甜茶葉中總黃酮大孔樹脂純化工藝及抗氧化活性研究

王小明,2,陳 碧,2,張 鵬,2,賴冬群,鐘翠娟

(1.廣西科技師范學(xué)院食品與生化工程學(xué)院,廣西來賓 546199; 2.廣西科技師范學(xué)院特色瑤藥資源研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣西來賓 546199)

甜茶(RubussuavissimusS.Lee)又名甜葉懸鉤子,屬薔薇科,為懸溝子屬多年生灌木,甜茶葉中含有的類黃酮、甜茶多酚[1]和甜茶素等活性成分,具有抗氧化[2]、抗過敏、抗菌、預(yù)防皮膚光損傷[3]、降“三高”等功效[4],在我國西南地區(qū)民間作為藥食兼用食材使用已有幾百年的悠久歷史[5-10]。

黃酮類化合物是廣泛分布在各種植物中的一種有效活性物質(zhì),是母核結(jié)構(gòu)為2-苯基色原酮的多酚類化合物[11],多以糖苷形式存在于物質(zhì)中[12],具有良好的清除自由基和中斷鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的抗氧化性能[13]。大孔樹脂是一類具有多孔骨架結(jié)構(gòu),表面積大、孔隙率高、交換速度快且不溶于酸、堿及各種有機(jī)溶劑的有機(jī)高聚物吸附劑,具有選擇性好、適用范圍廣等特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于類黃酮等天然活性物質(zhì)的純化和富集[14-16]。開展甜茶葉中總黃酮抗氧化性能的研究有助于開發(fā)其保健價(jià)值[17]。生物活體的多種疾病都與自由基對機(jī)體的氧化損傷密切相關(guān),其作用機(jī)理被認(rèn)為與清除自由基、調(diào)節(jié)細(xì)胞氧化還原系統(tǒng)、增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶系的活力等有關(guān)[18]。檢測活性成分清除DPPH·能力和總抗氧化能力是評價(jià)其抗氧化活性的常用方法。因此,從天然成分甜茶葉中提取并純化總黃酮,研究并評價(jià)其清除自由基的能力具有十分重要的意義[19-21]。

本文利用12種不同極性的大孔樹脂對提取的甜茶葉粗黃酮進(jìn)行純化性能的對比研究,在靜態(tài)吸附和解吸、靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,研究上樣液、洗脫劑乙醇溶液濃度對較優(yōu)大孔樹脂動(dòng)態(tài)吸附和解吸率的影響,優(yōu)選出甜茶葉粗黃酮純化工藝條件,制備出甜茶葉精黃酮,以蘆丁和維生素C為對照,對甜茶葉粗黃酮、精黃酮的清除DPPH·能力和總抗氧化能力(T-AOC)進(jìn)行對比分析,以期為甜茶葉總黃酮開發(fā)應(yīng)用提供更多工藝技術(shù)和理論支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

干甜茶葉片 產(chǎn)自廣西來賓金秀縣(無茶梗,三個(gè)月內(nèi)生產(chǎn),水分含量2.12 g/100 g,用粉碎機(jī)粉碎后過50目篩備用);蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(純度>99%)、維生素C標(biāo)準(zhǔn)品(純度>99%) 合肥博美生物科技有限責(zé)任公司;無水乙醇、硝酸鋁(Al(NO3)3)、亞硝酸鈉(NaNO2)、氫氧化鈉(NaOH)等 均為國產(chǎn)分析純;1,1-二苯基-2-苦基肼自由基(DPPH·,純度>97%) 東京化成工業(yè)株式會(huì)社;總抗氧化能力(T-AOC)試劑盒 上海撫生實(shí)業(yè)有限公司;大孔吸附樹脂NKA、HPD-500、NKA-9、S-8、HPD-450、DM130、AB-8、LS-300B、D101、HP-20、HPD-100、X-5 廊坊淼陽化工有限公司。

UV-1750紫外可見分光光度計(jì) 日本島津公司;HH-2數(shù)顯電子恒溫水浴鍋 江蘇省金壇市友聯(lián)儀器研究所;FS-1500超聲波萃取儀 上海生析超聲儀器有限公司;KQ3200DA型數(shù)控超聲清洗器 昆山市超聲儀器有限公司;H1850臺式高速離心機(jī) 湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司;中草藥粉碎機(jī) 天津市泰斯特儀器有限公司;R-1001VN旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 鄭州長城科工貿(mào)有限公司;XW-80A型旋渦混合器 上海醫(yī)大儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 甜茶葉總黃酮超聲波-乙醇提取方法 準(zhǔn)確稱取0.5 g的干甜茶葉粉末于圓底燒瓶或玻璃試管中,按照乙醇濃度為68.9%、料液比為1∶30 (g/mL)、超聲波功率為73.9 W、提取溫度為62.2 ℃、提取時(shí)間為67.7 min,此工藝條件下甜茶葉總黃酮提取得率為12.23%,得到甜茶葉總黃酮提取液[22]。

1.2.2 上樣液及顯色溶液的制備 將按“1.2.1”方法制得的甜茶葉總黃酮提取液用定性濾紙抽濾得濾液,經(jīng)減壓濃縮后得到干粗提物,用水溶解干粗提物,定性濾紙過濾,定容到50 mL容量瓶后制得吸附所需濃度為1.0137 mg/mL的上樣液。準(zhǔn)確量取待上樣液2.5 mL,轉(zhuǎn)入10 mL容量瓶中,加5% NaNO2溶液0.3 mL,搖勻,放置10 min,再加10% Al(NO3)3溶液0.5 mL,搖勻,放置10 min,最后再加4% NaOH溶液5.0 mL,振搖,加純水至刻度,搖勻后放置10 min,即得顯色溶液。

1.2.3 總黃酮含量的測定

1.2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品2.5000 mg,轉(zhuǎn)入25 mL容量瓶中,以純水溶解并定容,配制得0.1000 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確移取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL于10 mL容量瓶中,分別加入5% NaNO2溶液0.3 mL,搖勻,靜置10 min;再加10% Al(NO3)3溶液0.5 mL,搖勻,靜置10 min;再加4% NaOH溶液5 mL,以純水定容,搖勻,靜置10 min,從200～700 nm進(jìn)行全波長掃描,均測得在510 nm處有最大吸光度,因此選定以510 nm為蘆丁和樣品溶液總黃酮濃度的測定波長[23-27]。在510 nm波長下測各容量瓶中溶液的吸光度,以蘆丁濃度(Y，mg/mL)和吸光度(X)進(jìn)行線性回歸,得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:Y=0.0819X+0.0001(R2=0.9998)。

1.2.3.2 待測樣液中總黃酮濃度的測定 按1.2.1方法得到2.5 mL待測樣液總黃酮濃度Y1(mg/mL),依公式(1)計(jì)算待測樣液中總黃酮濃度Y0(mg/mL)。

式(1)

其中:Y0為吸附前后待測樣液的濃度(mg/mL);Y1為從待測樣液中吸取2.5 mL進(jìn)行顯色的顯色溶液總黃酮濃度(mg/mL);10為定容到10 mL容量瓶中。

1.2.4 甜茶葉總黃酮的純化

1.2.4.1 大孔樹脂預(yù)處理 將大孔樹脂先用無水乙醇浸泡24 h,使其充分溶脹,再用純水沖洗至洗滌水無渾濁、無懸浮雜質(zhì)、無醇味。純水水洗之后分別用4%的HCl溶液和NaOH溶液各浸泡3 h,最后用純水洗至中性,備用[14]。

1.2.4.2 大孔樹脂的靜態(tài)吸附和解吸 準(zhǔn)確稱取預(yù)處理后的12種型號大孔樹脂(NKA、HPD-500、NKA-9、S-8、HPD-450、DM130、AB-8、LS-300B、D101、HP-20、HPD-100、X-5)各2.00 g(濕質(zhì)量)裝入100 mL具塞錐形瓶中,分別精密加入50 mL(記為V)，按“1.2.2”方法制得的上樣液(1.0137 mg/mL),按“1.2.3.2”的方法計(jì)算其吸附前后待測樣液總黃酮濃度記為Y0,將上樣液在恒溫水浴振蕩器中振搖吸附24 h,取上清液用定性濾紙過濾,按“1.2.3.2”的方法計(jì)算吸附后溶液中總黃酮濃度(記為Y2)。將濾出的各樹脂另裝入100 mL具塞錐形瓶中,分別精密加入60%乙醇50 mL(記為V1),在恒溫水浴振蕩器中振搖解吸24 h,得解吸后溶液,取上清液過濾,按“1.2.3.2”的方法計(jì)算解吸后溶液中總黃酮濃度(記為Y3)。根據(jù)公式(2)計(jì)算靜態(tài)吸附量(mg/g)、根據(jù)公式(3)計(jì)算靜態(tài)吸附率(%)、根據(jù)公式(4)計(jì)算靜態(tài)解吸量(mg/g)、根據(jù)公式(5)計(jì)算靜態(tài)解吸率(%)。

式(2)

式(3)

式(4)

式(5)

其中:Y0為吸附前上樣液中總黃酮濃度(mg/mL)；Y2為吸附后樣液中總黃酮濃度(mg/mL)；Y3為解吸后樣液中總黃酮濃度(mg/mL)；V為吸附上樣液體積(mL)；V1為解吸液體積(mL)；m為濕樹脂質(zhì)量(g)。

1.2.4.3 大孔樹脂的靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn) 稱取預(yù)處理好的HPD-450、AB-8、HPD-500、NKA-9、D101大孔樹脂各2.0 g,裝入100 mL具塞錐形瓶中,精確加入質(zhì)量濃度為1.0137 mg/mL的上樣液50 mL,在恒溫振蕩器中振蕩,每隔1 h取上清液測定吸光度并計(jì)算吸附率,繪制這5種大孔樹脂靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)曲線[28-29]。

1.2.4.4 上樣液對HPD-450大孔樹脂動(dòng)態(tài)吸附的影響 取處理好的大孔樹脂30 g,采用濕法裝柱的方式裝入層析柱中,分別取5份質(zhì)量濃度為0.3125、0.6171、0.9167、1.2875、1.5424 mg/mL的甜茶葉總黃酮樣液200 mL,以1.5 BV/h流速上柱,每10 mL收集一次流出液,分別測定流出液總黃酮含量,以流出液甜茶葉總黃酮的濃度對流出液體積作圖,繪制不同濃度甜茶葉總黃酮的穿透曲線;合并流出液測定總黃酮的含量并計(jì)算吸附的總黃酮質(zhì)量及吸附率[28-29]。

1.2.4.5 洗脫劑乙醇溶液濃度對HPD-450大孔樹脂解吸效果的影響 分別取6份濃度為0.9167 mg/mL的甜茶葉黃酮樣液150 mL,以1.5 BV/h流速上柱,將吸附飽和的樹脂用純水沖洗至流出液無色,分別用10%、25%、40%、55%、70%和85%乙醇溶液洗脫,流速為1.5 BV/h,每10 mL收集1管洗脫液,每次收集的洗脫液與之前所有收集的洗脫液合并,測定合并后洗脫液中總黃酮的含量,計(jì)算解吸率,繪制不同濃度乙醇溶液的動(dòng)態(tài)解吸曲線,篩選較優(yōu)洗脫劑濃度和洗脫劑用量[28-29]。

1.2.4.6 甜茶葉精黃酮的制備與精黃酮純度測定 按照較優(yōu)工藝的優(yōu)選方法:選用最佳大孔樹脂,較好上樣液質(zhì)量濃度,最佳上樣量,上樣液以1.5 BV/h流速上柱,依次用2 BV純水洗脫,以最佳乙醇質(zhì)量濃度55%和乙醇用量170 mL洗脫,將流出的溶液旋干,準(zhǔn)確稱取一定質(zhì)量(m1)的旋干后的固體粉末溶于一定量(V2)的純水中,按“1.2.3.2”的方法計(jì)算其總黃酮濃度記為Y3,按公式(6)計(jì)算經(jīng)大孔樹脂純化后甜茶葉精黃酮純度(%),按公式(7)計(jì)算經(jīng)大孔樹脂純化后甜茶葉總黃酮回收率(%)。

式(6)

式(7)

1.2.5 抗氧化活性試驗(yàn) 甜茶葉黃酮樣液濃縮干燥所得樣品為甜茶葉粗黃酮,經(jīng)大孔樹脂純化后所得樣品為甜茶葉精黃酮,以維生素C、蘆丁為對照,分別測定維生素C、蘆丁、甜茶葉粗黃酮和甜茶葉精黃酮四種樣品對DPPH·自由基的清除能力和各自的總抗氧化能力(T-AOC),從而評價(jià)甜茶葉粗黃酮和甜茶葉精黃酮的抗氧化活性[30-32]。

1.2.5.1 清除DPPH·能力 參照滕昭玉等[33]的方法,準(zhǔn)確移取0.2 mg/mL DPPH·無水乙醇溶液1.6 mL和1 mL不同的待測試樣(甜茶葉粗黃酮、甜茶葉精黃酮、維生素C、蘆丁)于10 mL具塞比色管中,用無水乙醇定容并搖勻,避光放置30 min,用無水乙醇做參比液在517 nm處測定吸光度,記為Ai;按上述步驟和方法不加待測試樣測吸光度,記為A0;按上述步驟和方法不加DPPH·無水乙醇溶液測吸光度,記為Aj。DPPH·清除率用公式(8)計(jì)算。

式(8)

1.2.5.2 總抗氧化能力(T-AOC) 參照(T-AOC)試劑盒說明進(jìn)行總抗氧化能力測定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

每組實(shí)驗(yàn)作3次平行或重復(fù)實(shí)驗(yàn),結(jié)果取平均數(shù),實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 2010軟件和Origin 8繪圖軟件進(jìn)行處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 12種大孔樹脂的靜態(tài)吸附和解吸效果

表1 12種大孔樹脂的靜態(tài)吸附和解吸效果Table 1 Static adsorption and desorption effects of 12 macroporous resins

由表1可知,從12種大孔樹脂24 h的靜態(tài)吸附和解吸效果來看,對甜茶葉總黃酮吸附率超過75%的大孔樹脂類型由高到低依次是HPD-500、HPD-450、NKA-9、AB-8、D101,解吸量排在前5位的大孔樹脂類型由高到低依次是HPD-450、HPD-500、NKA-9、AB-8、D101,解吸率排在前5位的大孔樹脂類型由高到低依次是HPD-450、NKA-9、AB-8、LS-300B、HP-20,弱極性和極性大孔樹脂比非極性大孔樹脂更適合于甜茶葉總黃酮的分離純化,這與王國軍等[14]大孔樹脂純化核桃隔膜總黃酮的研究結(jié)果相似,造成這種現(xiàn)象的原因可能是弱極性大孔樹脂既可在極性溶劑中吸附非極性物質(zhì),又可在非極性溶劑中吸附極性物質(zhì)。經(jīng)綜合評價(jià)分析(主要比較吸附量和解吸量,選擇既吸附性能好又解吸性能好的樹脂類型),選取表現(xiàn)較好的5種大孔樹脂HPD-450、HPD-500、NKA-9、AB-8、D101作靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)。

2.2 大孔樹脂的靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)曲線

由圖1可知,HPD-450大孔樹脂對供試液的吸附率在前4 h升高較快,靜態(tài)吸附4 h時(shí)其吸附率達(dá)到68.45%,已經(jīng)接近吸附10 h時(shí)的最大吸附率75.89%;其他4種樹脂對供試液的吸附率均在前7 h升高較快,7 h后其吸附率才趨于穩(wěn)定達(dá)到最大值。5種大孔樹脂7 h的靜態(tài)吸附率由高到低依次是HPD-450、D101、HPD-500、AB-8、NKA-9,結(jié)合這5種大孔樹脂的吸附速率綜合分析,選擇HPD-450大孔樹脂為甜茶葉總黃酮分離純化的最佳大孔樹脂。這與王國軍等[14]研究的8 h靜態(tài)吸附率AB-8>HPD-450≈HPD-500大孔樹脂的結(jié)果略有不同。

圖1 5種大孔樹脂靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)曲線Fig.1 Static adsorption kinetics curves of five macroporous resins

2.3 上樣液對HPD-450大孔樹脂動(dòng)態(tài)吸附效果

由圖2可知,在相同流速1.5 BV/h條件下,用不同濃度的甜茶葉總黃酮樣液過柱,流出液中總黃酮濃度的總體表現(xiàn)趨勢為:當(dāng)流出液體積相同時(shí),上樣液的濃度越大,流出液中總黃酮濃度增加就越明顯,即隨著上樣液濃度的增加,流出液中總黃酮的含量增加,樣液中總黃酮的損失率增高。當(dāng)上樣量較小時(shí),樹脂對總黃酮的吸附隨著上樣量增加而不斷增大,原因是起始階段樹脂表面有足夠的基團(tuán)吸附總黃酮,隨著樹脂表面基團(tuán)逐漸飽和其吸附能力不斷減弱,表現(xiàn)為流出液濃度升高,當(dāng)流出液中甜茶葉總黃酮的質(zhì)量濃度達(dá)到上樣液的10%時(shí),即認(rèn)定為大孔樹脂已飽和并發(fā)生穿透[14]。如圖2，當(dāng)用0.3125、0.6171、0.9167、1.2875、1.5424 mg/mL的甜茶葉總黃酮樣液過柱時(shí),達(dá)到飽和穿透所對應(yīng)的上樣量體積分別為120、160、140、100、80 mL。此條件下大孔樹脂吸附的甜茶葉總黃酮質(zhì)量分別為34.79、92.34、120.22、121.37、115.41 mg,所對應(yīng)的吸附率分別為92.77%、93.52%、93.67%、94.27%、93.53%。從大孔樹脂發(fā)生穿透時(shí)的吸附量和吸附率分析,當(dāng)上樣液濃度為1.2875 mg/mL、上樣量100 mL時(shí),大孔樹脂的吸附量最大、吸附率也最高。因此確定較好的上樣條件為:上樣液濃度1.2875 mg/mL、上樣量體積100 mL。

圖2 不同濃度甜茶葉總黃酮的穿透曲線Fig.2 Penetration curve of total flavonoids of sweet tea with different concentrations

表2 甜茶葉粗黃酮、甜茶葉精黃酮、維生素C以及蘆丁清除DPPH·的線性方程Table 2 Linear equation for DPPH· scavenging of sweet tea crude flavonoids,sweet tea refined flavonoids,vitamin C and rutin

2.4 洗脫劑乙醇對HPD-450大孔樹脂解吸效果

由圖3可知,洗脫液合并后的解吸率總體表現(xiàn)趨勢為隨著洗脫劑乙醇濃度的增大而增高,當(dāng)乙醇濃度達(dá)到55%以上時(shí),隨著乙醇濃度的增高其解吸率增高不明顯,因此選擇洗脫劑乙醇濃度為55%。當(dāng)洗脫劑乙醇濃度為55%,洗脫劑用量達(dá)到170 mL時(shí),洗脫液合并后的解吸率達(dá)到或接近最大值,之后隨洗脫劑用量的增加,解吸率變化不大。因此選擇洗脫劑乙醇用量為170 mL。

圖3 不同濃度乙醇溶液的動(dòng)態(tài)解吸曲線Fig.3 Dynamic desorption curve of ethanol solution with different concentrations

2.5 甜茶葉總黃酮的純化與最佳工藝驗(yàn)證

按照上述優(yōu)選的較優(yōu)工藝條件:選用HPD-450大孔樹脂,上樣液質(zhì)量濃度為1.2875 mg/mL,上樣量100 mL(上樣量體積與樹脂質(zhì)量比為10∶3),上樣液以1.5 BV/h流速上柱,依次用2 BV純水洗脫,170 mL 55%乙醇洗脫,將流出的溶液旋干,稱質(zhì)量。做3次平行試驗(yàn)。純化前粗黃酮樣品質(zhì)量128.75 mg,純化前總黃酮含量20.96 mg,粗黃酮純度為16.28%;經(jīng)純化工藝處理后,經(jīng)測定計(jì)算得精黃酮純度和回收率,結(jié)果顯示,3次平行試驗(yàn)純化后精黃酮純度分別為30.43%、32.11%、32.82%,精黃酮純度平均值為31.79%;3次平行試驗(yàn)回收率分別為89.07%、90.89%、91.51%,該工藝下的平均回收率為90.49%。結(jié)果顯示在上述工藝條件下,HPD-450大孔樹脂對甜茶葉總黃酮的吸附純化率和回收率較高,且穩(wěn)定。

2.6 甜茶葉總黃酮的抗氧化活性效果

2.6.1 甜茶葉總黃酮對DPPH·的清除效果 由圖4可知,在一定濃度范圍內(nèi)甜茶葉總黃酮對DPPH·清除能力隨濃度的增加而提高,這與胡芳等[34]金絲小棗類黃酮隨著時(shí)間和濃度的增加抗氧化能力逐漸增強(qiáng)的研究結(jié)果相似。甜茶葉粗黃酮、甜茶葉精黃酮、維生素C以及蘆丁對DPPH·清除能力強(qiáng)弱順序?yàn)榫S生素C>甜茶葉粗黃酮>甜茶葉精黃酮>蘆丁,這與張彩云[35]研究的在濃度低于0.08 mg/mL時(shí)強(qiáng)弱順序?yàn)樘鸩枞~粗黃酮>甜茶葉精黃酮>維生素C的結(jié)果不同;甜茶葉粗黃酮對DPPH·清除能力強(qiáng)于甜茶葉精黃酮可能與甜茶葉粗黃酮粗品體系中各種抗氧化活性物質(zhì)之間相互協(xié)同作用有關(guān)[36]。由表2可知,甜茶葉粗黃酮、甜茶葉精黃酮、維生素C、蘆丁的IC50值分別為0.0187、0.0202、0.0175和0.0265 mg/mL,表明甜茶葉粗黃酮比甜茶葉精黃酮具有較強(qiáng)的抗氧化活性,且兩者對DPPH·的清除效果均低于維生素C、高于蘆丁。

圖4 不同樣品對DPPH·的清除效果Fig.4 Scavenging effect of DPPH· on different samples

圖5 不同濃度樣品的總抗氧化能力效果Fig.5 Effects of total antioxidant capacity of samples with different concentrations注:不同小寫字母表示同濃度下不同樣品 總抗氧化能力差異顯著,P<0.05。

2.6.2 甜茶葉總黃酮總抗氧化能力(T-AOC)效果 由圖5可知,甜茶葉粗黃酮、甜茶葉精黃酮、維生素C以及蘆丁各自的總抗氧化能力隨濃度的增大而增強(qiáng)。在各濃度梯度的總抗氧化能力由強(qiáng)到弱的順序均表現(xiàn)為甜茶葉粗黃酮>甜茶葉精黃酮>維生素C>蘆丁。這與它們對DPPH·清除效果表現(xiàn)有所不同。在0.02 mg/mL濃度組內(nèi),甜茶葉粗黃酮總抗氧化能力顯著大于甜茶葉精黃酮、維生素C、蘆丁,甜茶葉精黃酮總抗氧化能力大于維生素C但兩者差異不顯著;在0.03、0.04 mg/mL濃度組內(nèi),甜茶葉粗黃酮總抗氧化能力大于甜茶葉精黃酮但兩者差異不顯著,而兩者均顯著(P<0.05)大于維生素C;甜茶葉粗黃酮、維生素C、精黃酮在3個(gè)不同濃度組內(nèi)的總抗氧化能力均顯著大于蘆丁。這與孫海燕[21]櫻桃核中類黃酮的總抗氧化能力(5.03 U/mL)高于維生素C(3.32 U/mL)以及張文華[37]、張彩云[35]的研究結(jié)論相近。

3 結(jié)論

HPD-450對甜茶葉總黃酮分離純化效果最佳。30 g HPD-450大孔樹脂動(dòng)態(tài)吸附上樣條件為:上樣液濃度1.2875 mg/mL、上樣量體積100 mL;洗脫液合并后對HPD-450大孔樹脂的解吸率總體表現(xiàn)趨勢為:隨著洗脫劑乙醇濃度的增大而增高,乙醇濃度達(dá)到55%以上時(shí)其解吸率增高不明顯,因此確定洗脫劑乙醇濃度為55%;洗脫劑用量達(dá)到170 mL時(shí),洗脫液合并后的解吸率達(dá)到或接近最大值,因此確定洗脫劑乙醇用量為170 mL。按照確定的較優(yōu)純化工藝條件進(jìn)行驗(yàn)證,純化后精黃酮純度為31.79%,試驗(yàn)回收率為90.49%,在該純化工藝條件下,HPD-450大孔樹脂對甜茶葉總黃酮的吸附純化率和回收率較高且穩(wěn)定。

甜茶葉粗黃酮、甜茶葉精黃酮、維生素C、蘆丁對DPPH·的IC50值分別為0.0187、0.0202、0.0175和0.0265 mg/mL,表明甜茶葉粗黃酮比甜茶葉精黃酮具有較強(qiáng)的清除DPPH·能力,甜茶葉粗黃酮、精黃酮對DPPH·清除能力均低于維生素C而高于蘆丁。從總抗氧化能力(T-AOC)效果評判,在0.02 mg/mL濃度組內(nèi),甜茶葉粗黃酮總抗氧化能力顯著大于甜茶葉精黃酮、維生素C、蘆丁,甜茶葉精黃酮總抗氧化能力大于維生素C但兩者差異不顯著;在0.03、0.04 mg/mL濃度組內(nèi),甜茶葉粗黃酮總抗氧化能力大于甜茶葉精黃酮但兩者差異不顯著,而兩者均顯著大于維生素C。表明甜茶葉總黃酮具有較好的體外自由基清除效果和較高的總抗氧化能力。但甜茶葉中具有活性的黃酮類化合物種類有待進(jìn)行分離和鑒定,同時(shí),其體內(nèi)抗腫瘤活性等試驗(yàn)研究可為甜茶葉的深入開發(fā)應(yīng)用提供理論依據(jù)。