富血小板血漿用于兔半月板損傷修復(fù)的研究

董鑫，陳北北

（1.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院，遼寧沈陽(yáng)110034；2.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院，遼寧沈陽(yáng)110024）

曾經(jīng)，半月板被認(rèn)為是“無(wú)功能殘留物”，隨著運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，研究不斷深入，半月板的功能逐漸被認(rèn)識(shí)，它不再是膝關(guān)節(jié)內(nèi)無(wú)功能殘留物。當(dāng)然，治療方法也從手術(shù)切除變?yōu)榱?zhēng)修復(fù)損傷的半月板。近年來(lái)醫(yī)學(xué)技術(shù)的飛速進(jìn)步使得部分較重的半月板損傷可以通過(guò)外科關(guān)節(jié)鏡手術(shù)進(jìn)行縫合，但更需要一種可以促進(jìn)半月板損傷修復(fù)的辦法。目前關(guān)于半月板損傷修復(fù)的研究中有應(yīng)用富血小板血漿（Platelet-Rich plasma，PRP）、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、基質(zhì)金屬蛋白酶和基因轉(zhuǎn)染等多種促進(jìn)組織修復(fù)與再生的治療辦法和假說(shuō)。相比其他，PRP 的制備來(lái)源于自體，其產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)和傳播傳染性疾病的可能性比較低。近年間PRP 在多個(gè)領(lǐng)域的使用沒(méi)有明顯的相關(guān)并發(fā)癥的報(bào)道。其制備有相對(duì)簡(jiǎn)單、快捷、安全、價(jià)格低廉等特點(diǎn)。幾種體外實(shí)驗(yàn)支持PRP 增強(qiáng)半月板纖維軟骨細(xì)胞愈合的能力，Hong Suk Kwak，Delos Demetris，Ishida Kazunari 等的研究[1-4]持此觀點(diǎn)。但是，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，PRP 對(duì)半月板白區(qū)損傷的療效尚存在爭(zhēng)議，然而Shin Kyun Ho 等[5]在兔對(duì)照試驗(yàn)的結(jié)果未顯示單次注射對(duì)兔內(nèi)側(cè)半月板水平裂損傷愈合有促進(jìn)作用。將PRP 單次注射到半月板，不能有效地提高半月板水平裂損傷的愈合。PRP 可作為治療早期疼痛的方法。也不乏個(gè)別病例支持PRP 促進(jìn)半月板修復(fù)，Betancourt JP 等[6]報(bào)道一個(gè)案例，創(chuàng)傷性半月板損傷患者經(jīng)過(guò)PRP 治療后，在每次隨訪評(píng)估中疼痛癥狀（VAS 評(píng)分） 有明顯改善；Urzen Jessica 等[7]報(bào)道了一例43 歲男性病例，在確診后7個(gè)月內(nèi)接受了三次在半月板內(nèi)和周圍注射富血小板血漿；Pujol Nicolas 通過(guò)添加PRP，臨床結(jié)果略有改善[8]。實(shí)驗(yàn)中激活劑的比例和干預(yù)頻率則無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，恰是經(jīng)過(guò)激活后的血小板包含的α顆粒釋放出眾多功能強(qiáng)大的細(xì)胞因子[9，10]，細(xì)胞因子通過(guò)影響細(xì)胞的再生、成熟及分化等過(guò)程從而參與了組織的修復(fù)[11-13]。不同血小板活化劑的選擇可以顯著地影響血小板活化，導(dǎo)致釋放的血小板源性生長(zhǎng)因子的濃度和各種因子所占組分有所不同，持續(xù)釋放因子的水平和釋放速度受到活化劑的影響[14]。但是，由不同比例激活劑激活的PRP 對(duì)愈合能力影響的報(bào)道甚少。戴靜等報(bào)道PRP 與激活劑以9∶1 比例制備的PRP 凝膠促角膜基質(zhì)細(xì)胞增殖作用最強(qiáng)，同時(shí)具有有序網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和良好的組織黏附性及相容性，是一種可以用于角膜基質(zhì)再生的良好支架[15]。既然目前關(guān)于富血小板血漿的激活方式及比例、應(yīng)用方式、應(yīng)用頻率還沒(méi)有一個(gè)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，即通過(guò)將富血小板血漿凝膠（PRG）制備時(shí)的激活比例和應(yīng)用時(shí)的干預(yù)頻率作為施加變量，觀察富血小板血漿對(duì)半月板損傷修復(fù)效果的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

2017年9月-2018年3月實(shí)驗(yàn)于沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物手術(shù)室及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心完成。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：Ⅰ期實(shí)驗(yàn)54 只成年健康同種同齡大白兔、Ⅱ期實(shí)驗(yàn)48 只成年健康同種同齡大白兔，均由沈陽(yáng)市于洪區(qū)王兵養(yǎng)殖場(chǎng)提供，于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)，體重2.5～3.0 kg，雌雄不限。實(shí)驗(yàn)過(guò)程善待動(dòng)物，參考國(guó)家科學(xué)技術(shù)部于2006年發(fā)布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)》。

實(shí)驗(yàn)試劑：HE 染色試劑盒，10%無(wú)菌氯化鈣溶液，牛凝血酶1 000 U。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組

進(jìn)行初步編號(hào)后，采取電腦隨機(jī)分組。Ⅰ期實(shí)驗(yàn)按照富血小板血漿凝膠制備時(shí)的激活比例3∶1，5∶1，7∶1 分為A，B，C 三組，每組18 只，并進(jìn)行編號(hào)。Ⅱ期實(shí)驗(yàn)按照僅1 次、每周1 次、每2 周1 次、每4 周1 次的干預(yù)頻率分為A，B，C，D 四組，每組12只，進(jìn)行編號(hào)。

1.2.2 富血小板血漿制備

制備PRP 采取對(duì)血小板影響相對(duì)較小的Landenberg 法[16]，將裝有兔血的離心管對(duì)稱放入離心機(jī)中，以200 g 離心力下離心10 min，液體分為上清液和紅細(xì)胞兩層，交界處有一薄層，肉眼不易看出，即富血小板層（PRP）。保留全部上清液及交界面以下1～2 mm 的紅細(xì)胞，去除底層含紅細(xì)胞的液體。再次以200 g 離心力下離心10 min，此時(shí)血小板被濃集至離心管底部；再去除管內(nèi)上層的乏血小板血漿（Platelet-poor plasma，PPP）大部分，約占上清液上3/4，剩余液體各約0.3 mL，搖勻，即為PRP。用1 mL 注射器通過(guò)長(zhǎng)針頭吸出并備用，通常每3 mL 全血制成PRP 約0.3 mL。PRP 凝膠（PRG）的制備是通過(guò)向PRP 中加入激活劑后6～10 s 即可形成PRP 凝膠（PRG）。分別用裝有0.3 mL PRP 的1 mL 注射器，抽吸0.06 mL 激活劑和少許空氣后震動(dòng)搖勻（以5:1為例）。

1.2.3 建立動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?/p>

雙膝建模，麻醉后內(nèi)側(cè)入路切開(kāi)內(nèi)側(cè)副韌帶長(zhǎng)2.0cm 弧形切口，沿髕骨內(nèi)側(cè)上緣至脛骨結(jié)節(jié)處切開(kāi)皮膚及皮下各層，用預(yù)彎的半月板拉鉤顯露內(nèi)側(cè)半月板前角、體部及股骨髁軟骨面。用尖刀片于內(nèi)側(cè)半月板游離緣體部造成一個(gè)長(zhǎng)0.6 cm 統(tǒng)一的無(wú)血運(yùn)區(qū)縱行全層裂傷模型。術(shù)后以3/0 尼龍線緊密縫合關(guān)節(jié)囊，肌注青霉素60 萬(wàn)單位預(yù)防感染。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)方法

Ⅰ期實(shí)驗(yàn)：A 組右膝關(guān)節(jié)為實(shí)驗(yàn)組，于關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射激活比例為3∶1 的自體富血小板血漿凝膠，左膝關(guān)節(jié)不做特殊處理為空白對(duì)照組；B 組右膝關(guān)節(jié)為實(shí)驗(yàn)組，于關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射激活比例為5∶1 的自體富血小板血漿凝膠，左膝關(guān)節(jié)不做特殊處理為空白對(duì)照組；C 組右膝關(guān)節(jié)為實(shí)驗(yàn)組，于關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射激活比例為7∶1 的自體富血小板血漿凝膠，左膝關(guān)節(jié)不做特殊處理為空白對(duì)照組；各組皆用自制夾板固定膝關(guān)節(jié)2 周。

Ⅱ期實(shí)驗(yàn)：A 組右膝關(guān)節(jié)為實(shí)驗(yàn)組，于關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射激活比例為Ⅰ期實(shí)驗(yàn)最佳比例的自體富血小板血漿凝膠，僅1 次注射，左膝關(guān)節(jié)不做特殊處理為空白對(duì)照組；B 組右膝關(guān)節(jié)為實(shí)驗(yàn)組，于關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射激活比例為Ⅰ期實(shí)驗(yàn)最佳比例的自體富血小板血漿凝膠，每周注射1 次，左膝關(guān)節(jié)不做特殊處理為空白對(duì)照組；C 組右膝關(guān)節(jié)為實(shí)驗(yàn)組，于關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射激活比例為Ⅰ期實(shí)驗(yàn)最佳比例的自體富血小板血漿凝膠，每2 周注射1 次，左膝關(guān)節(jié)不做特殊處理為空白對(duì)照組；D 組右膝關(guān)節(jié)為實(shí)驗(yàn)組，于關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射激活比例為Ⅰ期實(shí)驗(yàn)最佳比例的自體富血小板血漿凝膠，每4 周注射1 次，左膝關(guān)節(jié)不做特殊處理為空白對(duì)照組。皆用自制夾板固定膝關(guān)節(jié)2 周。

1.2.5 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本觀察

Ⅰ期實(shí)驗(yàn)：分別于術(shù)后4，8，12 周，以空氣栓塞法每組處死6 只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，取雙膝半月板編號(hào)后進(jìn)行大體標(biāo)本愈合情況和大體形態(tài)觀察。將實(shí)驗(yàn)標(biāo)本用10%甲醛固定液固定、洗滌、脫鈣、脫水、透明、透蠟、包埋等步驟制成石蠟切片，經(jīng)蘇木精-伊紅染色，普通光學(xué)顯微鏡觀察微觀結(jié)構(gòu)，評(píng)估愈合情況。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，各組之間愈合效果評(píng)價(jià)屬等級(jí)資料，組間比較采用Kruskal-Wallis 秩和檢驗(yàn)。α=0.05 為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)據(jù)分析

Ⅰ期實(shí)驗(yàn)動(dòng)物54 只，Ⅱ期實(shí)驗(yàn)動(dòng)物48 只均無(wú)意外死亡，數(shù)據(jù)無(wú)丟失。

2.2 Ⅰ期實(shí)驗(yàn)半月板大體觀察

4周：A 組，實(shí)驗(yàn)組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣毛糙；對(duì)照組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣整齊。B 組，實(shí)驗(yàn)組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣毛糙；對(duì)照組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣整齊。C 組，實(shí)驗(yàn)組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣毛糙；對(duì)照組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣整齊。

8周：A 組，實(shí)驗(yàn)組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣處有少許機(jī)化凝塊；對(duì)照組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣欠整齊。B 組，實(shí)驗(yàn)組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣有機(jī)化組織編織，少許相連接；對(duì)照組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣欠整齊。C 組，實(shí)驗(yàn)組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣處有機(jī)化組織編織，少許相連接；對(duì)照組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣欠整齊。

12周：A 組，實(shí)驗(yàn)組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣處有大量機(jī)化凝塊，部分連接；對(duì)照組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣欠整齊。B 組，實(shí)驗(yàn)組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣有機(jī)化的纖維組織連接，尚未完全相連；對(duì)照組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣欠整齊。C 組，實(shí)驗(yàn)組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣處有機(jī)化的纖維組織連接，尚未完全連接；對(duì)照組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣欠整齊。

2.3 Ⅰ期實(shí)驗(yàn)12周半月板HE染色鏡下觀察

A組，實(shí)驗(yàn)組：損傷區(qū)創(chuàng)緣內(nèi)有膠原纖維填充，相互編織連接，但填充組織中無(wú)纖維軟骨細(xì)胞或軟骨陷窩形成；對(duì)照組：損傷區(qū)創(chuàng)緣整齊，局部無(wú)纖維組織增生，無(wú)幼稚成纖維細(xì)胞。B 組，實(shí)驗(yàn)組：損傷區(qū)創(chuàng)緣內(nèi)有大量膠原纖維填充，基本相互連接，其中伴有少量纖維軟骨細(xì)胞或軟骨陷窩形成，不完全愈合；對(duì)照組：損傷區(qū)創(chuàng)緣整齊，局部無(wú)纖維組織增生，無(wú)幼稚成纖維細(xì)胞。C 組，實(shí)驗(yàn)組：損傷區(qū)創(chuàng)緣內(nèi)有大量膠原纖維填充，基本相互連接，多數(shù)其中伴有少量纖維軟骨細(xì)胞或軟骨陷窩形成，不完全愈合；對(duì)照組：損傷區(qū)創(chuàng)緣整齊，局部無(wú)纖維組織增生，無(wú)幼稚成纖維細(xì)胞（圖1-6）。

從表1 等級(jí)資料經(jīng)秩和檢驗(yàn)可見(jiàn)，A，B，C 對(duì)照組間無(wú)差異，各組內(nèi)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間愈合情況不同，P＜0.001 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A，B，C 實(shí)驗(yàn)組間比較，P＜0.025，按α=0.05 的檢驗(yàn)水準(zhǔn)，可以認(rèn)為各實(shí)驗(yàn)組間對(duì)愈合的影響存在差異。A，B，C 實(shí)驗(yàn)組間兩兩比較，C 組優(yōu)于B 組和A 組，P＜0.05。但A，B 兩組比較，P＞0.05 無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明7:1 比例激活劑激活的富血小板血漿凝膠的促進(jìn)半月板白區(qū)損傷修復(fù)的效果優(yōu)于其他激活比例，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，證明各比例激活劑激活的富血小板血漿凝膠均可不同程度地促進(jìn)半月板白區(qū)損傷修復(fù)。

圖1 A組實(shí)驗(yàn)組（HE×100）

圖2 A組對(duì)照組（HE×100）

圖3 B組實(shí)驗(yàn)組（HE×100）

圖4 B組對(duì)照組（HE×100）

圖5 C組實(shí)驗(yàn)組（HE×100）

圖6 C組對(duì)照組（HE×100）

表1 Ⅰ期實(shí)驗(yàn)12 周各組半月板鏡下愈合等級(jí)評(píng)價(jià)表

2.4 Ⅱ期實(shí)驗(yàn)半月板大體觀察

8周：A 組，實(shí)驗(yàn)組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣處有機(jī)化組織編織，少許相連接；對(duì)照組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣欠整齊。B 組，實(shí)驗(yàn)組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣處有大量機(jī)化凝塊，部分連接；對(duì)照組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣欠整齊。C組，實(shí)驗(yàn)組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣處有機(jī)化組織編織，少許相連接；對(duì)照組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣欠整齊。D 組，實(shí)驗(yàn)組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣處有大量機(jī)化凝塊，部分連接；對(duì)照組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣欠整齊。

12周：A 組，實(shí)驗(yàn)組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣處有機(jī)化纖維組織連接，尚未完全相連；對(duì)照組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣欠整齊。B 組，實(shí)驗(yàn)組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣處有機(jī)化纖維組織連接，尚未完全相連；對(duì)照組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣欠整齊。C 組，實(shí)驗(yàn)組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣處有纖維組織連接較緊密，基本完全連接；對(duì)照組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣欠整齊。D 組，實(shí)驗(yàn)組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣處有大量纖維組織填充，尚未完全連接；對(duì)照組：可見(jiàn)損傷區(qū)創(chuàng)緣欠整齊。

2.5 Ⅱ期實(shí)驗(yàn)12周半月板HE染色鏡下觀察

A組，實(shí)驗(yàn)組：損傷區(qū)創(chuàng)緣內(nèi)有大量膠原纖維填充，基本相互連接，多數(shù)其中伴有少量纖維軟骨細(xì)胞或軟骨陷窩形成，不完全愈合；對(duì)照組：損傷區(qū)創(chuàng)緣整齊，局部無(wú)纖維組織增生，無(wú)幼稚成纖維細(xì)胞。B組，實(shí)驗(yàn)組：損傷區(qū)創(chuàng)緣內(nèi)有大量膠原纖維填充，基本相互連接，多數(shù)其中伴有少量纖維軟骨細(xì)胞或軟骨陷窩形成，不完全愈合；對(duì)照組：損傷區(qū)創(chuàng)緣整齊，局部無(wú)纖維組織增生，無(wú)幼稚成纖維細(xì)胞。C 組，實(shí)驗(yàn)組：損傷區(qū)創(chuàng)緣內(nèi)有大量膠原纖維填充，基本相互連接中有少量纖維軟骨細(xì)胞或軟骨陷窩形成，不完全愈合；對(duì)照組：損傷區(qū)創(chuàng)緣整齊，局部無(wú)纖維組織增生，無(wú)幼稚成纖維細(xì)胞。D 組，對(duì)照組：損傷區(qū)創(chuàng)緣內(nèi)有大量膠原纖維填充，基本相互連接，多數(shù)其中伴有少量纖維軟骨細(xì)胞或軟骨陷窩形成，不完全愈合；對(duì)照組：損傷區(qū)創(chuàng)緣整齊，局部無(wú)纖維組織增生，無(wú)幼稚成纖維細(xì)胞（圖7-14）。

圖7 A組實(shí)驗(yàn)組（HE×100）

圖8 A組對(duì)照組（HE×100）

圖9 B組實(shí)驗(yàn)組（HE×100）

圖10 B組對(duì)照組（HE×100）

圖11 C組實(shí)驗(yàn)組（HE×100）

圖12 C組對(duì)照組（HE×100）

圖13 D組實(shí)驗(yàn)組（HE×100）

圖14 D組對(duì)照組（HE×100）

從表2 等級(jí)資料經(jīng)秩和檢驗(yàn)可見(jiàn)，A，B，C，D 對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各組內(nèi)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間愈合情況不同，P＜0.001 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A，B，C，D 各實(shí)驗(yàn)組組間無(wú)差異，P＞0.05，按α=0.05的檢驗(yàn)水準(zhǔn)，不能認(rèn)為各實(shí)驗(yàn)組之間對(duì)愈合的影響存在差異。雖然C 組主觀觀察愈合情況似乎優(yōu)于A組，D 組優(yōu)于B 組，但本實(shí)驗(yàn)不能說(shuō)明，在每?jī)芍?次的干預(yù)頻率下，富血小板血漿凝膠的促進(jìn)半月板白區(qū)損傷修復(fù)的效果優(yōu)于其他干預(yù)頻率。

表2 Ⅱ期實(shí)驗(yàn)12 周各組半月板鏡下愈合等級(jí)評(píng)價(jià)表

2.6 備注

擬定鏡下愈合等級(jí)評(píng)價(jià)：Ⅰ級(jí)：損傷區(qū)創(chuàng)緣整齊，局部無(wú)纖維組織增生，無(wú)幼稚成纖維細(xì)胞。Ⅱ級(jí)：損傷區(qū)創(chuàng)緣有新生膠原纖維，創(chuàng)緣旁可見(jiàn)軟骨細(xì)胞密度增大。Ⅲ級(jí)：損傷區(qū)創(chuàng)緣內(nèi)有膠原纖維填充，相互編織連接，但填充組織中無(wú)纖維軟骨細(xì)胞或軟骨陷窩形成。Ⅳ級(jí)：損傷區(qū)創(chuàng)緣內(nèi)有大量膠原纖維填充，基本相互連接中有少量纖維軟骨細(xì)胞或軟骨陷窩形成，不完全愈合。Ⅴ級(jí)：損傷區(qū)切片顯示，不能辨認(rèn)創(chuàng)緣，纖維軟骨分布均勻，完全愈合。

3 討論

富血小板血漿是一種相對(duì)安全、來(lái)源廣泛、制備簡(jiǎn)便的制劑，并且被廣泛用于組織修復(fù)的研究，在PRP 肌肉、肌腱、韌帶、創(chuàng)面修復(fù)以及骨組織損傷的修復(fù)方面有作用或良好研究前景。馮光等應(yīng)用改良方法制備PRP 并應(yīng)用于燒傷創(chuàng)面，具有損傷小、治療時(shí)間短、不易復(fù)發(fā)，安全可靠等優(yōu)點(diǎn)。糖尿病足亦有應(yīng)用[18]。Egemen Ayhan 等[19]在膝關(guān)節(jié)腔注射PRP 治療骨性關(guān)節(jié)炎，得出PRP 有望緩解疼痛、改善膝關(guān)節(jié)功能和生活質(zhì)量的結(jié)論，特別對(duì)年輕患者和輕度骨性關(guān)節(jié)炎患者。

半月板的血液供應(yīng)主要局限在外側(cè)1/3，來(lái)源有半月板前后角的韌帶滑膜套，血管網(wǎng)由周圍關(guān)節(jié)囊及滑膜進(jìn)入半月板上下表面的薄滑膜血管翳和周邊滑膜緣，但無(wú)新生毛細(xì)血管長(zhǎng)入半月板組織中。所以半月板內(nèi)側(cè)1/3，被稱為白區(qū)的無(wú)血運(yùn)區(qū)，損傷難以修復(fù)。近年來(lái)，富血小板血漿用于半月板修復(fù)的研究日趨火熱，經(jīng)過(guò)大量體外實(shí)驗(yàn)證明其可以促進(jìn)半月板纖維軟骨修復(fù)，但體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果卻不如體外實(shí)驗(yàn)?zāi)菢幼屓藵M意。對(duì)于富血小板血漿的激活方式及比例、應(yīng)用方式、應(yīng)用頻率都沒(méi)有一個(gè)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。期待當(dāng)富血小板血漿以最佳的激活方式及應(yīng)用方式通過(guò)最佳的應(yīng)用頻率用于半月板損傷修復(fù)時(shí)，會(huì)有令人滿意的療效。

通過(guò)本實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論，7:1 比例激活劑激活的富血小板血漿凝膠可能更適合促進(jìn)半月板白區(qū)損傷的修復(fù)。但本實(shí)驗(yàn)不能證明在不同干預(yù)頻率下的富血小板血漿凝膠促進(jìn)半月板白區(qū)損傷修復(fù)效果的差異，每2 周1 次的干預(yù)頻率組愈合情況直觀上看似乎優(yōu)于其他各組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？赡苡捎跇颖玖科?，尚存在偏倚。另外，損傷修復(fù)并沒(méi)有達(dá)到完全愈合，其修復(fù)以纖維修復(fù)為主，纖維軟骨細(xì)胞修復(fù)不多，其可促進(jìn)組織修復(fù)的生物效能毋庸置疑，導(dǎo)致體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果差別的原因，可能是血小板源性生長(zhǎng)因子在體內(nèi)代謝情況及關(guān)節(jié)活動(dòng)影響了組織的修復(fù)結(jié)果。據(jù)最新文獻(xiàn)報(bào)道，同種異體半月板移植術(shù)后聯(lián)合膝關(guān)節(jié)腔注射PRP，可以在術(shù)后1年內(nèi)更有效地減輕術(shù)后疼痛,改善患膝功能。但其他評(píng)價(jià)未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)明顯差異[20，21]。所以，對(duì)于PRP 用于半月板修復(fù)的應(yīng)用方式、劑型、應(yīng)用頻率等方案仍需改進(jìn)，需要做更多的實(shí)驗(yàn)去探索。

總而言之，富血小板血漿修復(fù)半月板損傷的臨床研究仍任重道遠(yuǎn)，推廣應(yīng)用前仍需大量臨床數(shù)據(jù)，明確其生物學(xué)效能，完善其制備方式和應(yīng)用方法的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果由于樣本數(shù)量原因或許較為局限，但希望能夠?yàn)楦谎“逖獫{用于組織修復(fù)研究提供一些參考。