響應(yīng)面法優(yōu)化包被發(fā)酵嗜酸乳桿菌的高密度培養(yǎng)

袁 林，張明華，涂熠坤，郭建軍，張 婷，魏國汶，曾 靜*

（1.江西省科學院 微生物研究所，江西 南昌330096；2.江西省發(fā)展改革研究院，江西 南昌330036；3.南京工業(yè)大學 化學與分子工程學院，江蘇 南京210000）

嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus）屬于乳桿菌屬，是腸道中的重要微生物[1]，作為機體的有益菌群[2]和制備益生菌制劑[3]的常用菌種之一，當其達到一定數(shù)量時，具有調(diào)節(jié)腸道微生物菌群[4-5]、抑制病原菌[6-7]、增強免疫力[4，8]、降血脂[9-10]等作用，起到健康促進效果。嗜酸乳桿菌成為目前乳酸菌家族中極為重視研究與開發(fā)的益生菌之一，被視為第三代酸乳發(fā)酵劑菌種[6]。因此，對嗜酸乳桿菌高密度培養(yǎng)和干粉發(fā)酵劑的研制具有重要的理論意義與實用價值。

益生菌對飼料加工過程、制粒工藝中的髙溫、儲存運輸和胃腸液的胃酸及膽汁的耐受性較差，能活著到達動物胃腸道體內(nèi)定植并且發(fā)揮作用的種類和數(shù)量不多[11]。微膠囊由于其獨特優(yōu)勢被視為解決這一系列問題的可行途徑[12-14]。目前飼用益生菌微膠囊的制備工藝大多屬于發(fā)酵后包被[15-16]，得到的產(chǎn)品具有球形度差，顆粒大小不均勻和囊內(nèi)細胞密度低等缺點[17-18]。ZHANG L等[11]選取糞腸球菌進行乳化凝膠化基礎(chǔ)上的發(fā)酵前包被和噴霧干燥基礎(chǔ)上的發(fā)酵后包被，發(fā)現(xiàn)微囊化糞腸球菌的儲藏、高溫、胃液和腸液脅迫作用的抵抗能力要顯著高于未包被菌粉和發(fā)酵后包被，其中常溫條件下儲存5個月后發(fā)酵前包被糞腸球菌的活性比未包被的菌粉組與后包被組分別提高19.46%和6.90%。贠婷婷[19]以釀酒酵母和糞腸球菌為模式菌株進行微囊化，發(fā)酵前包被釀酒酵母和糞腸球菌的中試產(chǎn)品球形度好、大小均一，粒徑分布均勻，能夠有效降低高溫制粒過程中活菌數(shù)的損失。發(fā)酵前包被技術(shù)能夠更好的改善微囊化產(chǎn)品的形態(tài)和穩(wěn)定性[20]，但尚無規(guī)模化生產(chǎn)。嗜酸乳桿菌生長繁殖對營養(yǎng)條件較為苛刻[21]，探討高密度培養(yǎng)條件[22]和提高菌粉存活率[3]是制備高活性嗜酸乳桿菌菌粉的關(guān)鍵。本研究通過響應(yīng)面試驗優(yōu)化嗜酸乳桿菌包被發(fā)酵的培養(yǎng)基以及發(fā)酵條件，從而提高包被型嗜酸乳桿菌單位濃度的活菌數(shù)，為包被嗜酸乳桿菌的高密度濃縮型發(fā)酵劑及活菌劑產(chǎn)品的開發(fā)奠定基礎(chǔ)，為嗜酸乳桿菌包被發(fā)酵的工業(yè)化生產(chǎn)和產(chǎn)品開發(fā)提供科學依據(jù)。

1 材料與試劑

1.1 材料與試劑

1.1.1 菌株

嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus，La）XW118（以下簡稱LaXW118）：由江西省科學院微生物研究所分子生物學實驗室保藏。

1.1.2 化學試劑

蛋白胨、酵母粉、牛肉膏（均為生化試劑）：安琪酵母股份有限公司；瓊脂粉、海藻酸鈉：生工生物工程（上海）股份有限公司；葡萄糖、檸檬酸三銨、乙酸鈉、吐溫-80、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、硫酸錳（均為分析純）：國藥集團化學試劑有限公司；納米碳酸鈣：江西永發(fā)化工公司。實驗所用試劑均為分析純或生化試劑。

1.1.3 培養(yǎng)基

MRS液體培養(yǎng)基：蛋白胨10.0 g、牛肉膏8.0 g、酵母粉4.0 g、葡萄糖20.0 g、吐溫80 1.0 mL、K2HPO4·7H2O 2.0 g、NaAc·3H2O 5.0 g、檸檬酸三銨2.0 g、MgSO4·7H2O 0.68 g、MnSO·4H2O 0.25 g，將上述成分加入1 000 mL蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)pH 值為6.5，110～115 ℃高壓滅菌30 min；此培養(yǎng)基用于菌種活化、復(fù)壯[4]。

MRS固體培養(yǎng)基：在MRS液體培養(yǎng)基成分中再加入1.5%～2.0%瓊脂粉，煮沸混勻，調(diào)節(jié)pH后于110～115 ℃高壓滅菌30 min；此培養(yǎng)基用于活菌計數(shù)。

基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基：蛋白胨10.0 g、牛肉膏8.0 g、酵母粉4.0 g、葡萄糖20.0 g、吐溫-80 1.0 mL、K2HPO4·7H2O 2.0 g、NaAc·3H2O 5.0 g、檸檬酸三銨2.0 g、MgSO4·7H2O 0.68 g、MnSO·4H2O 0.25 g、海藻酸鈉10 g、納米碳酸鈣20 g，溶于1 000 mL 蒸餾水中，110～115 ℃高壓滅菌30 min。

1.2 儀器與設(shè)備

DSX-280A手提壓力滅菌鍋：上海申安儀表有限公司；SPX-250B-Z型生化培養(yǎng)箱：上海博迅實業(yè)有限公司；AL204電子天平：梅特勒-托利多儀器（上海）股份有限公司；TG16-WST臺式高速離心機：上海盧湘儀離心機儀器有限公司；FD系列冷凍干燥機：上海拓紛機械設(shè)備有限公司；5 L發(fā)酵罐：上海保興生物設(shè)備工程有限公司。

1.3 方法

1.3.1 菌種的活化、種子液的制備及培養(yǎng)

取凍存甘油管菌株LaXW118室溫靜置5 min，用接種環(huán)蘸取菌種接于MRS液體培養(yǎng)基，37 ℃厭氧培養(yǎng)20 h后，劃線接種到MRS固體培養(yǎng)基上，長出單個菌落，挑取菌落的一半進行革蘭染色鏡檢，確認為純種，將菌落的另一半接種至MRS液體培養(yǎng)基中擴培。將活化后的菌株LaXW118接種于MRS液體培養(yǎng)基，于37 ℃厭氧靜置培養(yǎng)18 h，得到種子液，備用。

將制備的種子液按照4%接種量接種于5 L發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基中，37 ℃、100 r/min恒溫厭氧培養(yǎng)20 h，制備的發(fā)酵液用于各指標測定。

1.3.2 活菌計數(shù)[19]

取1 mL菌液于0.1 mol/L磷酸緩沖液（pH 6.2）中，適當稀釋數(shù)倍后，取3個濃度梯度（10-6～10-8）進行平板傾注，每個梯度設(shè)3 個平行，培養(yǎng)24 h后進行活菌計數(shù)。

1.3.3 Plackett-Burman 試驗設(shè)計

在前期單因素試驗的基礎(chǔ)上，對培養(yǎng)基每種成分選高低2 個水平，以（-1、1）編碼各值，其中高水平是低水平的1.5倍，以微囊包被發(fā)酵活菌濃度（R）作為響應(yīng)值進行試驗分析[23]，從中篩選出對包被活菌含量影響顯著的培養(yǎng)基組分。Plackett-Burman（PB）試驗設(shè)計的因素及水平如表1所示，每組試驗設(shè)置3個平行試驗以減少試驗誤差，取3組試驗的平均值。分別計算各因素效應(yīng)，并進行重要性評價。

表1 Plackett-Burman試驗設(shè)計因素與水平Table 1 Factors and levels of Plackett-Burman experimental design

1.3.4 最陡爬坡試驗

響應(yīng)面擬合方程的最優(yōu)鄰域才能充分反映真實情形，最速上升法可以迅速的達到其附近。根據(jù)表1試驗數(shù)據(jù)的分析結(jié)果，從眾多影響因子中篩選出3 個影響微囊包被發(fā)酵活菌濃度的最顯著因子，以此來確定各因素的水平，表現(xiàn)為正效應(yīng)的因素取高水平，表現(xiàn)為負效應(yīng)的因素取低水平。根據(jù)這3 個因素效應(yīng)的大小設(shè)定最陡爬坡試驗的方向和步長，剩余因子均取低水平值，通過微囊包被活菌濃度的變化趨勢，確定中心組合設(shè)計試驗中3 因素的中心點。

1.3.5 響應(yīng)面法優(yōu)化培養(yǎng)基組成

采用響應(yīng)面中心組合設(shè)計（central composite design，CCD）對微囊包被發(fā)酵活菌濃度的顯著影響因子進一步優(yōu)化，根據(jù)Plackett-Burman 和最陡爬坡法試驗結(jié)果，結(jié)合因素的效應(yīng)大小和試驗中的實際情況，以3 個顯著影響因子為響應(yīng)面設(shè)計的自變量，選擇下一步試驗水平的中心點和各水平的步長，響應(yīng)值為微囊包被發(fā)酵活菌濃度（R），各因子和代碼水平見表2。其他因子的高低水平根據(jù)Plackett-Burman試驗分析結(jié)果確定，表現(xiàn)為正效應(yīng)的因素取高水平，表現(xiàn)為負效應(yīng)的因素取低水平，每個試驗點進行3次平行試驗。

表2 中心組合設(shè)計試驗因素與水平Table 2 Factors and levels of central composite design experiments

1.3.6 凍干粉的制備[24]

將菌液離心，棄去上清液，收集菌泥；在離心所得的菌泥中加入復(fù)合保護劑并混勻，置-40 ℃預(yù)凍處理5 h以上，放入真空冷凍干燥器內(nèi)凍干。

1.3.7 包被型嗜酸乳桿菌的加速儲存穩(wěn)定性試驗[25]

取適量包被型嗜酸乳桿菌固態(tài)產(chǎn)品在37 ℃條件下分別貯藏0、10 d、30 d、65 d、100 d取樣，以相同處理條件下的游離嗜酸乳桿菌固態(tài)產(chǎn)品為對照，每個處理3個重復(fù)。采用平板計數(shù)法計算每克產(chǎn)品的活菌數(shù)，通過測定活菌數(shù)變化情況來評價其貯存性能。

2 結(jié)果與分析

2.1 包被型嗜酸乳桿菌發(fā)酵

菌株LaXW118在5 L發(fā)酵罐中以基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基于37 ℃、100 r/min恒溫厭氧培養(yǎng)，包被發(fā)酵嗜酸乳桿菌的鏡檢結(jié)果見圖1A。由圖1A可知，嗜酸乳桿菌LaXW118在培養(yǎng)8 h后開始出現(xiàn)微囊，培養(yǎng)至12 h時，菌體細胞充滿整個微膠囊，囊內(nèi)菌體密度較大，并未出現(xiàn)破囊現(xiàn)象，菌體也沒有明顯泄漏；以MRS液體培養(yǎng)基游離培養(yǎng)的菌株LaXW118的鏡檢結(jié)果見圖1B。由圖1B可知，菌株LaXW118細胞呈鏈桿狀，不聚團。結(jié)果表明，采用包被發(fā)酵的嗜酸乳桿菌具有不同于游離培養(yǎng)條件下的特征，即普遍都有聚集成團的現(xiàn)象，且所形成的細胞團大小比較均勻，成球形良好，細胞團之間界限明顯，其優(yōu)勢是通過聚團提高了細胞的密度。

圖1 包被發(fā)酵和游離培養(yǎng)后的嗜酸乳桿菌的鏡檢結(jié)果Fig. 1 Microscopy examination results of Lactobacillus acidophilus after encapsulated fermentation and free culture

2.2 Plackett-Burman試驗及結(jié)果分析

根據(jù)前期單因素試驗結(jié)果，選取12個對包被活菌濃度影響較大的因素，通過Design Expert 8.0 軟件進行N=16的Plackett-Burman試驗設(shè)計，把每個因素設(shè)計成高（1）和低（-1）2個水平，高水平是低水平的1.5倍，每組試驗設(shè)置3個平行，以菌株LaXW118的包被活菌濃度（R）為響應(yīng)值，Plackett-Burman試驗設(shè)計結(jié)果見表3。

表3 Plackett-Burman試驗設(shè)計結(jié)果Table 3 Results of Plackett-Burman experimental design

續(xù)表

采用Design-expert V8.0對表3結(jié)果進行方差分析，結(jié)果見表4。由表4可知，該模型的決定系數(shù)R2為98.10%，其校正決定系數(shù)R2adj為90.50%，說明與包被活菌濃度相關(guān)因素中，不能由此模式解釋的基本不足10%；模型的P值為0.029 0＜0.05，證明該模型能較好的擬合數(shù)據(jù)，較好地反映了各因素之間的關(guān)系。

表4 Plackett-Burman試驗設(shè)計方差分析Table 4 Variance analysis of Plackett-Burman experimental design

由表4可知，葡萄糖、酵母粉、檸檬酸氫二銨、硫酸鎂、乙酸鈉、海藻酸鈉、納米碳酸鈣對菌株LaXW118包被發(fā)酵為正效應(yīng)，即隨著添加量的增大，包被活菌濃度呈現(xiàn)升高趨勢，選擇高濃度；蛋白胨、牛肉膏、七水磷酸氫二鉀、四水硫酸錳、吐溫-80對LaXW118包被發(fā)酵為負效應(yīng)，選擇低濃度。由P值和貢獻率可知，葡萄糖和納米碳酸鈣對液芯微膠囊包被發(fā)酵的活菌濃度影響極顯著（P＜0.01），海藻酸鈉對包被發(fā)酵的活菌濃度影響顯著（P＜0.05）。因此，選擇葡萄糖、海藻酸鈉、納米碳酸鈣3 個因素作為主要研究對象，對菌株LaXW118微囊包被發(fā)酵培養(yǎng)基進行進一步優(yōu)化。

2.3 最陡爬坡試驗

根據(jù)Plackett-Burman試驗結(jié)果分析確定了葡萄糖、海藻酸鈉和納米碳酸鈣3個因素為影響包被活菌濃度的顯著性因素，對菌株LaXW118影響均為正效應(yīng)，因此上升方向為各因素濃度梯度遞增；以低水平（-1）到高水平（1）的1/5為步長進行最速上升試驗，確定中心點，試驗設(shè)計及結(jié)果如表5 所示。

表5 最陡爬坡試驗設(shè)計結(jié)果Table 5 Results of the steepest ascent experimental design

由表5可知，隨著葡萄糖、海藻酸鈉和納米碳酸鈣濃度的變化，包被活菌濃度呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢。在試驗號6組達到最高值，此時各因素含量為：葡萄糖7.5%、海藻酸鈉1.5%、納米碳酸鈣3.0%，因此選擇這3個因子濃度為中心點，進行響應(yīng)面分析。

2.4 中心組合設(shè)計優(yōu)化包被型嗜酸乳桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基

通過最陡爬坡試驗確定了主要影響因素的具體濃度的取值區(qū)間，以葡萄糖（X1）、海藻酸鈉（X2）、納米碳酸鈣（X3）3個因素為自變量，包被型菌株LaXW118活菌濃度（R）為響應(yīng)值，通過Design-expert 軟件設(shè)計3因素5水平的中心組合設(shè)計試驗，試驗設(shè)計和結(jié)果如表6所示。

表6 中心組合試驗設(shè)計結(jié)果Table 6 Results of central composite experimental design

續(xù)表

應(yīng)用Design Expert 8.0 軟件對表6 的數(shù)據(jù)進行軟件分析得到回歸方程的參數(shù)估計和方差分析，結(jié)果見表7。對表6中的試驗數(shù)據(jù)進行二次多項回歸擬合，得到擬合回歸方程如下：

表7 響應(yīng)面試驗結(jié)果方差分析Table 7 Variance analysis of response surface experiments results

由表7可知，二次響應(yīng)面回歸模型的決定系數(shù)R2為97.88%，校正后的決定系數(shù)R2adj為95.76%，只有總變異4.24%

圖2 各因素交互作用對包被嗜酸乳桿菌濃度影響的響應(yīng)面及等高線Fig. 2 Response surface plots and contour line of effects of interaction between each factors on encapsulated Lactobacillus acidophilus concentration

由擬合方程可繪制響應(yīng)面三維分析圖見圖2。每個響應(yīng)面三維分析圖和對應(yīng)的等高線圖分別為當一個變量保持0水平時，另2 個獨立變量之間的交互作用。由圖2可知，葡的情況不能用該模型解釋，變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）為1.85%＜4.00%，說明該模型擬合度好，模型精準度較高，模型可信；該回歸方程的F值為46.18，P值＜0.000 1，出現(xiàn)噪聲的機會＜0.01%，說明該試驗?zāi)Ｐ偷淖宰兞亢鸵蜃兞恐g的函數(shù)關(guān)系極其顯著（P＜0.05），在概率為0.05的水平上足夠擬合試驗數(shù)據(jù)；并且失擬檢驗的F值為4.82，P值為0.076 1＞0.05，說明失擬項對于誤差不顯著，進一步說明回歸模型顯著，該試驗?zāi)Ｐ涂尚哦雀?，能夠較好的解釋包被型嗜酸乳桿菌濃度的變化，因此可利用該模型對包被型嗜酸乳桿菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化與生物量進行預(yù)測。萄糖與納米碳酸鈣，葡萄糖與海藻酸鈉、海藻酸鈉與納米碳酸鈣對發(fā)酵后包被活菌濃度的交互作用極顯著（P＜0.01），說明它們之間對發(fā)酵后包被活菌濃度的影響并不是簡單的線性關(guān)系；在一定范圍內(nèi)，隨著葡萄糖、海藻酸鈉和納米碳酸鈣濃的增加，發(fā)酵后包被活菌濃度隨之增加；當達到最大值后，隨著各因素濃度的繼續(xù)增加，發(fā)酵后包被活菌濃度的產(chǎn)量逐漸減小，進一步說明各因素之間存在交互作用共同影響著包被型嗜酸乳桿菌高密度發(fā)酵，只有在各因素濃度適宜的條件下，發(fā)酵后包被活菌濃度的產(chǎn)量才會達到最大值。

在獲得回歸非線性模型和響應(yīng)面之后對已回歸的非線性模型方程求極值，可以得到曲面的最大點。對回歸方程求解最大值可得：當X1=0.538、X2=-0.518、X3=-0.325，即當葡萄糖為7.77%、海藻酸鈉為1.45%、納米碳酸鈣為2.93%。在此最佳條件下，嗜酸乳桿菌包被發(fā)酵的菌體濃度預(yù)測值為4.11×1010CFU/mL。

2.5 驗證試驗

按4%的接種量接種到發(fā)酵罐中，于37 ℃、100 r/min恒溫厭氧培養(yǎng)20 h，每隔1 h取樣，得到包被發(fā)酵和游離培養(yǎng)的嗜酸乳桿菌的生長曲線見圖3。由圖3可知，游離培養(yǎng)的嗜酸乳桿菌在0～8 h時處于延遲期，8～16 h處于對數(shù)生長期，16 h后進入衰亡期。包被發(fā)酵的嗜酸乳桿菌在短暫的延遲期后，迅速進入對數(shù)生長期，與游離培養(yǎng)的生長曲線相比較，包被發(fā)酵比游離培養(yǎng)的提前3 h進入對數(shù)生長期，且在對數(shù)生長期菌體的生長速率明顯高于游離培養(yǎng)的菌體生長，最終生物量為4.322×1010CFU/mL，是游離培養(yǎng)的4.25倍。從pH 變化曲線可以看出，整個生長周期中pH逐漸下降，在對數(shù)期中增殖菌體伴隨乳酸產(chǎn)生，下降速率較快，進入衰亡期后游離培養(yǎng)的pH降至3.38，但在包被發(fā)酵的整個生長周期pH值都在5.6以上，在對數(shù)期時下降速率顯著低于游離培養(yǎng)（P＜0.05）。包被發(fā)酵為實現(xiàn)高密度培養(yǎng)提供較穩(wěn)定pH環(huán)境，從而提高菌體濃度。

圖3 包被發(fā)酵和游離培養(yǎng)的嗜酸乳桿菌的生長曲線Fig. 3 Growth curve of Lactobacillus acidophilus in encapsulated fermentation and free culture

2.6 游離及包被嗜酸乳桿菌固態(tài)產(chǎn)品貯藏穩(wěn)定性

將包被發(fā)酵和游離培養(yǎng)后的嗜酸乳桿菌離心收集菌泥，添加復(fù)合保護劑真空冷凍干燥后制備成凍干粉，取適量包被發(fā)酵和游離培養(yǎng)后的嗜酸乳桿菌的凍干菌粉在37 ℃條件下的加速貯藏試驗，分別在第0、10、30、65、100天取樣檢測每克產(chǎn)品的活菌數(shù)，判斷其貯藏穩(wěn)定性。由表8可知，游離培養(yǎng)得到的嗜酸乳桿菌凍干粉在37 ℃條件下貯藏，活菌數(shù)急速下降，第10天存活率降至1.5%；而包被發(fā)酵得到的嗜酸乳桿菌凍干粉在37 ℃條件下貯藏10 d內(nèi)活菌數(shù)沒有明顯的下降，第100天存活率還有75.2%。說明包被發(fā)酵嗜酸乳桿菌凍干粉具有很好的穩(wěn)定性和較長的貨架期，這為今后嗜酸乳桿菌包被發(fā)酵的工業(yè)化生產(chǎn)及推廣應(yīng)用提供依據(jù)。

表8 凍干菌粉在37 ℃條件下的加速儲存試驗結(jié)果Table 8 Results of freeze-dried bacteria powder at 37 ℃for acceleration storage

3 結(jié)論

采用中心組合設(shè)計探索包被型嗜酸乳桿菌高密度發(fā)酵的最優(yōu)增菌培養(yǎng)基，通過Plackett-Burman 試驗設(shè)計快速篩選出葡萄糖、海藻酸鈉和納米碳酸鈣3個對嗜酸乳桿菌包被發(fā)酵的生物量影響顯著，并通過最陡爬坡試驗進一步確定了它們的取值范圍，最后通過響應(yīng)面設(shè)計優(yōu)化法建立多項數(shù)學模型，運用統(tǒng)計分析對模型進行顯著性檢驗來優(yōu)化包被發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳組成。優(yōu)化后的嗜酸乳桿菌包被發(fā)酵的增菌培養(yǎng)基為：葡萄糖7.77%、蛋白胨2%、牛肉膏2%、酵母粉3%、檸檬酸氫二銨0.3%、七水磷酸氫二鉀0.2%、七水硫酸鎂0.09%、四水硫酸錳0.025%、三水乙酸鈉0.3%、吐溫-80 0.1%、海藻酸鈉1.45%、納米碳酸鈣2.93%。在此優(yōu)化條件下，嗜酸乳桿菌包被發(fā)酵的菌體濃度達4.322×1010CFU/mL，是游離培養(yǎng)的4.25倍，與預(yù)測值相近，基本達到了嗜酸乳桿菌高密度培養(yǎng)的要求，為嗜酸乳桿菌包被發(fā)酵的工業(yè)化生產(chǎn)提供科學依據(jù)。

采用本實驗室包被發(fā)酵技術(shù)培養(yǎng)嗜酸乳桿菌后，發(fā)現(xiàn)菌體細胞聚集成團的形成微膠囊，囊內(nèi)菌體密度較大，未出現(xiàn)破囊現(xiàn)象，菌體也沒有明顯泄漏，且所形成的微囊大小較均勻，成球形良好，界限明顯。離心收集冷凍干燥制備成凍干粉的加速儲存穩(wěn)定性試驗中發(fā)現(xiàn)，包被發(fā)酵嗜酸乳桿菌凍干粉在37 ℃條件下貯藏10 d內(nèi)活菌數(shù)沒有明顯的下降，活菌仍保留75%以上的存活。包被發(fā)酵嗜酸乳桿菌凍干粉具有很好的穩(wěn)定性和較長的貨架期，為嗜酸乳桿菌益生菌產(chǎn)品的開發(fā)打下了基礎(chǔ)。