甲霜靈、霜霉威在人參中的殘留檢測(cè)方法研究

毛健偉，劉建國(guó)，劉 哲，王大川，朱翔宇，祁穎慧

(吉林省農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站，吉林 長(zhǎng)春 130033)

甲霜靈(metalaxyl)：化學(xué)名稱：N-(2-甲氧基乙酰基)-N-(2,6-二甲基苯基)-DL-α-氨基丙酸甲酯，化學(xué)分子式：C15H21NO4，水中溶解度8.4(g/L，22℃)。甲霜靈具強(qiáng)內(nèi)吸性和治療、保護(hù)作用，其殺菌作用機(jī)理是抑制病菌RNA的合成，從而抑制真菌的蛋白質(zhì)合成，甲霜靈在我國(guó)已取得登記，主要用于防治人參疫病、黃瓜霜霉病、馬鈴薯晚疫病、煙草的黑脛病、葡萄的霜霉病等。

霜霉威鹽酸鹽(propamocarb hydrochloride):化學(xué)名稱：N-〔3-(二甲基氨基)丙基〕氨基甲酸丙酯鹽酸鹽，化學(xué)分子式：C9H21CLN2O2，水中溶解度>500(g/L，20℃)。霜霉威是一種高效、廣譜、內(nèi)吸性的氨基甲酸酯類殺菌劑，其殺菌機(jī)理是抑制病菌細(xì)胞膜成分的磷脂和脂肪酸的生物合成，進(jìn)而抑制菌絲生長(zhǎng)、孢子囊的形成和萌發(fā),具有保護(hù)和治療雙重作用。霜霉威在我國(guó)已取得登記，其制劑為有效成分為霜霉威鹽酸鹽，主要用于防治人參、甜椒、煙草、葡萄等霜霉病及疫病。

精甲霜靈用于防治人參銹腐病、立枯病，推薦有效成分用藥量：4 500～9 000g/ha，施藥方法：土壤處理，播種前或移栽前使用，每年最多使用1次，安全間隔期135d，霜霉威用于防治人參疫病，推薦有效成分用藥量758.1～1 516.2g/ha，施藥方法：莖葉噴霧，危害發(fā)生初期使用，每年最多使用1次，安全間隔期21d。同時(shí)，有研究表明兩者藥物混用，對(duì)于疫病沒(méi)有交互抗性。

人參是我國(guó)傳統(tǒng)中藥材，被譽(yù)為百草之王，是我國(guó)重要的出口藥材。目前，我國(guó)尚未制定甲霜靈、霜霉威在人參上的MRL(農(nóng)藥最高殘留限量)值，歐盟規(guī)定甲霜靈、霜霉威在人參上的MRL值均為0.05mg/kg[5～6]。甲霜靈在人參、黃瓜等作物上的殘留研究[7～8]及霜霉威鹽酸鹽在番茄、黃瓜、馬鈴薯等作物上的殘留[9-11]已有相關(guān)報(bào)道，但2種農(nóng)藥在人參上的殘留研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本文建立高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)鮮園參和生曬參中的甲霜靈、霜霉威鹽酸鹽的殘留量，結(jié)果表明，方法快速，精密度好、回收率高，滿足殘留分析要求。

1 試驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

1.1.1 試劑 甲霜靈標(biāo)準(zhǔn)品：純度99.2%，國(guó)家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心(北京)；霜霉威標(biāo)準(zhǔn)品：純度99.7%，北京勤誠(chéng)亦信科技開(kāi)發(fā)有限公司；乙腈：色譜純，sigma-aldrich；氯化鈉：北京化工廠；硫酸鎂：北京化工廠；C18：Agela technologies；甲酸：CNW；乙酸銨：CNW。

1.1.2 儀器 液相色譜-質(zhì)譜儀：配備電噴霧離子源(ESI)安捷倫1200-6410；分析天平：XSE204，Mettler Toledo；勻質(zhì)機(jī)：C25，Henc；離心機(jī)：北京醫(yī)用離心機(jī)廠LD5-2A；超聲波清洗器：SK8210LHC，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司；組織搗碎機(jī)：CombiMax 600，Braum；植物粉碎機(jī)：Cyclotec 1093，F(xiàn)OSS。

1.2 儀器條件

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Zorbax eclipse plus C182.1×100mm (Agilennt公司) ；流動(dòng)相：0.1%甲酸-5mmol/L乙酸銨水溶液：乙腈梯度洗脫，洗脫程序(表1)；柱溫25℃；進(jìn)樣量：5μL；流速：0.3mL/min。

表1 梯度洗脫參數(shù)

1.2.2 質(zhì)譜條件 質(zhì)譜掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；掃描方式：正離子掃描；離子源：ESI；毛細(xì)管電壓：+3.5kv；干燥器溫度：350℃；干燥器流速：10L/min；質(zhì)譜其他條件(表2)。

表2 甲霜靈、霜霉威測(cè)定的質(zhì)譜離子對(duì)、錐孔電壓、碰撞能量

1.3 樣品制備

1.3.1 鮮園參 取鮮參切分成碎塊，搗碎制成均勻的漿狀。

1.3.2 生曬參 取生曬參切分成碎塊，用植物粉碎機(jī)粉碎，過(guò)0.18mm孔徑篩。

1.4 樣品制備

1.4.1 鮮園參 稱取2g試樣(精確至0.01 g)于50mL 離心管中，加入1mL水和10mL乙腈，渦旋混合1min后，分別加入1gNaCl和1g無(wú)水MgSO4，搖勻后以4 000r/min速度離心5min，取3mL上清液于10mL離心管中，加入40mgC18凈化劑，搖勻后以4 000r/min速度離心5min，取上清液過(guò)0.22μm有機(jī)相濾膜，供液相色譜質(zhì)譜分析。

1.4.2 生曬參 稱取1g試樣(精確至0.01 g)于50mL 離心管中，加入2mL水超聲提取10min后，加入10mL乙腈，渦旋混合1min后，分別加入1gNaCl和1g無(wú)水MgSO4，搖勻后以4 000r/min速度離心5min，取3mL上清液于10mL離心管中，加入40mgC18凈化劑，搖勻后以4 000r/min速度離心5min，取上清液過(guò)0.22μm有機(jī)相濾膜，供液相色譜質(zhì)譜分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 凈化劑的選擇 人參基質(zhì)比較復(fù)雜，為了減少雜質(zhì)的干擾，需要進(jìn)行凈化處理。分別采用的C18和PSA劑量分別為20mg和40mg進(jìn)行分散固相萃取凈化，結(jié)果表明，C18劑量在40mg凈化，回收率符合農(nóng)殘分析要求。

2.2 分析方法的線性相關(guān)測(cè)定 在1.2條件下，由對(duì)甲霜靈和霜霉威在0.02～1mg/kg濃度范圍內(nèi)制備0.002、0.004、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1 mg/kg共8個(gè)濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，以濃度與峰面積進(jìn)行線性回歸分析。試驗(yàn)結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度與其相應(yīng)的響應(yīng)值均具有良好的線性關(guān)系。甲霜靈和霜霉威的線性方程分別為Y=1.25e7X-6.85e3和Y=6.80e6X+3.88e3，線性相關(guān)系數(shù)(R2)分別為0.996 8和0.999 8。

2.3 精密度、回收率試驗(yàn) 采用添加法，在樣品中添加已知含量的標(biāo)準(zhǔn)品，在上述條件下進(jìn)行測(cè)定，添加水平分別為0.02、0.1、1mg/kg，每水平單獨(dú)測(cè)定10次，實(shí)測(cè)值、回收率和精密度試驗(yàn)結(jié)果(圖1、表3～4)。

圖1 A:甲霜靈和霜霉威混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的MRM色譜圖(0.02mg/kg)；B:空白樣品MRM色譜圖；C：甲霜靈和霜霉威人參添加樣品的MRM色譜圖(0.02mg/kg)

添加物名稱基質(zhì)添加水平(mg/kg)實(shí)測(cè)值123456789100.020.0160.0180.0220.0210.0210.0210.0200.0200.0210.020生曬參0.10.1010.0970.1010.1020.1000.0960.0990.0990.1010.101甲霜靈10.9840.9601.0000.9840.9830.9630.9590.9460.9730.9520.020.0200.0210.0200.0200.0210.0200.0200.0200.0190.019鮮園參0.10.1030.1040.1020.0970.0970.0960.1010.0990.0940.09810.9070.9280.9130.9070.9160.8940.8950.8840.8820.8720.020.0190.0190.0220.0210.0210.0200.0200.0180.0200.020生曬參0.10.0870.0760.0850.0890.0850.0830.0810.0830.0830.082霜霉威11.0220.9881.0230.8741.0690.9480.9430.9881.0110.9550.020.0220.0200.0210.0200.0200.0200.0190.0210.0160.019鮮園參0.10.1010.0940.0910.0970.1000.0970.0930.0890.0960.09310.9210.8950.8860.8920.9190.8810.8060.8850.8420.866

表4 不同添加水平平均回收率及精密度數(shù)據(jù)(n=10)

續(xù)表

3 結(jié)論

本文采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)人參中的甲霜靈、霜霉威，分析方法快速、簡(jiǎn)便、精確，在低濃度和高濃度范圍內(nèi)添加，回收率范圍在76.0%～110.0%，變異系數(shù)<7.61%，符合農(nóng)藥殘留分析的要求。