海南虎奶菇抗氧化活性的研究

陳喜蓉，柯智，林芳能，鐘劍鋒，吳彪，陽記萍

（海南省林業(yè)科學(xué)研究院，海南?？?571100）

虎奶菇(Pleurotus tuber-regium)屬擔(dān)子菌綱，傘菌目，側(cè)耳科，側(cè)耳屬，別名核耳菇、菌核側(cè)耳、南洋茯苓等[1]，子實(shí)體及菌核富含蛋白質(zhì)、礦質(zhì)元素、多種維生素等，是一種珍稀食藥用菌[2]。主要分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)，最早發(fā)現(xiàn)于非洲[3]，中國(guó)主產(chǎn)區(qū)位于江西省撫州、云南省騰沖和章風(fēng)縣一帶[4～5]。虎奶菇的子實(shí)體和菌核均可食用，其所含的多糖、多酚、麥角硫因、多酮類化合物、維生素等成分與抗氧化活性有關(guān)[6]。這些活性成分有利于抗氧化、抗癌、抗腫瘤、降血脂血糖等[7]。而IC50是指半抑制率，與抗氧化活性成反比；IC50值越小，反應(yīng)速率越大，表明其抗氧化活性越好。

虎奶菇富含蛋白質(zhì)、氨基酸和礦物質(zhì)等，食用藥用價(jià)值高，市場(chǎng)需求量較大，但其生長(zhǎng)周期較長(zhǎng)，野生資源有限，難以滿足人們的需求。近些年來越來越多的地區(qū)通過人工栽培來解決食用菌資源緊缺的問題，但目前國(guó)內(nèi)未見虎奶菇大規(guī)模人工栽培生產(chǎn)。筆者團(tuán)隊(duì)前期已經(jīng)進(jìn)行了虎奶菇適宜品種及最適菌種培養(yǎng)基篩選的初步探索工作，該研究再從不同栽培地點(diǎn)對(duì)其抗氧化活性的影響方面進(jìn)行對(duì)比分析，為虎奶菇在海南的栽培技術(shù)研究及其產(chǎn)品深入開發(fā)奠定理論基礎(chǔ)。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

虎奶菇由海南省林業(yè)科學(xué)研究院提供；DPPH；無水乙醇?；⒛坦椒謩e栽培于海南省三亞市（三亞虎奶菇）、海南省瓊中黎族自治縣（瓊中虎奶菇）和海南省林業(yè)科學(xué)研究院定安龍州基地（定安虎奶菇和定安虎奶菌核），三個(gè)供試地基本概況見表1：

表1 供試地基本概況Tab.1 Basic profile of the sample location

DPPH 自由基母液的配制：用FA1604 電子分析天平精密稱取0.0400gDPPH，用95%的乙醇溶液溶解并用500ml 棕色容量瓶定容，所得溶液為濃度為2×10-4mol·L-1的DPPH 自由基溶液，置于冰箱中冷藏備用。

實(shí)驗(yàn)儀器有可見分光光度計(jì)、FA1604 電子分析天平、RE-52AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、SB2200 超聲波清洗器、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、SHB-IIIA 真空泵和HH2 數(shù)顯恒溫水浴鍋。

1.2 虎奶菇的抗氧化活性測(cè)定

1.2.1 提取方法

分別稱取四種不同虎奶菇樣品10g，按料液比1：10 加入95%乙醇，混勻后置于超聲波處理器中，在45kHz 條件下超聲震蕩30min。真空抽濾后，濾渣用乙醇再次震蕩提取一次，兩次濾液合并加入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中蒸發(fā)濃縮到100ml 的浸提液，即得濃度為0.10g/ml 的樣品溶液放于冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 抗氧化活性的測(cè)定

按表2 加樣，總體積4mL，黑暗下反應(yīng)30min。用光徑1cm 的比色皿裝溶液放置于紫外可見分光光度計(jì)中，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)在518nm 處，并以95%乙醇為空白參比，測(cè)定各吸光度值，各重復(fù)測(cè)定兩次，取其平均值。不同濃度的海南栽培虎奶菇提取物溶液對(duì)DPPH 自由基的清除率按式（1）計(jì)算[8]：

表2 DPPH·自由基測(cè)定體系加樣測(cè)定Tab.2 Sampling determination of DPPH free radical determination system

1.2.2 IC50值的測(cè)定

通過軟件擬合計(jì)算得出三亞虎奶菇、定安虎奶菇、定安虎奶菌核、瓊中虎奶菇四種樣品的IC50值。

2 結(jié)果與分析

2.1 DPPH 自由基的清除能力

由圖1 可知，樣品濃度越高，對(duì)DPPH 自由基的清除能力越強(qiáng)。當(dāng)加入樣品濃度為0.005g/mL 時(shí)，四種樣品對(duì)DPPH 自由基的清除能力由大到小依次為：瓊中虎奶菇＞三亞虎奶菇＞定安虎奶菇＞定安虎奶菌核；當(dāng)樣品濃度為0.025g/mL 時(shí)，清除能力由大到小依次為：三亞虎奶菇＞瓊中虎奶菇＞定安虎奶菇＞定安虎奶菌核；而當(dāng)樣品濃度為0.05g/mL 時(shí)，三亞虎奶菇、定安虎奶菇和瓊中虎奶菇的清除能力都顯著大于定安虎奶菌核。綜上所述，在三種不同樣品濃度下，虎奶菇子實(shí)體對(duì)DPPH 自由基的清除能力均比菌核強(qiáng)。

圖1 不同樣品濃度的清除率Fig.1 Clearance rate of different sample concentration

2.2 IC50 值

由表3 可知，在三亞虎奶菇、瓊中虎奶菇、定安虎奶菇、定安虎奶菌核四種樣品中，IC50值由小到大依次為：三亞虎奶菇＜瓊中虎奶菇＜定安虎奶菇＜定 安 虎 奶 菌 核，IC50值 分 別 為 0.0131g/mL、0.0145g/mL、0.0227g/mL 和0.3833g/mL。三個(gè)地區(qū)虎奶菇子實(shí)體的IC50值均比定安虎奶菌核低，其中三亞虎奶菇IC50值最低，為定安虎奶菌核的3.42%；而瓊中虎奶菇和定安虎奶菇的IC50值分別為定安虎奶菌核的3.78%和5.92%。

表3 四種樣品的IC50 值Tab.3 The IC50 value of four samples

3 討論

DPPH 自由基是一種穩(wěn)定的以氮為中心的有機(jī)合成的自由基，若能被某受試物清除，則意味著該受試物具有清除自由基的能力，因此常作為基質(zhì)評(píng)價(jià)某物質(zhì)的抗氧化能力。清除率越大，其抗氧化能力越強(qiáng)[9]。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在三種不同樣品濃度下，虎奶菇子實(shí)體對(duì)DPPH 自由基的清除率均比菌核大，說明虎奶菇子實(shí)體的抗氧化能力比菌核強(qiáng)。IC50是指半抑制率，與抗氧化活性成反比；IC50值越小，反應(yīng)速率越大，表明其抗氧化活性越好。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，四種樣品中，三亞虎奶菇的IC50值最小，說明其抗氧化活性最強(qiáng)，可能是因?yàn)槿齺喌哪昃照諘r(shí)長(zhǎng)較長(zhǎng)，且年平均氣溫相對(duì)較高（見表1），有利于虎奶菇多糖、多酚等生物活性物質(zhì)的合成，從而使其抗氧化活性提高；而三個(gè)樣品的虎奶菇子實(shí)體的IC50值均比定安虎奶菌核小，說明三個(gè)樣品的虎奶菇子實(shí)體的抗氧化活性均比虎奶菌核強(qiáng)。

據(jù)報(bào)道，抗氧化活性與食用菌所含的生物活性物質(zhì)如多糖、多酚、麥角硫因、多酮類化合物、維生素等成分有關(guān)[6]。研究發(fā)現(xiàn)，這些成分有利于抗癌、抗腫瘤、降血脂血糖等。目前對(duì)虎奶菇化學(xué)成分的研究尚未形成系統(tǒng)，未明確虎奶菇的蛋白質(zhì)和多糖含量以及其他可能有效成分，還需要繼續(xù)深入研究。另外需加強(qiáng)虎奶菇菌核和子實(shí)體的食藥用價(jià)值的研究，比較分析其優(yōu)缺點(diǎn)、最佳采收期等?；⒛坦骄烁缓烊坏纳攀忱w維，且其成分具有優(yōu)良特性，符合人類對(duì)綠色健康食品的需求。另外，其屬于溫性且營(yíng)養(yǎng)豐富的食用菌，可作為多用途的低熱量食物的配料[10]?？梢葬槍?duì)其特性進(jìn)行深加工，研發(fā)綠色新型保健食用產(chǎn)品。