復(fù)方紅景天滴丸的制備工藝研究*

鄭路靜 ，劉慶煥 ，陶遵威

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 301617；2.天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所，天津 300020）

缺血性腦損傷可導(dǎo)致腦細(xì)胞壞死或凋亡，其高致殘率、高致死率，給現(xiàn)代家庭與社會帶來了沉重的負(fù)擔(dān)[1-2]。隨著人們對腦缺血認(rèn)識的逐漸加深，大量科研數(shù)據(jù)為改善該病癥提供了新的方法與思路。天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所以“行氣活血、化瘀通絡(luò)”為原則，聚焦缺血性腦損傷“氣虛血滯、脈絡(luò)瘀阻”的病機，組方紅景天、延胡索、川芎以及冰片為復(fù)方，成為第一個使用該方治療腦缺血損傷的機構(gòu)。藥理學(xué)實驗表明紅景天復(fù)方可減緩海馬組織神經(jīng)細(xì)胞凋亡，對腦缺血損傷起到保護(hù)作用[3]。本研究對該方的提取及制劑工藝做進(jìn)一步探究，運用高效液相色譜法（HPLC）技術(shù)，以君藥中紅景天苷的含量及干膏率為綜合評價指標(biāo)，采用正交實驗優(yōu)選復(fù)方紅景天的醇提工藝，并考察了滴丸的成型工藝，以期為工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀（島津LC-20AT，日本島津公司），PDA檢測器（日本島津公司），ME203E電子天平（METTLER TOLEDO上海有限公司）。

1.2 材料 紅景天、延胡索等藥材均購自天津市中藥飲片廠有限公司，紅景天苷對照品購自中國藥品生物制品檢定所（批號：110818-201005），PEG4000、PEG6000（天津市瑞金特化學(xué)品有限公司），二甲基硅油（天津市化學(xué)試劑供銷公司），甲醇為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取方法 按處方比例精密稱定各藥材，放置圓底燒瓶中，在85℃條件下水浴加熱，進(jìn)行回流提取，收集濾液，測定相關(guān)理化指標(biāo)。

2.2 評價指標(biāo)的測定

2.2.1 干膏率的測定 按處方配比稱量各藥材9份，根據(jù)L9（34）正交實驗設(shè)計表加乙醇回流，過濾，合并濾液，精密吸取20.0 mL提取液至已干燥恒重的蒸發(fā)皿中，蒸干至恒質(zhì)量，干燥器內(nèi)冷卻，稱定干膏質(zhì)量，計算。

2.2.2 紅景天苷含量測定 紅景天苷檢測波長的確定：通過查閱資料，紅景天苷（Salidroside）在波長為223、275nm時均存有較強吸收峰[4-5]。實驗前期將5 mg紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品分別在223、275nm波長下進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示223 nm波長下，紅景天苷的峰面積高于275 nm，且雜質(zhì)干擾少，故本實驗在223 nm波長下進(jìn)行檢測。

色譜條件：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相∶甲醇-水（85∶15）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：223 nm；柱溫：室溫。

對照品溶液的制備：精密稱定13.45 mg紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品，置于100 mL量瓶，加70%甲醇溶解，配置成濃度為0.134 5 mg/mL溶液，搖勻，即得。

供試品溶液的制備 精密吸取10 mL提取液，轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿，蒸干，加70%甲醇溶解，定容至10mL，留取續(xù)濾液過0.45μm濾膜，進(jìn)樣，計算含量。

2.2.3 方法學(xué)考察 線性關(guān)系考察：配置系列濃度對照品溶液，進(jìn)樣到液相色譜儀，在上述色譜條件下分析，橫坐標(biāo)為對照品進(jìn)樣量，縱坐標(biāo)為峰面積積分值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=1×106X-10 118（r=0.999 7），進(jìn)樣量線性范圍 0.134～2.69 μg。

精密度實驗：取對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，得紅景天苷峰面積值RSD為0.67%，精密度良好。

穩(wěn)定性實驗：取“2.2.2”項下同一供試品，室溫條件下，分別于 0、2、4、8、12 和 24 h 進(jìn)行色譜測定。結(jié)果顯示，紅景天苷含量的RSD為1.90%，表明樣品在24 h穩(wěn)定。

重復(fù)性實驗：相同條件下，按供試品儲備液制備方法平行提取6份，進(jìn)樣測定，記錄HPLC圖，RSD1.28%，本方法重復(fù)性良好。

加樣回收率：取6份已知含量的提取液各5 mL，精密量取，分別精密加入配制濃度為215.2 μg/mL的對照品溶液，各5 mL，折合成紅景天苷的含量為1.076 mg。按“2.2.2”項下操作方法制備，進(jìn)行色譜測定，計算平均回收率為100.27%，RSD 1.99%。

2.3 提取工藝設(shè)計 結(jié)合藥材性質(zhì)和參考文獻(xiàn)[6-7]，確定采用乙醇回流提取，選定影響提取的幾個主要因素。實驗前期采用單因素實驗，對時間、次數(shù)、濃度和倍數(shù)進(jìn)行考察。其提取工藝因素與水平設(shè)計，見表1。

表1 因素水平

2.4 正交實驗設(shè)計優(yōu)選提取方法 參照文獻(xiàn)[8-9]。醇提部分以君藥中紅景天苷的提出量和干膏率作為考察指標(biāo)。選用綜合加權(quán)評分法優(yōu)選提取工藝，權(quán)重系數(shù)分別為0.7，0.3，綜合評分=（0.7×紅景天苷含量/最大紅景天苷含量）×100+（0.3×干膏率/干膏收率最大值）×100。參考單因素的結(jié)果，選定影響提取工藝的3個水平（表1），按照L9（34）表設(shè)計安排實驗。采用正交實驗助手IIV3.1進(jìn)行正交設(shè)計分析，結(jié)果見表2。

表2 正交實驗結(jié)果

2.4.1 正交實驗結(jié)果分析 比較各因素的直觀分析（見表2）可知，各影響因素對醇提效果的影響大小為A＞B＞D＞C。方差分析結(jié)果，A、B、D 因素對提取結(jié)果有顯著影響，綜合極差分析、提取效率、提取成本等考慮，最優(yōu)工藝確定為A2B1C2D2，即濃度為60%乙醇、10倍量、提取2次，每次1.5 h。

表3 方差分析

2.5 驗證實驗 根據(jù)正交實驗結(jié)果，為驗證上述最佳工藝的穩(wěn)定性，按處方稱取紅景天等藥材，分別按優(yōu)選工藝進(jìn)行實驗。測定兩個考察指標(biāo)，得出紅景天苷平均含量為1.73%，RSD=1.2%；測得干膏收率平均值24.82%，RSD=1.6%（n=3）。驗證結(jié)果顯示，依據(jù)該實驗方法確定的紅景天復(fù)方醇提工藝合理，且穩(wěn)定、可行。

2.6 滴丸的制備

2.6.1 冷凝劑的選擇 分別以二甲基硅氧烷的聚合物（二甲基硅油）、液體石蠟為冷卻液，考察冷凝效果。結(jié)果表明液體石蠟為冷凝劑，下降快，易粘連，外形不圓整。而二甲基硅油中，滴丸間不粘連，下降速度適中，外形良好、圓整，因此本實驗選取的冷凝劑為二甲基硅油。

表4 三批驗證實驗結(jié)果

2.6.2 基質(zhì)的選擇與配比 根據(jù)藥物性質(zhì)和基質(zhì)所特有的內(nèi)聚力、分散力等理化特點，選用水溶性PEG6000和PEG4000作為制備滴丸所需基質(zhì)。實驗顯示，以PEG4000作為滴丸唯一基質(zhì)時，硬度欠佳，因此加入PEG6000調(diào)整，實驗以硬度、是否圓整、脫尾情況、滴制的難易、是否漂浮為考察指標(biāo)，綜合考慮，選取PEG40000與PEG6000比例為2∶1作為滴丸基質(zhì)，表5。

表5 不同基質(zhì)配比對滴丸成型的影響

2.6.3 藥物與基質(zhì)比例 滴丸質(zhì)量的優(yōu)劣與載藥量密切相關(guān)。選取PEG4000與PEG000比例為2∶1，其他條件均固定，以軟硬程度、是否拖尾、外觀圓整度、以及有無氣泡為評價標(biāo)準(zhǔn)，考察藥基配比對滴丸成型性影響。結(jié)果顯示，藥物與基質(zhì)選擇1∶2.5～1∶5時滴丸成型性較好。見表6。

表6 藥物與基質(zhì)配比對滴丸成型的影響

2.6.4 滴丸的制備條件 滴丸為近幾年中藥制劑的新劑型，利用固體分散技術(shù)，使藥物以分子、微晶或膠體狀態(tài)分散于基質(zhì)中，從而更有利于藥物的溶解和吸收[10]。而滴丸的制備工藝比較復(fù)雜，除受上述冷凝劑、基質(zhì)配比和載藥量影響外，其質(zhì)量和成型還與多種因素有關(guān)，因此想要制成滴丸，很難用單個指標(biāo)衡量其可行性。本實驗后期考察了熔融溫度、滴距等因素通過影響滴丸粘連程度、圓整度、拖尾、硬度，結(jié)合量化指標(biāo)丸重差異系數(shù)，綜合評定制備工藝，并對溶散時限進(jìn)行了考察。本研究最終選定的制備條件為二甲基硅油，PEG4000與PEG6000的最佳比例為 2∶1，藥基比例 1∶2.5，滴速 30 d/min，滴距4 cm，藥液溫度80℃。

2.6.5 溶散時限檢查 按照上述操作方法制備滴丸，并根據(jù)《中國藥典》2015年版（四部），通則0108丸劑的規(guī)定進(jìn)行實驗。取3批紅景天滴丸供試品，每批6丸，于升降式崩解儀內(nèi)，不加擋板按崩解時限檢查法進(jìn)行測定，應(yīng)在30 min內(nèi)全部溶散。實驗過程中3批滴丸溶散時間均小于30 min，表明本實驗方法制備的復(fù)方紅景天滴丸符合檢測規(guī)定。結(jié)果見表7。

表7 溶散時限檢測結(jié)果

3 討論

復(fù)方紅景天組方考究，君藥紅景天（Rhodiola crenulata）在《本草綱目》中被稱為“經(jīng)中上品”，味甘性寒，主治胸悶、體虛、周身乏力、惡心等癥[11-12]?，F(xiàn)代科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，紅景天具有延緩衰老、抗腫瘤、抗缺氧及調(diào)節(jié)人體免疫的功能，并且能夠保護(hù)腦缺血再灌注損傷[13-14]。川芎能活血、化瘀，止痛、行氣。且其行氣、活血、止痛的功能與抗腦缺血的作用機制緊密相關(guān)。其有效成分川芎嗪能夠輕易地透過血腦屏障，從而對腦缺血起到保護(hù)作用[15]。冰片與川芎，兩者配伍可以增強川芎的藥效作用[16]。延胡索具有活血行氣，鎮(zhèn)痛的作用，治療血瘀氣滯等證，隨著現(xiàn)代藥理學(xué)的深入探究，發(fā)現(xiàn)其具有良好的抗腦缺血、抗心肌缺血等作用，其主要成分為延胡索乙素[17-18]。紅景天、延胡索、川芎和冰片四味中藥合用，探討其改善腦缺血的作用。

方中君藥為紅景天，對病癥起主要治療作用，2015年版《中國藥典》規(guī)定該藥材質(zhì)量的控制指標(biāo)為紅景天苷（Salidroside），因此選取Salidroside為本實驗的含量指標(biāo)性成分。干膏得率對工藝提取具有指標(biāo)性意義，又是后期制劑成型的重要保障，對劑型的選擇、制劑工藝的確定以及給藥方案的確定具有重要意義。本實驗研究了不同條件下復(fù)方紅景天的提取效果，并采用正交實驗法對提取工藝進(jìn)行優(yōu)化選擇，并加以驗證，所得最佳工藝為：10倍量濃度為60%的乙醇，回流提2次，每次1.5 h。

本實驗藥方的組建用于改善治療腦缺血病癥，探索其滴丸的制備將有助于各有效成分更加快速的達(dá)到血藥濃度峰值，發(fā)揮其治療作用。充分體現(xiàn)滴丸快速釋藥、生物利用度優(yōu)良等優(yōu)勢，具有一定的臨床意義[19]。提高基質(zhì)與藥物比例，可改善滴制溶液粘稠度，使滴丸圓整、不拖尾，增加PEG4000含量可增大藥物在基質(zhì)中的溶解度，減少氣泡?；|(zhì)所含比例高，易于滴出、圓整，成型性優(yōu)良，考慮到基質(zhì)與藥物比例應(yīng)盡可能小，增加載藥量，確定藥物與基質(zhì)配比為1：2.5。本實驗對滴丸進(jìn)行了初步的探究，可為該組方的進(jìn)一步開發(fā)提供研究基礎(chǔ)。