高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)小麥中噻蟲(chóng)胺殘留量

馮義志，潘金菊，齊曉雪，韓濟(jì)峰，金 杰，梁 林，劉 偉

（山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院，山東省化學(xué)農(nóng)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250033）

噻蟲(chóng)胺化學(xué)名稱為(E)-1-(2-氯-1,3-噻唑-5-基甲基)-3-甲基-2-硝基胍。其為新煙堿類殺蟲(chóng)劑，具有內(nèi)吸性，主要用于水稻、玉米、油菜等，有效防治半翅目、鞘翅目和某些鱗翅目害蟲(chóng)[1-2]。目前，我國(guó)已有多家農(nóng)藥企業(yè)獲得噻蟲(chóng)胺登記，涉及作物主要有水稻、小麥和番茄等[3]。鑒于噻蟲(chóng)胺對(duì)蜜蜂的高毒性，以及可能引起哺乳動(dòng)物神經(jīng)行為的變化[4]，我國(guó)已制定了噻蟲(chóng)胺在稻谷、蔬菜等多種作物中的最大殘留限量[5]。雖然噻蟲(chóng)胺在小麥上已有登記，但有關(guān)噻蟲(chóng)胺在小麥中的殘留分析方法尚未見(jiàn)報(bào)道。

本文采用改進(jìn)的QuEChERS方法提取凈化小麥樣品，采用高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)四極桿質(zhì)譜快速檢測(cè)小麥各基質(zhì)中噻蟲(chóng)胺的殘留。該方法具有較好的特異性，且操作簡(jiǎn)便，分析時(shí)間短，靈敏度高，定性定量準(zhǔn)確，可用于大量小麥樣品中噻蟲(chóng)胺殘留的快速檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（Agilent 1290Ⅱ-6460），Agilent公司；九陽(yáng)料理機(jī)（JYL-C020E），九陽(yáng)股份有限公司；電子天平（JA21002），上海精密科學(xué)儀器有限公司；臺(tái)式通風(fēng)離心機(jī)（Sorvall ST16），賽默飛世爾科技有限公司。

氯化鈉（分析純），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；乙腈（色譜純），F(xiàn)isher化學(xué)公司；C18填料（40～60 μm），天津博納艾杰爾科技有限公司；噻蟲(chóng)胺標(biāo)準(zhǔn)品（97%），購(gòu)自德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司。

1.2 樣品前處理方法

準(zhǔn)確稱取搗碎樣品5.0 g（秸稈2.0 g）于50 mL具塞離心管中，加入5 mL超純水（秸稈樣品加10 mL）和10 mL乙腈，渦旋2 min。加入4 g氯化鈉，劇烈振蕩1 min，4 000 r/min離心5 min。取1 mL上層清液至加有50 mg C18填料的2 mL離心管中，渦旋1 min，取上清液過(guò)0.22 μm微孔濾膜，待測(cè)。

1.3 色譜條件

色譜柱：Eclipse Plus C18RRHD（50 mm×2.1 mm，1.8 μm）；柱溫：室溫；流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液＋乙腈（體積比30∶70）；流速：0.3 mL/min；毛細(xì)管電壓：4 kV；干燥氣溫度：300℃；干燥氣流量：11 L/min；霧化氣壓力：0.1 MPa；反應(yīng)氣：N2；采集方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式；定量離子對(duì)（m/z）：250.00/169.00；定性離子對(duì)（m/z）：250.00/132.00；駐留時(shí)間：100 ms；碰撞能量（CE）：15 eV。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

將質(zhì)量濃度1 000 mg/L的標(biāo)樣儲(chǔ)備溶液，分別用乙腈、麥?？瞻谆|(zhì)、最終秸稈和青秸稈空白基質(zhì)稀釋配制成1、0.5、0.1、0.05、0.01 mg/L標(biāo)樣溶液，在1.3色譜條件下進(jìn)行測(cè)定。每個(gè)質(zhì)量濃度重復(fù)3次。以標(biāo)樣工作溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)色譜峰面積為縱坐標(biāo)作圖。

1.5 添加回收率測(cè)定

在空白麥粒中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.02、0.1、0.5 mg/kg的噻蟲(chóng)胺標(biāo)準(zhǔn)品，在最終秸稈和青秸稈中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05、0.2、1 mg/kg的噻蟲(chóng)胺標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)濃度5次平行，測(cè)定回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2 結(jié)果與分析

2.1 噻蟲(chóng)胺儀器條件的確定

電噴霧電離（ESI）方式對(duì)10 mg/L噻蟲(chóng)胺標(biāo)樣溶液進(jìn)行全掃描（m/z 50～300），在正離子采集模式下獲得其［M+1］峰（m/z 250.00）為母離子（圖1～圖2）。試驗(yàn)中對(duì)碰撞電壓等參數(shù)進(jìn)行了詳細(xì)研究，發(fā)現(xiàn)25 eV時(shí)169.00（m/z）和132.00（m/z）響應(yīng)值較大，最后選擇定量離子對(duì)為250.00/169.00（m/z），定性離子對(duì)為250.00/132.00（m/z）。

圖1 噻蟲(chóng)胺全掃描質(zhì)譜圖

圖2 噻蟲(chóng)胺二級(jí)質(zhì)譜圖

2.2 提取方法選擇

本試驗(yàn)采用QuEChERS方法對(duì)噻蟲(chóng)胺進(jìn)行了提取凈化。但由于QuEChERS方法適用于含水量較高的水果、蔬菜等樣品，且樣品量和提取劑的體積比多采用1∶1[6]。本試驗(yàn)考慮到小麥樣品含水量較低，故在樣品中加入5 mL去離子水，并用體積相當(dāng)于2倍樣品量的提取劑進(jìn)行提取，回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均能得到滿意的結(jié)果。

2.3 方法線性范圍及基質(zhì)效應(yīng)

質(zhì)量濃度為0.01～1 mg/L時(shí)，噻蟲(chóng)胺在乙腈、麥?？瞻谆|(zhì)溶液、最終秸稈和青秸稈空白基質(zhì)溶液中的定量離子峰面積與進(jìn)樣質(zhì)量濃度間均呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.999 3～0.999 9（見(jiàn)表1）。

表1 噻蟲(chóng)胺的線性方程、相關(guān)系數(shù)、斜率比和定量限

采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率和溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率之比（k）來(lái)評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)。當(dāng)k＞1.1時(shí)，表現(xiàn)出基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；k＜0.9，呈基質(zhì)減弱效應(yīng)；而當(dāng)k為0.9～1.1時(shí)，表現(xiàn)出基質(zhì)效應(yīng)不明顯[7]。本研究中噻蟲(chóng)胺在小麥和秸稈中均存在不同程度的基質(zhì)效應(yīng)。小麥各基質(zhì)有顯著減弱效應(yīng)。為保證方法的通用性和適用性，本研究采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液校正消除基質(zhì)效應(yīng)影響。

2.4 噻蟲(chóng)胺的添加回收率和精密度

添加不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的噻蟲(chóng)胺于空白基質(zhì)中，進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。噻蟲(chóng)胺在3種小麥基質(zhì)中平均回收率為87%～105%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為2%～18%。典型譜圖見(jiàn)圖3～圖6。

表2 噻蟲(chóng)胺在基質(zhì)中的添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

圖3 噻蟲(chóng)胺溶劑標(biāo)樣色譜圖（0.01 mg/L）

圖4 噻蟲(chóng)胺小麥基質(zhì)標(biāo)樣色譜圖（0.01 mg/kg）

圖5 噻蟲(chóng)胺最終秸稈基質(zhì)標(biāo)樣色譜圖（0.01 mg/kg）

圖6 噻蟲(chóng)胺青秸稈基質(zhì)標(biāo)樣色譜圖（0.01 mg/kg）

3 結(jié)論

本研究應(yīng)用QuEChERS前處理方法，建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜快速檢測(cè)小麥和小麥秸稈樣品中噻蟲(chóng)胺殘留量的分析方法。該方法簡(jiǎn)單快速、準(zhǔn)確可靠，可滿足農(nóng)藥殘留分析要求，適用于大量樣品的快速檢測(cè)。