環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在致病微生物檢測(cè)中的應(yīng)用

徐美迪，木蘭，牛超

1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特010110；

2.軍事科學(xué)院 軍事醫(yī)學(xué)研究院 環(huán)境醫(yī)學(xué)與作業(yè)醫(yī)學(xué)研究所，天津300050

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）技術(shù)由Notomi等[1]于2000年創(chuàng)建，是一種在等溫條件下即可對(duì)靶序列進(jìn)行快速、特異、靈敏檢測(cè)的核酸擴(kuò)增技術(shù)?；谝陨现T多優(yōu)勢(shì)，LAMP技術(shù)現(xiàn)已廣泛用于核酸檢測(cè)相關(guān)領(lǐng)域，如病原體識(shí)別、性別鑒定及食品檢測(cè)等。

1 LAMP技術(shù)概況

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的基本原理是，當(dāng)目的DNA解鏈后,針對(duì)靶基因設(shè)計(jì)的4條特異性內(nèi)外引物分別識(shí)別到相應(yīng)互補(bǔ)位點(diǎn)，再利用BstDNA聚合酶在65℃等溫條件下對(duì)其進(jìn)行延伸，先形成一個(gè)兩尾端各自互補(bǔ)的啞鈴樣DNA結(jié)構(gòu)，隨后，在此基礎(chǔ)上不斷地被引物識(shí)別、延伸和擴(kuò)增，最終生成由一系列反向重復(fù)的目的基因構(gòu)成的莖環(huán)樣結(jié)構(gòu)和多環(huán)花椰菜樣結(jié)構(gòu)組成的DNA片段混合物[2]，整個(gè)體系于1 h內(nèi)即可實(shí)現(xiàn)對(duì)目的片段的高效特異擴(kuò)增。此外，Nagamine等[3]在LAMP體系中添加了2條環(huán)引物，使得LAMP反應(yīng)時(shí)間縮短近一半，大大提高了擴(kuò)增效率。環(huán)引物也是通過(guò)與莖環(huán)結(jié)構(gòu)結(jié)合啟動(dòng)鏈置換DNA合成，所有莖環(huán)DNA或與內(nèi)引物雜交，或與環(huán)狀引物雜交，從而提高了檢測(cè)效率。LAMP結(jié)果可通過(guò)2%瓊脂糖凝膠電泳、添加染料、觀察濁度等方法進(jìn)行判讀。首先，在擴(kuò)增結(jié)束后，可將產(chǎn)物于2%瓊脂糖凝膠中電泳，通過(guò)觀察階梯狀條帶的有無(wú)來(lái)判斷結(jié)果。但由于電泳時(shí)致癌物質(zhì)溴化乙錠的加入及開蓋加樣后氣溶膠的污染，使得此方法并不是檢測(cè)LAMP結(jié)果的首選方法。作為電泳的替代品，鈣黃綠素、SYBR greenⅠ和HNB染料等不僅遠(yuǎn)離了致癌物，還實(shí)現(xiàn)了對(duì)DNA產(chǎn)物的直接檢測(cè)。鈣黃綠素是一種在反應(yīng)前添加的染料，含有金屬離子結(jié)合熒光團(tuán)，可使陽(yáng)性反應(yīng)體系在紫外光（365 nm）[4]下發(fā)出熒光，在自然光下發(fā)生顏色變化（橙色到綠色），從而大大提高了對(duì)結(jié)果判斷的準(zhǔn)確性。SYBR greenⅠ的加入會(huì)使陽(yáng)性反應(yīng)體系出現(xiàn)紅橙色至黃綠色的顏色變化，且在紫外光下發(fā)出熒光。盡管其具有良好的靈敏度，但在擴(kuò)增前加入，可抑制LAMP反應(yīng)進(jìn)行；在擴(kuò)增結(jié)束后加入，開蓋又易造成假陽(yáng)性結(jié)果[5]，因此并不利于其廣泛使用。由原理可知，隨著LAMP反應(yīng)的不斷進(jìn)行，副產(chǎn)物焦磷酸鎂白色沉淀會(huì)逐漸增加，基于此特點(diǎn)，LAMP可通過(guò)肉眼觀察白色沉淀的方法對(duì)結(jié)果進(jìn)行直接判讀；若使用實(shí)時(shí)濁度計(jì)進(jìn)行反應(yīng)，如Loopamp（Eiken Chemical公司）的LA-200、LA-320及LA-500等，還可實(shí)現(xiàn)對(duì)結(jié)果的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。

LAMP作為一種新型核酸檢測(cè)技術(shù)，有幾點(diǎn)優(yōu)勢(shì)尤為突出。首先，與傳統(tǒng)PCR技術(shù)相比，LAMP體系中的4條引物須分別與靶基因的6個(gè)或8個(gè)特異區(qū)完全匹配后才能反應(yīng)；而PCR體系僅需上下游各1條引物與靶基因匹配即可，這意味著LAMP具有更高的特異性[2]。此外，LAMP檢測(cè)效率較高。在LAMP反應(yīng)起始階段無(wú)須DNA模板的熱變性過(guò)程，從而縮短了反應(yīng)起始時(shí)間；由于LAMP擴(kuò)增模板呈啞鈴狀結(jié)構(gòu)，含多個(gè)擴(kuò)增起始點(diǎn)，可同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增，因此提高了擴(kuò)增效率。PCR需要至少90 min才能完成的擴(kuò)增反應(yīng)，LAMP僅需30 min，大大節(jié)約了檢測(cè)時(shí)間。LAMP最突出的優(yōu)勢(shì)在于檢測(cè)方便，結(jié)果易判讀。由于LAMP是一種等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，僅需一個(gè)能保持恒定溫度的水浴鍋或加熱塊即可進(jìn)行反應(yīng)，因此降低了對(duì)儀器的要求。檢測(cè)結(jié)果可簡(jiǎn)單地通過(guò)肉眼觀察有無(wú)白色沉淀進(jìn)行判斷，無(wú)須再進(jìn)行繁瑣的電泳實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證，降低了終點(diǎn)檢測(cè)對(duì)儀器的要求。另外，介于BstDNA聚合酶在緩沖溶液中的特性，Tanner等[6]開發(fā)了一種用于LAMP的新型pH敏感染料。隨著LAMP反應(yīng)進(jìn)行，會(huì)出現(xiàn)顯著的pH值變化，pH指示劑染料的加入即可輕松地監(jiān)測(cè)到LAMP反應(yīng)是否進(jìn)行，這一研究有助于LAMP作為便捷檢測(cè)工具在發(fā)展中國(guó)家的應(yīng)用。此外，有研究表明，LAMP檢測(cè)并不受樣品中非靶標(biāo)DNA[7]、PCR抑制劑（如血液）及未處理樣品[8]的影響，體現(xiàn)出LAMP具有極高的穩(wěn)定性。

2 在致病性微生物檢測(cè)中的應(yīng)用

2.1 檢測(cè)致病性細(xì)菌

近年來(lái)，LAMP技術(shù)已廣泛應(yīng)用于快速檢測(cè)致病性細(xì)菌，方法較為成熟，如空腸彎曲桿菌[9]、傷寒沙門菌[10]、腦膜炎奈瑟菌[11]和李斯特菌[12]等。Bakhtiari[13]通過(guò)靶向幽門螺桿菌ureC基因設(shè)計(jì)特異性引物建立了LAMP體系，檢測(cè)限與PCR測(cè)定的相同，為10 fg DNA（6個(gè)拷貝數(shù)）。一般情況下，實(shí)際樣品中的微生物種類和數(shù)量是未知的，因此，有必要對(duì)多種未知微生物進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)。由原理可知，LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物是長(zhǎng)度不等的DNA混合片段，常規(guī)檢測(cè)只能判斷有無(wú)擴(kuò)增反應(yīng)發(fā)生而無(wú)法特異辨別擴(kuò)增產(chǎn)物的來(lái)源。為了實(shí)現(xiàn)對(duì)多種致病微生物的特異檢測(cè)，現(xiàn)已開發(fā)出一系列以LAMP為基礎(chǔ)的多重LAMP（multiplex LAMP，mLAMP）[14]技術(shù)，以滿足快速檢測(cè)多種未知致病微生物的需求。Lee等[15]通過(guò)LAMP-PCR、雜交、限制性內(nèi)切核酸酶消化及ELISA比色法，在單管內(nèi)同時(shí)檢測(cè)了對(duì)異煙肼、乙胺丁醇和鏈霉素有抗性的多種結(jié)核分枝桿菌。Liu等[16]建立了用于檢測(cè)沙門菌和副溶血性弧菌的多重LAMP，通過(guò)調(diào)整沙門菌引物組的濃度解決了LAMP選擇性擴(kuò)增問(wèn)題，同時(shí)利用2種產(chǎn)物之間擴(kuò)增曲線及熔解溫度的不同實(shí)現(xiàn)了對(duì)這2種病原體的特異檢測(cè)。Duarte[17]將mLAMP與芯片結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對(duì)hlyA（單增李斯特菌）、stx2（大腸桿菌O157）和in?vA（沙門菌）等3種靶基因的同時(shí)檢測(cè)，最低檢測(cè)限為105CFU/mL。盡管檢測(cè)的靈敏度不高，但實(shí)現(xiàn)了對(duì)多種菌株的同時(shí)檢測(cè)。此外，檢測(cè)過(guò)程中進(jìn)樣、控溫及結(jié)果鑒定完全由儀器完成，更適合于大規(guī)模的樣品檢測(cè)。

2.2 檢測(cè)致病性病毒

逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（reverse transcrip?tion LAMP，RT-LAMP）技術(shù)是通過(guò)在LAMP體系中加入逆轉(zhuǎn)錄酶來(lái)實(shí)現(xiàn)一步法檢測(cè)RNA病毒的核酸擴(kuò)增技術(shù)[18]。與RT-PCR相同，RT-LAMP也是先利用逆轉(zhuǎn)錄酶合成與RNA互補(bǔ)的DNA，隨后在DNA聚合酶的作用下，對(duì)剛剛合成的DNA進(jìn)行不斷的擴(kuò)增，最終達(dá)到高效率擴(kuò)增RNA病毒的目的。目前，針對(duì)丙型肝炎病毒[19]、登革熱病毒[20]、埃博拉病毒[21]、寨卡病毒[22]和中東呼吸綜合征冠狀病毒[23]等都已建立了RT-LAMP體系，其中，用于診斷埃博拉病毒[24]的LAMP試劑盒已被制成便攜式設(shè)備，廣泛用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。目前，RT-LAMP最成功的用途之一是檢測(cè)人免疫缺陷病毒（HIV）。Ocwieja等[25]建立了用于診斷HIV蟄伏階段的RT-LAMP技術(shù)；Damhorst等[26]將數(shù)字設(shè)備與RT-LAMP相結(jié)合，通過(guò)智能手機(jī)即可觀察到全血中HIV-1的感染情況，檢測(cè)限為每微升全血670個(gè)病毒，該數(shù)字化RT-LAMP技術(shù)可輔助初級(jí)保健機(jī)構(gòu)對(duì)HIV感染人群的篩查及基層實(shí)驗(yàn)室對(duì)HIV檢測(cè)結(jié)果的判讀。此外，RT-LAMP也可用于檢測(cè)動(dòng)植物病毒。Batai病毒（BATV）是一種由蚊子傳播，且可導(dǎo)致反芻動(dòng)物先天性缺陷的病毒。Liu等[27]針對(duì)BATV的M基因建立了RT-LAMP體系并對(duì)其進(jìn)行優(yōu)化。研究表明，RT-LAMP僅需40 min完成的Batai病毒檢測(cè)，RT-PCR需數(shù)小時(shí)才能完成；且RT-LAMP靈敏度低至每微升2.86個(gè)拷 貝，比qRT-PCR高 約100倍。Peng等[28]通 過(guò)靶向蘋果褪綠葉斑病毒（ACLSV）的衣殼蛋白基因建立了RT-LAMP檢測(cè)體系。與RT-PCR（2.29 μg/μL）相比，該體系在64℃下可檢測(cè)低至0.02 μg/μL的病毒，靈敏度提高了100倍。該體系的建立實(shí)現(xiàn)了對(duì)蘋果褪綠葉斑病毒的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，控制了ACLSV的傳播。同時(shí)，多重LAMP體系也可應(yīng)用于病毒檢測(cè)。Lau等[29]建立了用于檢測(cè)登革熱病毒的單管RT-mLAMP體系。研究中，針對(duì)登革熱病毒的每種血清型設(shè)計(jì)了各自的LAMP引物組，分別靶向DENV-1、DENV-2、DENV-3和DENV-4的3'端非編碼區(qū)，并將所有引物添加到含有羥基萘酚藍(lán)（HNB）的單管LAMP體系中反應(yīng)60 min，最終通過(guò)肉眼觀察顏色變化來(lái)確定檢測(cè)樣品中是否存在登革熱病毒。實(shí)驗(yàn)中未觀察到與其他相關(guān)蟲媒病毒之間存在交叉反應(yīng)，且此方法的靈敏度較高。

2.3 檢測(cè)致病性寄生蟲

原生動(dòng)物寄生蟲同樣對(duì)人類有害。Nzelu[30]建立了檢測(cè)利什曼原蟲的LAMP體系，并利用122份臨床可疑樣品對(duì)其進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果顯示LAMP體系能夠有效檢測(cè)到101個(gè)DNA拷貝。Poole等[31]針對(duì)RF4基因建立了檢測(cè)羅阿絲蟲的高靈敏LAMP體系，且在30 min內(nèi)即可完成對(duì)微絲蚴的檢測(cè)，解決了野外快速檢測(cè)難和寄生蟲感染早期管理難等諸多難題。此外，有研究將mLAMP與斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附法相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對(duì)豬帶絳蟲、牛帶絳蟲和亞洲牛帶絳蟲的區(qū)分。實(shí)驗(yàn)中，根據(jù)細(xì)胞色素c氧化酶亞基1基因設(shè)計(jì)特異性引物，并對(duì)引物進(jìn)行了標(biāo)記（洋地黃毒苷、異硫氰酸熒光素和四甲基羅丹明標(biāo)記FIP引物、生物素標(biāo)記BIP引物），最終通過(guò)觀察膜上的紫色點(diǎn)有無(wú)來(lái)判斷檢測(cè)結(jié)果，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)這些物種的差異性檢測(cè)[32]。Mwendwa等[33]建立了檢測(cè)溶組織內(nèi)阿米巴的LAMP體系，體系中加入可加快反應(yīng)速度的環(huán)狀引物，使得反應(yīng)時(shí)間縮短了約11 min。為了評(píng)估其靈敏度，實(shí)驗(yàn)中將此方法與標(biāo)準(zhǔn)的LAMP和PCR方法相比較，同時(shí)對(duì)臨床樣品中溶組織內(nèi)阿米巴的DNA進(jìn)行檢測(cè)，靈敏度分別是10-7（～30 pg/mL）、10-5（～3 ng/mL）和10-4（～30 ng/mL），可以看出，加入環(huán)狀引物的LAMP體系不僅加快了反應(yīng)速率，還提高了整個(gè)體系的靈敏度。

2.4 檢測(cè)致病性真菌

真菌的常規(guī)檢測(cè)方法費(fèi)力且昂貴。目前，一項(xiàng)用于檢測(cè)白色念珠菌、新型隱球菌和毛霉菌等真菌的mLAMP技術(shù)已由Nakayama等[34]建立。Karakkat等[35]針對(duì)冷季型草坪草的3種常見真菌根病原體建立了LAMP體系。此外，Luo等[36]分別針對(duì)黃曲霉、集蜂曲霉和凱氏曲霉的靶基因設(shè)計(jì)了各自的特異性引物，建立了定量檢測(cè)3種真菌的實(shí)時(shí)LAMP體系。

綜上所述，LAMP技術(shù)的應(yīng)用明顯提高了檢測(cè)致病性微生物的靈敏度，縮短了檢測(cè)時(shí)間，簡(jiǎn)化了操作步驟，為致病性微生物的檢測(cè)帶來(lái)了極大便利，體現(xiàn)了LAMP技術(shù)在生物安全檢測(cè)領(lǐng)域極大的應(yīng)用價(jià)值。

3 新型LAMP

為了進(jìn)一步滿足現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和基層醫(yī)療單位對(duì)檢測(cè)技術(shù)的要求，在目前LAMP、mLAMP及與其他檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合的基礎(chǔ)上，一些新型LAMP被逐漸開發(fā)出來(lái)。

3.1 電子LAMP

Salinas等[37]開發(fā)了電子LAMP技術(shù)，可通過(guò)Tk圖形界面對(duì)LAMP引物與靶序列的匹配度進(jìn)行快速測(cè)試，有助于快速確定現(xiàn)有引物檢測(cè)變異體序列的效率和概率。

3.2 應(yīng)用OmniAmp聚合酶的LAMP

OmniAmp聚合酶有著與Bst3.0聚合酶相似的活性，可對(duì)DNA和RNA進(jìn)行直接檢測(cè)。Chander等[38]利用OmniAmp聚合酶，針對(duì)6種RNA病毒建立了新型RT-LAMP檢測(cè)方法。結(jié)果顯示，與傳統(tǒng)的Bst聚合酶相比，OmniAmp聚合酶熱穩(wěn)定性更高，受全血成分的抑制作用更小，用于低病毒血癥樣品檢測(cè)的速度更快，在環(huán)境溫度下可儲(chǔ)存的時(shí)間更長(zhǎng)，且有著可增加逆轉(zhuǎn)錄酶活性的強(qiáng)大性能。基于這些優(yōu)勢(shì)，OmniAmp聚合酶更適合用于側(cè)流裝置、凍干LAMP及現(xiàn)場(chǎng)裝置的開發(fā)[39]。

3.3 免疫橫向流動(dòng)檢測(cè)

免疫橫向流動(dòng)檢測(cè)（lateral flow assay，LFA）是LAMP的一種常用配套手段，由于其具有成本低、人性化、簡(jiǎn)單、快速、便攜等優(yōu)勢(shì)，目前備受歡迎。Huang等[40]通過(guò)結(jié)合由異硫氰酸酯標(biāo)記的DNA探針中的熒光素和生物素化的LAMP擴(kuò)增子建立了橫向流速測(cè)定，在測(cè)試線上即可觀察到檢測(cè)結(jié)果。Yin等[41]利用多重LFA-LAMP實(shí)現(xiàn)了對(duì)金黃色葡萄球菌sea和seb基因的同時(shí)檢測(cè)。此外，免疫橫向流動(dòng)檢測(cè)已可用于檢測(cè)麻疹病毒[42]、巴貝蟲病[43]、惡性瘧原蟲和間日瘧原蟲[44]等。

3.4 凍干LAMP和LAMP試劑盒

基于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的需求，現(xiàn)已開發(fā)出多種形式的LAMP，如凍干狀態(tài)LAMP試劑和用于特異性檢測(cè)微生物的試劑盒。凍干LAMP試劑呈干燥粉末狀，可在環(huán)境溫度下長(zhǎng)期儲(chǔ)存，更適于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。Hayashida[45]利用單管凍干LAMP檢測(cè)到了非洲錐蟲病。研究顯示，靶向重復(fù)插入移動(dòng)元件（RIME）、18S rRNA和SRA-LAMP的檢測(cè)限分別為0.01、0.1和1個(gè)寄生蟲當(dāng)量DNA，且與普通的LAMP試劑熱穩(wěn)定性相同。Chen等使用凍干LAMP及靶向lipL32和lipL41基因的引物組檢測(cè)到了鉤端螺旋體。該研究分別使用不同溫度（4℃、25℃和37℃）儲(chǔ)存的凍干LAMP和普通LAMP試劑對(duì)鉤端螺旋體進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)方法的穩(wěn)定性和靈敏度進(jìn)行了評(píng)估。結(jié)果顯示，各方法的檢測(cè)限均為12拷貝基因組DNA，且穩(wěn)定性相近[46]。Carter等利用RT-LAMP凍干法檢測(cè)到了扎伊爾埃博拉病毒（ZEBOV），強(qiáng)調(diào)了通過(guò)關(guān)鍵修飾反應(yīng)組分來(lái)保持凍干試劑穩(wěn)定的重要性[47]。LAMP試劑盒（如Loopamp TB檢測(cè)試劑盒、布氏錐蟲檢測(cè)試劑盒、單核細(xì)胞增生李斯特菌檢測(cè)試劑盒、軍團(tuán)菌篩選試劑盒E、瘧疾檢測(cè)試劑盒、SARS冠狀病毒檢測(cè)試劑盒、彎曲桿菌檢測(cè)試劑盒、肺炎支原體檢測(cè)試劑盒、大腸桿菌O157檢測(cè)試劑盒、隱孢子蟲檢測(cè)試劑盒等）和LAMP引物組（如針對(duì)西尼羅病毒、禽流感H5和H7病毒、FluA流感病毒等的引物）均可從Eiken Chemical公司購(gòu)買。

4 結(jié)語(yǔ)

作為一種新興的核酸擴(kuò)增技術(shù)，LAMP現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于微生物檢測(cè)。與傳統(tǒng)的檢測(cè)方法相比，LAMP具有高靈敏度、高特異性、低成本、簡(jiǎn)單操作等諸多優(yōu)勢(shì)。目前，應(yīng)用LAMP的中國(guó)食品檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)已生成，如進(jìn)出口食品中致病菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)方法及出口食品中轉(zhuǎn)基因成分環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)方法等。盡管LAMP技術(shù)已被廣泛使用，但也存在一些不足。在引物設(shè)計(jì)方面，雖然可以應(yīng)用免費(fèi)的在線軟件進(jìn)行設(shè)計(jì)，但由于其是針對(duì)較短靶序列中的6～8個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)4～6條引物，在某些情況下，一些擴(kuò)增效率較高的靶位點(diǎn)可能會(huì)被忽略，因此，應(yīng)手動(dòng)進(jìn)行引物設(shè)計(jì)[48]，而且LAMP的超長(zhǎng)DNA終產(chǎn)物并不適用于克隆或其他分子生物學(xué)的研究[4]。在mLAMP體系中，同時(shí)使用多組引物會(huì)增加引物間雜交的幾率，導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增[49]。出現(xiàn)上述現(xiàn)象，建議重新設(shè)計(jì)引物。LAMP體系擴(kuò)增效率極高，并且產(chǎn)物極其穩(wěn)定，不易降解，因此易發(fā)生攜帶污染，出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果[50]。若出現(xiàn)上述情況，建議換用專用的移液管和過(guò)濾好的槍頭在超凈臺(tái)中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。此外，LAMP體系對(duì)微量污染物非常靈敏，一些開管操作，如進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，應(yīng)在單獨(dú)房間內(nèi)操作，以避免氣溶膠污染。當(dāng)僅用比濁和比色法確定LAMP反應(yīng)結(jié)果時(shí)，由于個(gè)體對(duì)顏色的主觀感知不同，結(jié)果可能會(huì)出現(xiàn)偏差[51]。和PCR不同，LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后呈階梯形條帶或拖尾現(xiàn)象，難以通過(guò)條帶大小來(lái)識(shí)別LAMP檢測(cè)目標(biāo)物[52]。

為了更好地應(yīng)用到基層實(shí)驗(yàn)室和野外檢測(cè)，LAMP技術(shù)還須進(jìn)一步完善與優(yōu)化，比如將mLAMP技術(shù)與芯片、數(shù)字核酸技術(shù)相聯(lián)合等?；贚AMP技術(shù)良好的應(yīng)用前景，希望在不久的將來(lái)，LAMP技術(shù)可與其他新的檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合，逐漸替代傳統(tǒng)微生物檢測(cè)技術(shù)，為生物安全提供更多保障。