射干麻黃湯加減聯(lián)合脾多肽注射液對小兒咳嗽變異性哮喘的免疫功能影響及臨床療效觀察

陳宏，宋瑜欣，于曉華，蘇玉明，秦琪，延宇欣，賀紫薇，柳琳琳

慢性咳嗽是兒童呼吸門診最常見的癥狀之一，發(fā)病原因多樣，其中咳嗽變異性哮喘(cough variant asthma,CVA) 是常見的原因之一。CVA主要的臨床癥狀表現(xiàn)為常在夜間或清晨出現(xiàn)持續(xù)反復(fù)發(fā)作的咳嗽[1]。CVA疾病周期長，多由于空氣，氣候以及上呼吸道感染所誘發(fā)，常規(guī)治療效果不佳[2]。本研究主要觀察射干麻黃湯加減聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑脾多肽注射液對于小兒CVA的療效以及對病兒免疫功能的影響，旨在探索治療該疾病的更優(yōu)治療方法。

1 資料與方法

1.1一般資料將黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院2015年2月到2016年12月收治的64例小兒CVA，按隨機(jī)數(shù)字表法分成兩組。其中觀察組32例(男18例，女14例)，年齡范圍為1.5～8.0周歲，年齡(4.76±0.57)周歲；對照組32例(男20例，女12例)，年齡范圍為1.3～8.0周歲，年齡(4.98±0.66)周歲。兩組資料均衡。每一位病兒在征得監(jiān)護(hù)人同意下抽取外周血3 mL用以檢測外周血T淋巴細(xì)胞，本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會赫爾辛基宣言》相關(guān)要求，所有病兒的監(jiān)護(hù)人在取血液標(biāo)本前均已簽署知情同意書。

1.2診斷標(biāo)準(zhǔn)及治療方法診斷標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)全國兒科哮喘協(xié)作組制訂的兒童哮喘診斷治療常規(guī)(試行方案)[3]中CVA的診斷如下：(1)常在夜間(或清晨)發(fā)作的咳嗽，持續(xù)反復(fù)超過1個月，運動后會加重， 臨床無感染現(xiàn)象， 痰少，或經(jīng)過長期抗生素治療無效；(2)支氣管擴(kuò)張劑可緩解；(3)有個人過敏史或家族過敏史；(4)氣道呈高反應(yīng)性、變應(yīng)原試驗陽性等作輔助診斷。

治療方法：對照組采用射干麻黃湯加減治療。基本方為射干8 g，炙麻黃5 g，細(xì)辛3 g，大棗6 g，法半夏6 g，款冬花8 g，五味子5 g，紫菀8 g，生姜4 g，干地龍8 g，蟬衣5 g。臨證加減：鼻癢、噴嚏連聲者加辛荑花6 g，蒼耳子6 g；久咳氣虛無力者去細(xì)辛、生姜，加太子參10 g，白術(shù)10 g，黃芪10 g，牡蠣10 g；皮膚瘙癢、濕疹病史者加土茯苓10 g，刺蒺藜8 g；食欲不振者加神曲6 g，麥芽15 g。每天1劑，以水600 mL煎至150～200 mL，分2次服。觀察組采用以上方子聯(lián)合脾多肽注射液治療，即在以上基本方加減的基礎(chǔ)上，每日1次靜脈滴注脾多肽注射液1支(溶于100 mL的0.9%氯化鈉注射液，吉林豐生制藥有限公司，產(chǎn)品規(guī)格為每支2 mL，生產(chǎn)批號20161215、20170606、20171105)，7 d為一個療程。

1.3實驗材料及測定方法實驗材料：流式抗體CD3，CD4，CD8、CD25及Foxp3均為BD Bioscience公司產(chǎn)品；Cytofix/Cytoperm破膜固定試劑盒為BD Bioscience公司產(chǎn)品。

分離外周血單個核細(xì)胞(PBMC)方法：用EDTA抗凝血管采集抗凝血1支(3 mL)，離心3 500 r/min，10 min。生理鹽水2∶1稀釋血細(xì)胞，混勻。然后將稀釋后的血液緩慢注入5 mL的淋巴細(xì)胞分離液上。離心750g，30 min，20 ℃。然后使用毛細(xì)吸管吸取中間白膜層(單個核細(xì)胞層)置于新的15 mL離心管中，再用干凈的生理鹽水清洗兩次即可得到PBMC細(xì)胞。

流式細(xì)胞染色及其分析：將5×105的細(xì)胞轉(zhuǎn)至EP管中，離心，去上清。取所需的流式抗體3～5 μL，于EP管中振蕩混勻，加入細(xì)胞中，冰上或4 ℃冰箱避光反應(yīng)25～30 min。結(jié)束后用PBS洗滌兩次。然后使用500 μL PBS重懸細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至流式管中，上機(jī)分析。胞內(nèi)染色時加入破膜固定劑，清洗時用破膜固定清洗液∶PBS=1∶9稀釋，其他步驟相同。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用數(shù)理統(tǒng)計軟件SPSS 24.0進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料部分，組間比較采用χ2檢驗，計量資料部分，組間比較為成組t檢驗，組內(nèi)前后比較為配對t檢驗。所有的統(tǒng)計檢驗均采用雙側(cè)檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兩組血清IgM、IgG和IgA水平的比較治療前觀察組和對照組的血清免疫球蛋白水平(IgM、IgG和IgA)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療后，觀察組的血清免疫球蛋白水平(IgM、IgG)較治療前升高(P<0.05)，且高于對照組(P<0.05)(表1)。

表1 小兒CVA 64例治療前后血清免疫球蛋白因子的兩組比較

2.2兩組外周血T淋巴細(xì)胞CD3+，CD4+及CD8+亞群比較治療前觀察組和對照組的外周血T淋巴細(xì)胞亞群(CD8+T細(xì)胞亞群)的比例差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療后，由于免疫系統(tǒng)的活性改善，免疫功能增強(qiáng)，觀察組的CD3+T及CD4+T細(xì)胞亞群較治療前比例均有明顯升高(P<0.05)，且高于對照組(P<0.05)。觀察組的CD8+T細(xì)胞亞群較治療前降低(P<0.05)，且低于對照組(P<0.05)。患者的免疫抑制狀態(tài)較前解除，故觀察組的Treg細(xì)胞亞群(CD4+CD25+Foxp3+)較治療前降低且低于對照組(P<0.05)(表2)。

表2 小兒CVA 64例治療前后外周血T淋巴細(xì)胞亞群的兩組比較

2.3兩組治療效果比較觀察組臨床治愈率為46.9%，總體有效率為90.6%；對照組臨床治愈率為31.2%，總體有效率為78.1%，兩組臨床治愈率、總有效率比較均差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(表3)。

表3 小兒CVA 64例治療效果的兩組比較/例(%)

3 討論

小兒慢性咳嗽歷來是臨床上較為棘手的問題，因其發(fā)病原因多樣。其中小兒CVA是最常見原因之一。尤其是近年來，全國各地空氣質(zhì)量下降，污染加劇，霧霾頻發(fā)，該病的發(fā)病率有逐年上升的趨勢[4]。本病主要特點以夜間或清晨陣發(fā)性咳嗽為主，無發(fā)熱體征，病理改變以持續(xù)氣道炎癥與氣道高反應(yīng)性為特點，極大的影響了病兒正常的休息及健康成長[5]。對于本病，西醫(yī)治療有一定的緩解作用，但缺點是停藥后易反復(fù)發(fā)作[6]。故探索一種治標(biāo)且治本的方法來治療本病尤為重要。

采用射干麻黃湯加減治療哮喘由來已久，在既往的各種研究中已經(jīng)證實，采用此方治療小兒CVA是有效的。脾多肽提取自健康小牛的脾臟，然后運用復(fù)雜工藝將其制成分子量較小的多肽、游離氨基酸等組成的無菌水溶液[7-8]。脾多肽注射液能夠激活和增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫，并促使T淋巴細(xì)胞分化成熟，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能[9-10]。在本研究中，主要目的是觀察中西醫(yī)結(jié)合的方法對于小兒CVA的治療效果，并觀察病兒的免疫功能的改變。我們發(fā)現(xiàn)，采用射干麻黃湯加減聯(lián)合脾多肽注射液治療可以提高病兒外周血T淋巴細(xì)胞中CD3+及CD4+T淋巴細(xì)亞群胞的比例[11]，降低CD8+T及Treg亞群的比例，從而激活病兒免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)免疫力[12-13]。其臨床治愈率及總體有效率均高于對照組。本研究為我們在小兒CVA的臨床治療中提供了一種更優(yōu)選擇，即采用射干麻黃湯聯(lián)合脾多肽注射液治療。但是本研究的不足之處在于樣本量較小，隨訪時間較短，所以目前尚需要更大樣本量及多中心的研究來證實這一結(jié)論。