大白豬OPN與FSH-β基因多態(tài)性對其繁殖性能的影響

孫義姍，黃 濤，孫敬禮*，胡九英，李夢尋，來紅霞

(1.石河子大學動物科技學院,新疆 石河子 832000 ；2.新疆正大食品有限公司,新疆五家渠 831301）

中國是世界生豬養(yǎng)殖和消費的第一大國。豬的繁殖性狀是受多種效應影響的低遺傳力性狀，利用常規(guī)育種方法很難有所突破。標記輔助選擇法（Markerassisted Selection,MAS）對豬繁殖性狀具有最高的選擇效率，可以縮短世代間隔，提高育種的效率，是一種有應用前景的技術，運用該方法尋找繁殖性狀的主效基因，對繁殖性狀的遺傳改良有著重要的意義[1]。

骨橋蛋白（osteopontin,OPN）基因是一種定位于豬的第8號染色體上的磷酸化糖蛋白，廣泛分布于乳腺和胎盤等組織中，同時組成子宮-胎盤微環(huán)境，并全程參與生殖發(fā)育[2]。王旭平等[3]研究表明OPN基因可以對高乳脂率和高產(chǎn)奶量進行標記選擇。此外，賴淑靜[4]研究發(fā)現(xiàn)，OPN基因也可作為蛋品性狀分子標記。學者Liaw等[5]研究發(fā)現(xiàn)，OPN基因可顯著性提高新生大白豬存活率。

促卵泡素亞基（FSH-β）基因是由垂體前葉合成和分泌，是一個已被證實的影響豬產(chǎn)仔數(shù)的主效基因，其β亞基使FSH具有生物活性并具有一定特異性[6]。FSH在胎兒發(fā)育過程、妊娠維持和性別分化等方面發(fā)揮著重要作用[7]。在檢測的五指山豬群體中只發(fā)現(xiàn)AA和AB兩種基因型，可以通過選育增加等位基因頻率以提高五指山豬的產(chǎn)仔數(shù)[8]。

OPN和FSH-β基因均為插入突變，所以只需采用PCR和瓊脂糖凝膠電泳技術進行多態(tài)性檢測，并分析候選基因多態(tài)性對大白母豬繁殖性狀的影響，為分子育種提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

統(tǒng)計2014-2016年新疆正大食品有限公司1 011頭初產(chǎn)、經(jīng)產(chǎn)大白母豬6胎共3 735胎次的總產(chǎn)仔數(shù)、總活仔數(shù)、健仔數(shù)、死胎、木乃伊胎以及初生窩重等信息。采集1 011頭大白豬耳組織樣本，用試劑盒提取DNA。

1.2 主要儀器和試劑

1.2.1 主要儀器

無酶水，2hEsTaq MasterMix，組織基因組DNA抽提試劑盒，Marker DL2000，Marker 1，EB 染液，瓊脂粉。

從上述數(shù)據(jù)分析可以看出，雖然學生意識到上課使用手機會影響學習，教師也會進行適當約束，但總體上，學生上課使用手機的情況是非常普遍的，嚴重影響到學生的學習效果[5]。

1.2.2 主要試劑

PCR儀、DYY-4穩(wěn)流穩(wěn)壓電泳儀、凝膠電泳成像系統(tǒng)、微波爐、臺式高速離心機。

1.3 試驗方法

1.3.1 DNA的提取

用EXCEL對原始數(shù)據(jù)進行整理，同時計算多態(tài)信息含量（PIC）、有效等位基因數(shù)（NE）、基因頻率、基因型頻率、遺傳雜合度（He）和遺傳純合度（Ho）。利用SAS（Version 9.1）軟件分別對試驗豬群兩個候選基因的單基因型、合并基因型與繁殖性狀進行相關分析，并進行哈迪-溫伯格檢驗。

1.3.2 引物

從表2可知,OPN和FSH-β基因型頻率均呈現(xiàn)出BB＞AB＞AA趨勢，BB為優(yōu)勢基因型；等位基因頻率B＞A，B為優(yōu)勢等位基因；OPN雜合度為0.50，F(xiàn)SH-β雜合度為0.42，有效等位數(shù)分別為1.99和1.73，PIC均處于0.25＜PIC＜0.5，說明此群體處于中度多態(tài)；卡方獨立性檢驗結果表明OPN基因不符合哈迪-溫伯格平衡，可能是人工選育的結果。而FSH-β基因符合哈迪-溫伯格平衡。

1.3.3 PCR擴增

基于英語文學翻譯可以看到，中西方文化在歷史傳統(tǒng)、生活習慣及思維方式等多個方面存在巨大差異，但是這些差異的存在，是社會發(fā)展的必然結果。而正視這些差異，也正是時代發(fā)展的必然要求。[10]我國文化要想在全球經(jīng)濟一體化發(fā)展過程中保持發(fā)展的優(yōu)勢，必須從這些差異入手，尋找到自己的特色與標識，爭取在全球文化交流的過程中獲得有利位置。

針對于治療效果主要分為三個等級,當治療后48h后大便性狀正常,次數(shù)明顯減少,其臨床癥狀明顯消失為顯效;而治療后48~72h內(nèi)大便采恢復正常,臨床癥狀消失則為顯效;如果患兒治療時間超過72h,臨床癥狀以及大便均無明顯變化則為無效[2]。

1.4 統(tǒng)計分析方法

提取按照TIANGEN基因組DNA提取試劑盒說明書進行。

2 結果與分析

2.1 等位基因頻率、基因型頻率以及遺傳特性分析

設計的引物交給上海生工生物工程技術服務有限公司合成，引物序列如表1

李樹化的這一首《如此溫柔》在中國早期鋼琴曲中是較為特別的一首，特別在于它的私密性內(nèi)容和情感。這是他敬獻給愛妻的一首“情歌”，既有西方浪漫主義情調(diào)，也兼有中國傳統(tǒng)的“執(zhí)子之手，與子偕老”的意愿。雖然是譜寫在“圣誕節(jié)”期間，但是音樂并沒有明顯的宗教情緒，而是非常人性化和世俗化的表達。正是由于它的這個特點，所以李樹化并沒有將其公開發(fā)表，而是深深地收藏在自己的手稿中。西方浪漫主義音樂（尤其是鋼琴音樂）中大都隱含著人類深沉而私密的情感，高尚的人文主義因素深蘊其中，這正是可貴之處。

WUDAPT 項目：城市形式與功能信息的眾包解決方案及其應用 黃 媛 劉靜怡 Jason Ching2018/04 26

PCR反應體系：去離子水6.2μL，2hEsTaq Master Mix7.5μL，上、下游引物各0.4μL，模板DNA 0.5μL，共15μL。OPN反應條件為：94℃變性5 min，35次循環(huán)（94℃，30 s；60℃，30 s；72℃，30 s）,72℃延伸10 min。FSH-β反應條件為：94℃變性5 min，35次循環(huán)（94℃，30 s；56℃，30 s；72℃，30 s），72℃延伸5 min。4℃保存60 min。分別用1.0%和1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

2.2 基因效應分析

分析基因多態(tài)性與經(jīng)產(chǎn)母豬總產(chǎn)仔數(shù)、總活仔數(shù)、健仔數(shù)、死胎、木乃伊胎以及初生窩重的相關性，結果見表5。經(jīng)產(chǎn)母豬OPN基因AA型個體的總產(chǎn)仔數(shù)和健仔數(shù)顯著高于AB型個體0.35頭/胎和0.23頭/胎（P＜0.05）；經(jīng)產(chǎn)母豬FSH-β基因AB型的總產(chǎn)仔數(shù)顯著高于BB型0.2頭/胎（P＜0.05），此外，在初生窩重性狀上AB基因型顯著高于AA基因型0.54 kg/胎(P＜0.05)；合并基因型BBAA型在總產(chǎn)仔數(shù)、活仔數(shù)和健仔數(shù)三個性狀上均顯著高于ABAA基因型（P＜0.05）；在活仔數(shù)性狀上，合并基因型AAAB型極顯著高于BBBB型 0.42頭 /胎 (P＜ 0.01)；在初生窩重性狀上，BBAB型個體的極顯著高于AAAA型和BBBB型(P＜0.01)，分別高出1.27 kg/胎和0.64 kg/胎。此外，BBAA型個體的初生窩重顯著高于AAAA型1.26 kg/胎(P＜0.05)。由此可見，經(jīng)產(chǎn)大白母豬合并基因型中BBAA，AAAB基因型為最優(yōu)分子標記組合。

2.3 OPN和FSH-β單個基因型以及合并基因型對初產(chǎn)母豬繁殖性狀的影響

利用SAS中的GLM模型分析基因多態(tài)性與大白豬繁殖性狀的關系，結果見表4、表5。

分析發(fā)現(xiàn)初產(chǎn)母豬OPN基因及FSH-β基因的總產(chǎn)仔數(shù)、總活仔數(shù)、健仔數(shù)以及初生窩重的差異均不顯著（P＞0.05）；OPN基因在木乃伊胎性狀上AA基因型顯著低于BB基因型0.13頭/胎(P＜0.05)；FSH-β基因在死胎性狀上BB基因型顯著高于AB基因型0.13頭/胎(P＜0.05)，而在初生窩重性狀上BB基因型顯著高于AB基因型0.57 kg/胎(P＜0.05)；初產(chǎn)母豬合并基因型中BBAA基因型比ABAA基因型的活仔數(shù)多1.68頭/胎，健仔數(shù)多1.69頭/胎；并且合并基因型中BBAA基因型的初生窩重極顯著高于其他基因型(P＜0.01)；由此可見，初產(chǎn)大白母豬合并基因型中BBAA基因型為最優(yōu)分子標記組合。

表2 OPN和FSH-β基因型頻率及等位基因頻率分布

表3 OPN和FSH-β的基因效應

2.4 OPN和FSH-β單個基因以及合并基因型對經(jīng)產(chǎn)母豬繁殖性狀的影響

由表3可得，OPN基因在初產(chǎn)母豬中表現(xiàn)出正的加性效應和顯性效應，而在經(jīng)產(chǎn)母豬中則相反；在FSH-β基因中，B等位基因在初產(chǎn)母豬中對NBA、THB有負效應，對TNB有正效應；A等位基因在初產(chǎn)及經(jīng)產(chǎn)母豬中對TNB、NBA及NHB有正效應。對于TNB中的A和B等位基因效應，OPN基因的均為-0.08，F(xiàn)SH-β基因的均為0.003；根據(jù)孟德爾遺傳定律發(fā)現(xiàn)，等位基因在同源染色體上的同一個位置,如果性狀表現(xiàn)相同屬于完全顯性.即只要有顯性基因就表現(xiàn)出顯性性狀，說明在初產(chǎn)大白豬中，OPN和FSH-β基因的等位基因在TNB中呈共顯性。

表4 OPN和FSH-β不同基因型對初產(chǎn)母豬繁殖性狀的影響

表5 OPN和FSH-β不同基因型對經(jīng)產(chǎn)母豬繁殖性狀的影響

3 討論

研究以1 011頭大白豬6胎共3 735胎次為試驗群體，樣本含量及分布符合統(tǒng)計學要求，中度多態(tài)（0.25＜PIC＜0.5），且兩種基因均存在多態(tài)性。

無論是傳統(tǒng)漢學階段，還是新漢學階段，長期以來，國內(nèi)學界對海外中國研究成果翻譯較多，系統(tǒng)梳理后的引進介紹并不多；批判較多，對其概念、理論與方法的借鑒與反思并不多。這正是受其研究視角的影響，畢竟多數(shù)學者對海外新漢學尤其是其中的政治研究表示質(zhì)疑，而持審慎肯定態(tài)度的建構視角的學者并不多見。

3.1 OPN基因多態(tài)性對繁殖性能的影響

研究大白豬群中OPN基因B等位基因占優(yōu)勢且基因頻率為0.54，這與Knoll等[9]、李千軍等[10]、馬力鵬等[11]、李不學等[12]和羅仍卓么等[13]研究結果一致。孫敬禮等研究發(fā)現(xiàn)B等位基因能提高豬的產(chǎn)仔數(shù)，呈現(xiàn)BB＞AB＞AA趨勢[14]。但是本研究發(fā)現(xiàn)OPN基因與母豬繁殖性狀呈正相關的為A等位基因。此外，OPN基因?qū)Ψ敝承阅苡绊懺诔醍a(chǎn)母豬各基因型均不顯著，這與Korwin－Kossakowska等[15]和馬力鵬等[11]研究結果一致，而在經(jīng)產(chǎn)大白母豬OPN基因AA型個體的總產(chǎn)仔數(shù)和健仔數(shù)顯著高于AB型個體0.35頭/胎和0.23頭/胎。在其余性狀上，OPN基因的BB基因型木乃伊胎數(shù)顯著高于AA基因型0.13頭/胎。上述研究表明，對于OPN基因來說，優(yōu)勢基因為A等位基因。

3.2 FSH-β基因多態(tài)性對繁殖性能的影響

相關研究表明，F(xiàn)SH-β基因的B等位基因為優(yōu)勢基因，初產(chǎn)母豬FSH-β基因的AB基因型健仔數(shù)比AA型多1.21頭/胎，經(jīng)產(chǎn)母豬各基因型之間產(chǎn)仔數(shù)差異不顯著[16]；在趙要風等[17]的研究中，杜洛克、大約克、長白等國外豬種中BB型為FSH-β的優(yōu)良基因型；施啟順等[18]發(fā)現(xiàn)在大白豬中B等位基因頻率較高，且AA基因型的總產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)活仔數(shù)顯著低于BB基因型。本研究所用大白豬群體，發(fā)現(xiàn)FSH-β基因的各基因型對初產(chǎn)母豬產(chǎn)仔數(shù)的提高無顯著影響，這與李夢尋等[19-20]研究結果一致，分析可能是因為初產(chǎn)母豬生殖系統(tǒng)可能還沒有發(fā)育完善。但在經(jīng)產(chǎn)母豬中，F(xiàn)SH-β基因AB型的總產(chǎn)仔數(shù)顯著高于BB型0.2頭/胎，且在初生窩重性狀上AB基因型顯著高于AA基因型，以上結果分析比對發(fā)現(xiàn)單個基因FSH-β對母豬的繁殖性狀的選擇沒有顯著的意義。

3.3 合并基因多態(tài)性對繁殖性能的影響

OPN-FSHβ合并基因型對豬繁殖性狀的影響還沒有定論,合并基因型之間可能存在復雜的遺傳互作效應，單個基因型的遺傳效應要比合并基因型的遺傳效應低[21]。劉乙等[22-23]研究結果顯示，B為FSH-β基因的優(yōu)勢基因，在初產(chǎn)大白母豬中，ESR和FSH-β基因的優(yōu)勢合并基因型為ABAA，在經(jīng)產(chǎn)大白母豬中，ESR和FSH-β基因的優(yōu)勢合并基因型為BBAA。本研究通過對比分析發(fā)現(xiàn)這一理論有一定依據(jù)，在初產(chǎn)大白豬群體中，OPN基因總產(chǎn)仔數(shù)BB基因型比AB基因型多產(chǎn)0.06頭/胎,FSH-β基因的總產(chǎn)仔數(shù)AA基因型比AB基因型多0.03頭/胎,而合并基因型的總產(chǎn)仔數(shù)BBAA型比ABAB型多0.66頭/胎；并且同樣在經(jīng)產(chǎn)大白豬群體中，OPN基因總產(chǎn)仔數(shù)BB基因型比AB基因型多產(chǎn)0.06頭/胎,FSH-β基因的總產(chǎn)仔數(shù)AA基因型比BB基因型多0.01頭/胎,而合并基因型的總產(chǎn)仔數(shù)BBAA型比ABBB型多0.45頭/胎。由此可見，OPN-FSHβ合并基因型中最優(yōu)分子標記組合為BBAA。這提示，在種豬繁殖性狀的選育過程中，應根據(jù)豬群特征有目的地選擇多個影響繁殖性能的候選基因進行合并，并結合分子標記輔助育種方法來進一步有效地改善母豬的繁殖性狀[24]。

除了事件本身，還可以通過其他細節(jié)讓采訪變得更加豐滿?？梢詫Σ稍L對象所處的周邊環(huán)境進行捕捉，給觀眾傳遞更多的信息；還可以依靠鏡頭語言，更好地展示采訪對象的精神面貌，使觀眾提高對采訪對象的認識，比如通過給采訪對象的衣著、生活用品幾個特寫，觀眾就能夠清楚知道采訪對象的家庭等情況，提高觀眾的觀看感受。

4 結論

本研究結果表明，在大白豬的群體中，OPN和FSH-β基因的優(yōu)勢基因均為B等位基因；OPN和FSH-β基因的正效應基因均為A等位基因；大白豬的合并基因型的總產(chǎn)仔數(shù)、活仔數(shù)、健仔數(shù)以及初生窩重的遺傳效應高于單基因型；大白豬繁殖性狀OPN-FSHβ合并基因型中最優(yōu)分子標記組合為BBAA，可作為大白豬分子標記輔助選擇的基礎資料。