養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶的制備及優(yōu)化*

陳慧潔 ，楊亞楠 ，丁 輝，李 薇 ，余河水 ，宋新波，，張麗娟

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 301617；2.天津中一制藥有限公司，天津 301617）

急、慢性咽炎為現(xiàn)代生活的常見病之一，它與咽部異物梗阻、咽痛的虛喉痹有相似的臨床表現(xiàn)，為上呼吸道慢性炎癥的一部分，病情反復(fù)，病程較長(zhǎng)，迄今為止，還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)針對(duì)這種疾病的具體治療方法[1-3]。為解決此種難治久愈的病癥，天津中醫(yī)藥大學(xué)名老中醫(yī)根據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)在經(jīng)典利咽名方的基礎(chǔ)上，總結(jié)出以北沙參、玄參、赤芍等為主要藥物的有效利咽的處方，該方立法采用以滋養(yǎng)肺胃陰液為主治本，利咽化痰為輔治標(biāo)，養(yǎng)陰利咽，達(dá)到標(biāo)本兼治的目的。

中藥袋泡茶是在中國(guó)散煮和茶劑的基礎(chǔ)上結(jié)合現(xiàn)代熱封紙質(zhì)茶包工藝制成的一種新劑型，茶劑體積小，攜帶方便，含生藥量大，溶出快，即泡即服，非常適合現(xiàn)代人的生活方式[4-5]。因此，現(xiàn)將該處方經(jīng)過(guò)水提制劑和粉碎顆粒復(fù)配，并結(jié)合中藥制劑和熱封紙質(zhì)茶包工藝制成一種快速、簡(jiǎn)單、易服的中藥醫(yī)療制劑—養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶[6-8]。筆者通過(guò)對(duì)養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶處方藥物的研究，建立了高效液相色譜（HPLC）同時(shí)測(cè)定本袋泡茶中有效利咽成分黃芩苷、黃芩素、芍藥苷、甘草苷、甘草酸銨、牛蒡子苷和補(bǔ)骨脂素等多個(gè)指標(biāo)成分含量的方法[9-11]，以有效成分含量和感官評(píng)分的綜合評(píng)審法為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[12-13]，優(yōu)化制備工藝，為進(jìn)一步研究開發(fā)這種新型利咽醫(yī)療制劑提供理論依據(jù)和參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Waters2695型HPLC（美國(guó)沃特世公司）；GL-21M湘儀離心機(jī)（湖南湘儀離心機(jī)有限公司）；AL204型電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；KQ2200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；ZDHW型調(diào)溫電熱套（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；全自動(dòng)新型鼓風(fēng)干燥箱（上海智城分析儀器制造有限公司）；中草藥粉碎機(jī)（天津市泰斯特儀器有限公司）；標(biāo)準(zhǔn)篩（上虞市五星沖壓篩工具）。

1.2 材料

1.2.1 處方組成 處方由12種中藥組方而成，處方主要組成為北沙參12 g，牛蒡子10 g，赤芍12 g，黃芩10 g，甘草6 g等。

1.2.2 處方藥物 北沙參、牛蒡子、赤芍、黃芩、甘草等均由北京同仁堂飲片有限責(zé)任公司提供。

1.2.3 化學(xué)試劑 乙腈（色譜純，美國(guó)Fisher公司）；超純水（美國(guó)PALL公司CascadaTM超純水機(jī)）；磷酸（分析純，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司）；甲醇（色譜純，美國(guó)Fisher公司）。

1.2.4 HPLC對(duì)照品 補(bǔ)骨脂素（純度≥98%，批號(hào)YJ0731SA14）芍藥苷（純度≥98%，批號(hào)NO1129A02）、牛蒡子苷（純度≥98%，批號(hào)NO1026A021）均購(gòu)自Solarbio公司；黃芩苷（純度≥98%，批號(hào)P16M8F31725）、黃芩素（純度≥98%，批號(hào)P16M8F31725）購(gòu)于上海源葉生物科技有限公司；甘草苷（純度≥98%，批號(hào)11610-201106）、甘草酸銨（純度≥93.1%，批號(hào)110731-201418）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究所。

1.2.5 包裝材料 根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)選用薄濾紙。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 制備工藝流程 養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶處方藥材經(jīng)過(guò)水提制劑和粉碎顆粒復(fù)配，并結(jié)合中藥制劑和熱封紙質(zhì)茶包工藝成型，制備工藝流程見圖1。篩選制備工藝時(shí)首先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行3組單因素實(shí)驗(yàn)，單因素分別為粉碎藥材與提取藥液比例、顆粒粒徑和填充量，確定不同水平，然后通過(guò)有效成分含量和感官評(píng)價(jià)，選出最優(yōu)組合。在進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)時(shí)，袋泡茶浸泡時(shí)間為4min，浸泡溫度為85℃，加水量為150 mL，通過(guò)感官評(píng)價(jià)比較工藝效果。

2.2 粉碎藥材預(yù)實(shí)驗(yàn)

2.2.1 粉碎藥材的選擇 牛蒡子有揮發(fā)性成分，直接粉碎；甘草含有甘草酸、黃酮等成分，水溶性好，易于溶出且具有較強(qiáng)的粉性；黃芩含有黃芩苷、黃芩素，易溶于水，故作粉碎藥材。

2.2.2 粉碎與選粒 粉碎藥材的顆粒粒徑應(yīng)處于合理范圍，不宜過(guò)大或過(guò)小，過(guò)大不利于有效成分的浸出，過(guò)小能透過(guò)包裝袋，懸浮于水溶液中，影響外觀及服用[14]，根據(jù)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)得出粉碎藥材的最佳目數(shù)為24～60目。

圖1 養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶制備工藝流程圖

2.3 提取藥材預(yù)實(shí)驗(yàn)

2.3.1 提取藥材的選擇 北沙參為君藥含有香豆素類成分溶于沸水；赤芍主要含水溶性苷類成分，如芍藥苷，故這幾種藥材均適于用水提取。

2.3.2 提取條件的選擇 藥材和水的比例（固液比）、提取時(shí)間、提取次數(shù)均能影響提取藥液的質(zhì)量[15-16]，本著節(jié)約成本、節(jié)能的目的，根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)得出提取的最佳條件為固液比1∶14，提取60 min，提取1次。

2.4 粉碎藥材和提取藥液混合的考察 養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶需將粉粹藥材與提取藥液混合，使其充分吸汁后達(dá)到混合目的[17]。因此，要考察藥粉與藥液的混合比例，按固液比（g：mL）1∶1.0、1∶1.2、1∶1.5、1∶1.8、1∶2.0 進(jìn)行 5 組平行實(shí)驗(yàn)，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，其他工藝參數(shù)為顆粒粒徑為40目，填充量3 g。

2.5 袋泡茶顆粒粒徑的考察 粒徑大小控制在10～80目，因本袋泡茶中結(jié)合了中藥茶劑和制劑顆粒的工藝，故粒徑選擇應(yīng)根據(jù)粉碎藥材粒徑標(biāo)準(zhǔn)[12]，因此選取了 10、20、40、60、80 目 5 種粒徑進(jìn)行 5 組平行實(shí)驗(yàn)，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，其他工藝參數(shù)為粉碎藥材與提取藥液比1∶1.5，裝入量3 g。

2.6 袋泡茶裝入量的考察 袋泡茶的裝入量不易過(guò)大或過(guò)小，過(guò)大藥物浸出量增加影響口感，過(guò)小藥物浸出量降低，達(dá)不到治療的目的[5]。因此，選擇2、2.5、3、3.5、4 g 進(jìn)行 5 組平行實(shí)驗(yàn)，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，其他工藝參數(shù)為粉碎藥材和提取藥液比例1∶1.5（g∶mL），顆粒粒徑為 40 目。

2.7 養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶的感官評(píng)價(jià) 參照GB/T 23776-2009《茶葉感官評(píng)審方法》和GB/T 24690-2009《袋泡茶》規(guī)定[7]，并結(jié)合養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶的特點(diǎn)，對(duì)品質(zhì)特征的標(biāo)準(zhǔn)做了一些修改，以湯色、香氣、滋味為因素，具體評(píng)分規(guī)則見表1。本實(shí)驗(yàn)組織18人組成評(píng)定小組，進(jìn)行感官評(píng)定，取平均得分作為最終感官評(píng)分。

2.8 多指標(biāo)成分含量測(cè)定

2.8.1 色譜條件 色譜柱：AccurasilC18色譜柱（4.6mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）和 0.2%磷酸水溶液（B）；流速：1.0 mL/min；波長(zhǎng)：232 nm；進(jìn)樣量：10 mL；柱溫：30℃。梯度洗脫程序：0～10 min，10%～20%A；10～18 min，20%～25%A；18～25 min，25%～38%A；25～30 min，38%～43%A；30～40 min，43%～50%A；40～43 min，50%～95%A；理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算不低于6 000。

2.8.2 對(duì)照品和供試品溶液的配制

2.8.2.1 對(duì)照品溶液配制 分別精密稱取芍藥苷、甘草苷、補(bǔ)骨脂素、甘草酸、牛蒡子苷、黃芩苷、黃芩素，加甲醇配制成儲(chǔ)備液。各儲(chǔ)備液濃度分別為芍藥苷0.403 mg/mL、甘草苷0.380 mg/mL、補(bǔ)骨脂素0.092 mg/mL、甘草酸0.392 mg/mL、牛蒡子苷0.488mg/mL，黃芩苷 0.097mg/mL、黃芩素 0.653mg/mL。分別精密吸取各儲(chǔ)備液1 mL加甲醇（色譜純）定容之10 mL容量瓶中，配成混合對(duì)照品溶液。

表1 養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶質(zhì)量評(píng)定評(píng)分表

2.8.2.2 供試品溶液配制 取3 g袋泡茶樣品置于燒杯中，加入180 mL 85℃純水，浸泡30 min；取1 mL樣品溶液置于10 mL容量瓶中，加9 mL甲醇后超聲30 min，冷卻，轉(zhuǎn)移至離心管，室溫離心15 min（5 000 r/min），上清液轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶，用90%甲醇定容，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得，備用?；旌蠈?duì)照品和樣品的HPLC色譜圖如圖2所示。

2.8.3 方法學(xué)考察

2.8.3.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取“2.8.2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，采用逐級(jí)稀釋法分別用甲醇稀釋，配置成5個(gè)不同濃度的混合對(duì)照品溶液，按“2.8.1”項(xiàng)下的色譜條件，分別進(jìn)樣10 μL，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程及線性范圍，見表2。由表2可知：芍藥苷、甘草苷、黃芩苷、牛蒡子苷、補(bǔ)骨脂素、黃芩素、甘草酸在以上表中范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.8.3.2 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取“2.8.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按“2.8.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10 μL，測(cè)得芍藥苷、甘草苷、黃芩苷、牛蒡子苷、補(bǔ)骨脂素、黃芩素、甘草酸峰面積的RSD%分別為 1.17%、1.28%、1.05%、1.37%、1.78%、1.96%、0.51%，表明儀器精密度良好。

2.8.3.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 按“2.8.2.2”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，按“2.8.1”項(xiàng)下色譜條件，各進(jìn)樣10 μL，測(cè)得芍藥苷、甘草苷、黃芩苷、牛蒡子苷、補(bǔ)骨脂素、黃芩素、甘草酸峰面積的RSD%分別為1.35%、0.82%、2.74%、0.95%、0.27%、1.02%、1.16%，表明該方法重復(fù)性良好。

圖2 混合對(duì)照品（A）和樣品（B）HPLC色譜圖

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性關(guān)系和線性范圍

2.8.3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取“2.8.2.1”項(xiàng)下制備的供試品溶液，按“2.8.1”項(xiàng)下色譜條件，分別在 0、2、4、8、12、24 h 進(jìn)樣 1 次，每次進(jìn)樣 10 μL，測(cè)得芍藥苷、甘草苷、黃芩苷、牛蒡子苷、補(bǔ)骨脂素、黃芩素、甘草酸峰面積的RSD%分別為0.53%、0.71%、2.51%、0.87%、2.14%、1.22%、1.21%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8.3.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取9份1 g袋泡茶樣品，每份樣品中精密加入所含芍藥苷、甘草苷、黃芩苷、牛蒡子苷、補(bǔ)骨脂素、黃芩素、甘草酸量的80%、100%、120%的對(duì)照品。按“2.8.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.8.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，每次進(jìn)樣10 μL，計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。

2.9 養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶制備工藝正交表設(shè)計(jì) 在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，考察粉碎藥材與提取藥液固液比、顆粒粒徑、填充量3個(gè)因素間的交叉影響，以感官評(píng)分與有效成分含量相結(jié)合的綜合審評(píng)法為標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)計(jì)L9（34）正交實(shí)驗(yàn)，每組實(shí)驗(yàn)測(cè)定3次，以其平均值為實(shí)驗(yàn)結(jié)果。有效成分得分按照最高一組為100分得到各組的相對(duì)分值；感官評(píng)分按照“2.7”項(xiàng)下方法進(jìn)行評(píng)分；因本品為袋茶飲，經(jīng)討論以感官評(píng)分為主，有效成分為輔，確定其制備工藝，綜合評(píng)分得分=有效成分得分×0.4+感官評(píng)價(jià)得分×0.6。

表3 7種成分加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=9）

3 結(jié)果與分析

3.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

3.1.1 粉碎藥材與提取藥材固液比 在袋泡茶顆粒粒徑為40目、填充量為3 g的條件下，粉碎藥材與提取藥材固液比（g∶mL）為 1∶1.0、1∶1.2、1∶1.5、1∶1.8、1∶2.0時(shí)袋泡茶的感官評(píng)定結(jié)果見圖3。由圖3可知，在固液比較低時(shí)提取藥材的有效成分含量不足，袋泡茶的香氣偏淡、湯色偏清、滋味偏淡，感官得分降低；在固液比較高時(shí)提取藥材的有效成分含量過(guò)高，袋泡茶的香氣濃香、湯色渾濁、滋味濃澀，感官得分降低。綜合分析，選擇粉碎藥材與提取藥材固液比（g∶mL）為 1∶1.2、1∶1.5、1∶1.8 進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。

3.1.2 顆粒粒徑對(duì)養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶的影響 在粉碎藥材與提取藥液固液比（g∶mL）為1∶1.5、填充量為 3 g的條件下，顆粒粒徑為 10、20、40、60、80目時(shí)袋泡茶的感官評(píng)定結(jié)果見圖4。當(dāng)粒徑過(guò)大，有效成分不容易溶解，粒徑過(guò)小容易透過(guò)包裝袋，懸浮于水溶液中，影響外觀及服用。粒徑在低目數(shù)時(shí)，袋泡茶香氣偏淡、湯色偏清、滋味柔和；粒徑在高目數(shù)時(shí)，袋泡茶香氣偏濃、湯色渾濁，有漂浮物、滋味柔和苦澀。綜合分析，選擇粒徑目數(shù)為20、40、60目進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。

3.1.3 填充量對(duì)養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶的影響在粉碎藥材與提取藥液固液比（g∶mL）為 1∶1.5，顆粒粒徑為40目的條件下，填充量為2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 g時(shí)袋泡茶的感官評(píng)定結(jié)果見圖5。填充量太少，影響口味及治療效果；填充量太多，容易撐破茶袋，造成溶液渾濁。綜合分析，選擇2.5、3.0、3.5 g進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。

3.2 正交實(shí)驗(yàn)確定養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶最佳制備工藝

3.2.1 正交表 在單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，得出正交實(shí)驗(yàn)因素和水平。見表4。

圖3 固液比對(duì)養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶感官評(píng)價(jià)的影響

圖4 顆粒粒徑對(duì)養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶感官評(píng)價(jià)的影響

圖5 填充量對(duì)養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶感官評(píng)價(jià)的影響

表4 正交實(shí)驗(yàn)因素和水平表

3.2.2 正交實(shí)驗(yàn)袋泡茶多指標(biāo)成分測(cè)定 正交實(shí)驗(yàn)各指標(biāo)含量測(cè)定結(jié)果見表5。

3.2.3 正交實(shí)驗(yàn)綜合評(píng)分結(jié)果 正交實(shí)驗(yàn)綜合評(píng)分結(jié)果見表6。由表6可知，養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶制備工藝影響次序?yàn)镃（填充量）＞B（顆粒粒徑）＞C（固液比），最佳制備工藝為A3B3C1，即固液比（g：mL）為 1∶1.8，顆粒粒徑為 60 目，填充量為 2.5 g，從方差分析結(jié)果見表7，填充量因素顯著，與正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。但考慮到實(shí)際生產(chǎn)中粒徑太細(xì)容易浸出紙袋，造成浪費(fèi)和溶液渾濁，最終確定工藝為A3B2C1，即固液比（g∶mL）為 1∶1.8，顆粒粒徑為 40 目，填充量為2.5 g。

表5 正交實(shí)驗(yàn)袋泡茶多指標(biāo)成分含量

表6 正交實(shí)驗(yàn)綜合評(píng)分結(jié)果

表7 方差分析（α=0.05）

4 結(jié)論

利用感官評(píng)分法和多指標(biāo)成分含量測(cè)定相結(jié)合的綜合評(píng)分法優(yōu)化了以天津中醫(yī)藥大學(xué)名老中醫(yī)方劑為基礎(chǔ)的醫(yī)療制劑養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶的制備工藝，并結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)最終確定養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶的最佳制備工藝為A3B2C1，即固液比（g∶mL）為 1∶1.8，顆粒粒徑為 40 目，填充量為2.5 g。本方法全面的優(yōu)化了這一醫(yī)療制劑的制備工藝。

5 討論

本研究根據(jù)醫(yī)療制劑養(yǎng)陰利咽半生制劑袋泡茶處方中各味中藥的理化性質(zhì)初步制定了工藝流程，建立了多指標(biāo)成分含量控制的方法[18-20]，利用感官評(píng)分法和多指標(biāo)成分含量相結(jié)合的綜合評(píng)分法對(duì)其制備工藝進(jìn)行正交優(yōu)化，最終確定更優(yōu)的制備工藝，為本醫(yī)療制劑的后期研究以及大生產(chǎn)提供理論依據(jù)，并為市場(chǎng)上同類商品的開發(fā)提供了方法和參考。