(guān)系,結(jié)果表明GAY能抑制肺癌細(xì)胞H460的活性,IC50為22.4 μmol/L,其次是7-氧代-GAZ2(IC50為43.1 μmol/L)。Kohno等[29]發(fā)現(xiàn)5 種羊毛甾烷衍生化合物GAT-Q、GAT-F、GAT-S、GAT-TR和靈芝酮三醇具有刺激微管蛋白聚合的潛力,且比先前報(bào)道的能特異性結(jié)合微管蛋白的GADM活性更高,為微管蛋白靶向抗癌藥物的設(shè)計(jì)提供指導(dǎo)。Zheng Dongshu等[30]分析了GAA、GAB、靈芝酚B、靈芝酮三醇和靈芝酮二醇的光譜,結(jié)果表明這5 種三萜類化合物可通過(guò)抑制端粒酶的活性預(yù)防鼻咽癌。GLTs通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期、減少凋亡蛋白,能顯著抑制前列腺癌細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡[31]。Li Peng等[32]提取的新型三萜化合物對(duì)人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞HL-60和淋巴瘤細(xì)胞CA46癌細(xì)胞株具有細(xì)胞毒性,IC50分別為25.98、20.42 μg/mL。靈芝諾酮A對(duì)慢性髓原白血病細(xì)胞K562、肝癌細(xì)胞BEL7402和胃腺癌細(xì)胞SGC79002細(xì)胞株具有中等細(xì)胞毒性,IC50分別為7.62、6.28、3.550 2 μmol/L[33]。

    2.4 抗菌、抗病毒活性

    真菌是天然抗生素最豐富的來(lái)源之一,從真菌中可提取重要的抗生素青霉素。而作為同是真菌屬的靈芝,對(duì)其微生物活性化合物的研究大多以子實(shí)體和菌絲體的粗提取物為主體,關(guān)于GLTs抗菌活性的研究很少。Vazirian等[34]從氯仿提取物中分餾出的三萜類化合物和類固醇化合物混合物,能夠抑制革蘭氏陽(yáng)性菌和酵母菌,最小抑制質(zhì)量濃度為6.25 mg/mL,但在相同測(cè)試質(zhì)量濃度下對(duì)革蘭氏陰性菌無(wú)效。其中,乙酸麥角甾-7,22-二烯-3β-醇和乙酸等萜醇化物的混合物對(duì)大腸桿菌的抑制作用微弱(最小抑制質(zhì)量濃度10 mg/mL)。王開金等[35]研究了靈芝水提取物GLTs對(duì)恥垢分枝桿菌(Mycobacterium smegmatis mc2155,M.S-155)的增殖曲線、GlmU基因表達(dá)和細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的影響,結(jié)果表明GLTs對(duì)M.S-155抑制作用顯著。從醋酸乙酯提取物中提取的新型三萜類化合物(12b-乙酰氧基-3b,7b-二羥基-11,15,23-三氧代戊酸-8-烯-26-酸丁酯)對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌表現(xiàn)出顯著的抗微生物活性,對(duì)金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)和枯草芽孢桿菌(ATCC 6633)的最低抑菌濃度分別為68.5 μmol/L和123.8 μmol/L[36]。

    腸道病毒71(enterovirus 71,EV71)是兒童手足口病、神經(jīng)系統(tǒng)和全身性并發(fā)癥的主要致病因素。Zhang Wenjing等[37]評(píng)估了GLTA和GLTB抗EV71病毒感染的活性。結(jié)果表明,兩種物質(zhì)通過(guò)與病毒顆粒相互作用可阻止EV71感染,阻斷病毒對(duì)細(xì)胞的吸附,其在人橫紋肌肉瘤細(xì)胞中均有顯著的抗EV71活性。GA-B對(duì)HIV-1蛋白酶的親和力高于奈非那韋,靈芝二醇對(duì)惡性瘧原蟲I蛋白酶的親和力優(yōu)于惡性瘧原蟲I蛋白酶抑制劑(KNI-10006),可用作抗艾滋病毒和抗瘧疾藥物[38]。

    2.5 保肝護(hù)肝活性

    GLTs是保肝護(hù)肝的良藥。劉喬等[39]優(yōu)化了靈芝孢子粉中GA的提取工藝,并對(duì)其進(jìn)行抗氧化活性實(shí)驗(yàn),首次證明GA能顯著提高亞急性衰老模型小鼠的肝臟抗氧化活性。Chiu等[40]通過(guò)人體實(shí)驗(yàn)表明三萜類化合物和多糖的協(xié)同作用可能會(huì)通過(guò)減少過(guò)度產(chǎn)生的自由基影響其抗氧化、抗衰老和保肝功效,保護(hù)肝臟細(xì)胞免受損害。Peng Xingrong等[41]的研究表明,靈芝菌素B、丹芝醇B和赤芝酮A均具有顯著的肝臟保護(hù)作用,經(jīng)H2O2誘導(dǎo)損傷的體外人肝癌細(xì)胞HepG2中,3 種物質(zhì)對(duì)谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶水平的升高均具有有效的抑制活性。劉莉瑩等[42]首次從樹靈芝(G. sessile)的苯乙醇提取物氯仿部位分離得到16 種三萜化合物,其中6 種對(duì)人肝HL-7702細(xì)胞的成活率高于護(hù)肝藥物雙環(huán)醇,為保護(hù)肝臟的臨床研究提供依據(jù)。

    2.6 其他

    GLTs是醛糖還原酶和α-葡糖苷酶的活性抑制劑,可抑制餐后高血糖,在糖尿病治療中發(fā)揮重要作用。Fatmawati等[43]從靈芝子實(shí)體中分離出靈芝醇和GA,對(duì)兩種物質(zhì)的結(jié)構(gòu)-活性研究表明,其特定位置的—OH取代基和雙鍵部分可增加α-葡萄糖苷酶抑制活性,此研究可用于改進(jìn)新型α-葡萄糖苷酶抑制劑。GLTs具有良好的防輻射功效。Smina等[44]的研究表明靈芝子實(shí)體中的三萜在輻射導(dǎo)致的DNA和膜損傷方面具有顯著的保護(hù)效果。對(duì)瑞士白化小鼠注射GLTs預(yù)處理14 d,將其全身暴露于γ射線中,結(jié)果表明GLTs可抑制小鼠體內(nèi)受γ射線誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激[45]。

    GLTs以中等抑制率抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶的活性[46],GAF對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的毛細(xì)管樣結(jié)構(gòu)的形成具有最強(qiáng)的抑制作用[47]。此外,GLTs還可用于治療凍傷[48]、阿爾茨海默病[49]和改善睡眠[50]等。

    3 發(fā)酵、分離提取方法

    3.1 發(fā)酵培養(yǎng)

    由于野生靈芝的數(shù)量有限及其不合理的利用,限制了靈芝的開發(fā)。人工栽培靈芝具有生長(zhǎng)周期過(guò)長(zhǎng)、消耗營(yíng)養(yǎng)資源大、活性物質(zhì)含量低、對(duì)自然環(huán)境影響大等不利因素。因此,可通過(guò)靈芝發(fā)酵生產(chǎn)的工藝途徑獲得靈芝產(chǎn)物及其代謝物,包括固態(tài)發(fā)酵和液態(tài)發(fā)酵。

    固定化靈芝細(xì)胞在耐酸、耐堿方面優(yōu)于未固定細(xì)胞,長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)仍具有較高生產(chǎn)能力。董玉瑋等[51]研究了包埋法固定靈芝細(xì)胞生產(chǎn)胞外三萜工藝,最佳條件為:海藻酸鈉和CaCl2質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為4.5%和2.2%、自然pH值培養(yǎng)基內(nèi)接種40 個(gè)固定化小球、溫度為28 ℃,110 r/min下振蕩培養(yǎng)12 d,最終所得胞外三萜類產(chǎn)量為(49.53±1.37)×10-2mg/mL,回收利用次數(shù)可達(dá)5 次。

    雙向發(fā)酵屬于一種新型發(fā)酵技術(shù),將靈芝與另一種或多種中藥材按不同比例混合進(jìn)行聯(lián)合發(fā)酵,此技術(shù)具有低毒性、增強(qiáng)藥效、提高活性成分吸收率等特點(diǎn),例如以真菌靈芝為發(fā)酵菌種,添加一定量當(dāng)歸粉末的藥性基質(zhì)為發(fā)酵基質(zhì)的雙向發(fā)酵[52]和靈芝菌-玄七通痹膠囊藥渣的雙向發(fā)酵[53]等,當(dāng)歸質(zhì)量濃度為60 g/L時(shí),胞外總?cè)飘a(chǎn)量可達(dá)964.63 mg/L[54]。

    此外,采用中間補(bǔ)料的方式[55],以N-10酵母自溶粉作為氮源[56]、加入氧載體正十二烷[57]和加抗生素兩性霉素[58]等進(jìn)行的發(fā)酵效果均優(yōu)于傳統(tǒng)發(fā)酵。

    3.2 分離純化

    根據(jù)三萜的物理化學(xué)性質(zhì)和生化反應(yīng)特性差異,可利用溶解度、吸附力、蒸汽壓、中和、皂化和酶解等方式提取三萜化合物。通過(guò)控制溫度和真空條件等導(dǎo)致的物理化學(xué)性質(zhì)的改變除去非GA類物質(zhì)。隨著GLTs的研究開發(fā),其提取方法也越來(lái)越多,主要包括傳統(tǒng)熱提取[59]、索氏提?。⊿oxhlet extraction,SE)[60-61]、微波輔助提取(microwave-assisted extraction,MAE)[62-63]、超臨界萃?。╯upercritical fluid extraction,SFE)[64]和超聲波輔助提?。╱ltrasonic-assisted extraction,UAE)[65-66]等,如表1所示。近年來(lái),UAE和MAE技術(shù)作為新興的提取方法,具有操作簡(jiǎn)便、節(jié)省時(shí)間、能耗低、破壞有效成分少和效率高等特點(diǎn),在三萜成分提取方面具有廣泛的工業(yè)化應(yīng)用前景。

    表 1 GLTs的常用提取技術(shù)Table 1 Summary of commonly used techniques for extraction of GLTs

    4 質(zhì)量控制方法

    為保證GLTs的分離和提取過(guò)程中的質(zhì)量要求,必須要對(duì)三萜類化合物進(jìn)行分析,建立一個(gè)便捷、精確的分析方法以監(jiān)控產(chǎn)品質(zhì)量。對(duì)GLTs可進(jìn)行定性和定量分析,定性分析可采用化學(xué)試劑特征顯色法;定量分析可采用香草醛-濃硫酸試劑可見光比色法、紫外分光光度(ultraviolet spectrophotometry,UV)法、薄層層析(thin layer chromatography,TLC)法、高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)法以及色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)。但在實(shí)驗(yàn)室研究和實(shí)際應(yīng)用中,最常見的還是UV、TLC及HPLC 3 種方法,目前已建立了很多GLTs化合物TLC、HPLC的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。

    目前HPLC法已廣泛用于GLTs的定性測(cè)定中,具有分離效果好、操作簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好、儀器精密度好、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。此方法的主要缺陷在于GLTs標(biāo)準(zhǔn)品的分離純化困難,制備出的GLTs純品價(jià)格昂貴。在測(cè)定三萜酸的相關(guān)文獻(xiàn)中,所建立的方法僅用于測(cè)定一種或幾種GLTs,而GLTs種類有上百種,檢測(cè)數(shù)量受限。賈紅巖等[67]建立了能同時(shí)測(cè)定12 種三萜酸的方法,用于測(cè)定不同產(chǎn)地及品種GLTs成分的含量,結(jié)果顯示吉林長(zhǎng)白山上的野生靈芝GLTs含量遠(yuǎn)低于人工栽培的靈芝,且總GLTs含量?jī)H為人工栽培靈芝的1/10。Liu Wei等[68]使用HPLC通過(guò)一測(cè)多評(píng)法同時(shí)檢測(cè)其他16 種GA及GLTs的含量。于華崢等[69]探討了靈芝子實(shí)體、菌絲體和孢子粉3 個(gè)部位中GLTs成分的差異,并對(duì)其HPLC指紋圖譜進(jìn)行相似度分析。結(jié)果表明,靈芝子實(shí)體內(nèi)總?cè)坪扛?、種類多;菌絲體中的三萜含量低、種類少;未經(jīng)破壁的孢子粉中GLTs含量基本為零。

    還有一些新方法可對(duì)靈芝總?cè)七M(jìn)行快速檢測(cè)和品質(zhì)鑒定。例如,Chen Yi等[70]建立了基于近紅外反射光譜法的不同來(lái)源靈芝、靈芝總多糖和三萜類化合物的定量方法;Sakamoto等[71]開發(fā)了膠體金免疫層析試紙條(immunochromatographic strip assay,ICA)快速檢測(cè)GAA的方法,該系統(tǒng)可以通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定進(jìn)行靈芝中GAA的半定量分析。新開發(fā)的ICA可用于以GAA為指標(biāo)的靈芝的標(biāo)準(zhǔn)化。

    5 功能性食品

    GLTs類化合物在制藥領(lǐng)域已有一定的應(yīng)用,例如生產(chǎn)各類抗癌[27,30-31]、護(hù)肝[40,42]、抗氧化[16-17]、提高免疫力[19,22]和降血糖血脂[43,72]類藥物。而其在食品中的實(shí)際應(yīng)用遠(yuǎn)不如靈芝多糖廣泛,由于GLTs的提取率低且價(jià)格高,一般不會(huì)在食品中添加純化的GLTs。添加了GA和靈芝多糖的酸奶相比于空白對(duì)照酸奶,風(fēng)味物質(zhì)種類增加,乳酸菌活菌數(shù)增加3.1 倍,功能性品質(zhì)提高[73]。將發(fā)酵GLTs的殘?jiān)砑佑诠δ苄詣?dòng)物飼料中,可促進(jìn)豬的生長(zhǎng)發(fā)育,增強(qiáng)其免疫力,使其肉品品質(zhì)更好[74]。通過(guò)優(yōu)化椰肉、椰汁配比和過(guò)濾時(shí)間提高椰奶靈芝酒中GLTs含量可增強(qiáng)酒的功能性[75]。含三萜提取物的靈芝咖啡可促進(jìn)小鼠免疫功能的提高[76]。

    6 結(jié) 語(yǔ)

    靈芝提取物GLTs化合物在癌癥治療、抗氧化、保肝護(hù)肝、抗病毒、降血糖血脂和防輻射等方面具有優(yōu)異的藥用潛力,是良好的藥食同源物質(zhì),在充滿發(fā)展?jié)摿Φ南M(fèi)條件和國(guó)際環(huán)境驅(qū)動(dòng)下,應(yīng)發(fā)揮三萜的優(yōu)勢(shì),開發(fā)具有高質(zhì)量的功能性產(chǎn)品。

    GLTs具有蓬勃的發(fā)展趨勢(shì),但同時(shí)也要注意發(fā)展中不可忽視的客觀問(wèn)題:1)應(yīng)用性:靈芝及其活性提取物在食藥產(chǎn)品及保健品中的應(yīng)用廣泛,但GLTs類化合物的相關(guān)產(chǎn)品仍較少;2)安全性:在食品安全問(wèn)題嚴(yán)重的大環(huán)境下,靈芝受環(huán)境污染的影響,利用子實(shí)體及孢子粉提取的GLTs中不可避免的會(huì)含有一些重金屬離子,其細(xì)胞毒性和安全性需得到保障;3)單體純化:一方面,靈芝多糖和GLTs均是靈芝的主要活性物質(zhì),三萜類化合物在保肝護(hù)肝等某些藥理方面比靈芝多糖具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì),因此可制備純化的GLTs以達(dá)到高效治療或預(yù)防特定疾病的目的;另一方面,GLTs的種類繁多,但并非所有三萜都具有有效活性,而分離提取有效純化單體的技術(shù)不發(fā)達(dá);目前,純化的GLTs價(jià)格昂貴、制備量小,不適用于工廠化生產(chǎn),只能用于實(shí)驗(yàn)室研究;4)規(guī)范化:GLTs檢測(cè)技術(shù)落后,產(chǎn)品質(zhì)量缺乏統(tǒng)一規(guī)范標(biāo)準(zhǔn),良莠不齊;GLTs的精深加工具有高經(jīng)濟(jì)效益,故必定存在優(yōu)劣混雜、摻假和仿冒等問(wèn)題。

    因此,GLTs的未來(lái)發(fā)展應(yīng)立足于以下4 個(gè)方面:1)提高GLTs的應(yīng)用潛力,致力于功能性食品及藥品,尤其是保健品的開發(fā);強(qiáng)調(diào)GLTs的功能性,從人體細(xì)胞學(xué)、代謝組學(xué)和預(yù)防醫(yī)學(xué)的角度入手,致力于研發(fā)出為糖尿病、肝病和艾滋病等特殊人群以及癌癥人群服務(wù)的高性價(jià)比產(chǎn)品;2)深度純化三萜化合物,提高GLTs的分離純化和發(fā)酵技術(shù),增加產(chǎn)量;3)深入研究三萜的藥理活性機(jī)制,制備運(yùn)用于食品藥品的精深加工純化單體;4)規(guī)范產(chǎn)品質(zhì)量的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),完善GLTs指紋圖譜,尋求三萜化合物有效成分的快速檢測(cè)方法,為GLTs規(guī)?;a(chǎn)提供質(zhì)量保障。

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