清熱化瘀及益氣清熱化瘀中藥對實驗動物PGE2的影響

蔣順琬，陳峙，賴文強，張勇，孫淑芬，麥慶春，陳大宇

DOI：10.16662/j.cnki.1674-0742.2019.35.004

[摘要] 目的 比較清熱化瘀與清熱益氣化瘀中藥浸漬治療急性軟組織損傷家兔的前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）的影響。方法 由華西醫(yī)學中心動物實驗中心提供40只SPF級雄性家兔，建立家兔急性軟組織損傷動物模型，將其編號后，隨機分為空白組、造模組、清熱化瘀組以及清熱益氣化瘀組，觀測其皮下瘀血、肌肉腫脹和肌肉顏色，檢測24 h、72 h時各組受損肌肉組織的PGE2含量變化。結果 造模24 h、48 h、72 h時觀測損傷癥候指數(shù)并評分，72 h時，與空白組（0.00±0.00）分和造模組（3.08±0.26）分比較，清熱化瘀組（2.02±0.86）分和清熱益氣化瘀組（1.97±1.73）分損傷癥狀明顯改善，但兩組之間，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;檢測造模24 h、72 h后的PGE2含量，72 h后造模組（98.79±2.78）與清熱益氣化瘀組（73.42±4.12）pg/mL和清熱化瘀組（76.99±4.85）pg/mL比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），但清熱化瘀組與清熱化瘀組之間，差異無統(tǒng)計學意義P>0.05）。結論 相比清熱化瘀浸漬藥液，清熱益氣化瘀浸漬藥液對家兔軟組織受損部位的PGE2抑制效果更好，對急性軟組織損傷的消炎和修復有明顯作用。

[關鍵詞] 急性軟組織損傷;淸熱化瘀;益氣清熱化瘀;中藥浸漬液;中藥外治;PGE2

[中圖分類號] R274.3 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1674-0742（2019）12（b）-0004-04

Effect of Heat of Blood and Invigorate Qi， Clear Heat and Remove Blood Stasis Chinese Medicine on Experimental Animal PGE2

JIANG Shun-wan， CHEN Zhi， LAI Wen-qiang， ZHANG Yong， SUN Shu-fen， MAI Qing-chun， CHEN Da-yu

Department of Orthopaedics， the Fourth Clinical Medical College of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine （Shenzhen Hospital of Traditional Chinese Medicine）， Shenzhen， Guangdong Province， 518030， China

[Abstract]Objective Effects of heat of blood and invigorate Qi， clear heat and remove blood stasis Chinese medicine on prostaglandin E2 （PGE2） in rabbits with acute soft tissue injury. Methods 40 SPF male rabbits were provided by the Animal Experimental Center of Huaxi Medical Center ， Animal models of acute soft tissue injury in rabbits were established. After being numbered， they were randomLy divided into blank group， model group， heat of blood group and invigorate Qi， clear heat and remove blood stasis group. The subcutaneous blood stasis， muscle swelling and muscle color were observed And Changes of PGE2 content in damaged muscle tissue of each group at 24 h，72 h were measured. Results The injury syndrome index was observed and scored at 24 h， 48 h， and 72 h. At 72 h， compared with the blank group （0.00±0.00）points and the model group （3.08±0.26）points， the heat of blood group （2.02±0.86）points combined with invigorate Qi， clear heat and remove blood stasis group （1.97±1.73）points were significantly improved， but the difference between the two groups was not significant （P>0.05）. The PGE2 content after 24 h， 48 h and 72 h was detected， and the model was established after 72 h. The group （98.79±2.78）pg/mL was significantly different from the invigorate Qi， clear heat and remove blood stasis group（73.42±4.12） pg/mL and the heat of blood group （76.99±4.85）pg/mL the difference was statistically significant（P<0.05）， but the heat of blood group and the heat of blood group no statistically significant difference （P>0.05）. Conclusion The phlegm-heating sputum immersion liquid and the invigorate Qi， clear heat and remove blood stasis sputum immersion liquid can reduce the soft tissue inflammation of the damaged part by inhibiting the increase of PGE2 content， and contribute to the recovery of acute soft tissue injury.

[Key words] Acute soft tissue injury;Clearing away heat and stasis;Yiqi Qingre Huayu;Chinese medicine impregnating solution;Chinese medicine external treatment;PGE2

急性軟組織損傷是在勞動、運動等日常活動中極易發(fā)生的一種骨科常見疾患，軟組織損傷的原因可分為扭傷和挫傷兩種，具有發(fā)病急、腫痛、壓痛、叩擊痛以及運動障礙等癥狀，給患者的日常生活、工作和學習帶來嚴重的影響[1]。機體受到外界暴力作用時產(chǎn)生PGE2，這是一種能引起炎癥反應的生物活性很強的物質，會導致局部組織腫脹、疼痛[2-3]?，F(xiàn)代醫(yī)學治療急性軟組織損傷的方法主要有理療、局部冷療以及消炎鎮(zhèn)痛藥物等。中醫(yī)學在治療急性軟組織損傷方面一直有其獨特的優(yōu)勢，除了中藥口服之外，中藥外治也是臨床廣泛應用的一種治療方法[4]。該次實驗選取40只雄性家兔欲研究清熱益氣化瘀浸漬藥液、清熱化瘀浸漬藥液治療急性軟組織損傷對家兔PGE2的影響，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1 ?動物

SPF級雄性家兔40只（2.0～2.5 kg），由華西醫(yī)學中心動物實驗中心提供。

1.2 ?藥物及儀器

前列腺E2放免試劑盒（解放軍總醫(yī)院）;清熱益氣化瘀浸漬液（該院制劑，由黃連、黃岑、黃柏、梔子、大黃、紅花、冰片、地榆、黃芪等中藥組成，除冰片之外，其余藥材用清水漂洗1次，家蒸餾水煎取藥液，冰片、人工麝香在95%酒精中融解后，加入煎取液，裝瓶加鋁蓋高壓滅菌后備用）與清熱化瘀浸漬液（該院制劑，由黃連、黃岑、黃柏、梔子、大黃、紅花、冰片、地榆等中藥組成，除冰片之外，其余藥材用清水漂洗1次，加蒸餾水煎取藥液，冰片在95%酒精中融解后，加入煎取液，裝瓶加鋁蓋高壓滅菌后備用）;GC-1200全自動γ放免計數(shù)儀（北京大學深圳醫(yī)院實驗室）。

1.3 ?分組及造模

將家兔編號后，隨機分為空白組、造模組、清熱化瘀組以及清熱益氣化瘀組，每組10只家兔。其中，造模組、清熱化瘀組以及清熱益氣化瘀組采用重物打擊造模法，實驗前24 h用8%硫化鈉于家兔大腿后側脫毛，用200 g鐵塊從130 cm高沿空心管自由落體3次幾大家兔大腿后側軟組織，造成家兔局部軟組織損傷，以肉眼可見打擊部位明顯皮下出血及腫脹，數(shù)分鐘后觸摸有明顯腫脹感為造模成功[5]。造模成功30 min后，各組于受打擊處分別涂抹以下藥液0.5 mL，清熱化瘀組涂抹清熱化瘀浸漬液（該院制劑）、清熱益氣化瘀組涂抹清熱益氣化瘀浸漬液（該院制劑）、空白組涂抹蒸餾水，造模組只造模不涂藥[2]。

1.4 ?指數(shù)評定

造模后，每天觀察和測量受損部位腫脹、瘀斑情況并且進行評分，評分標準見表1;第24小時、72小時用放免法檢測家兔PGE2的含量。

表1 ? 損傷癥狀評分標準

1.5 ?PGE2含量的測定

于造模后24 h、72 h分別在各組中任取5只家兔，采用拉椎造成頸椎脫位方法處死，用手術刀切開家兔受打擊部位皮膚，切取受打擊部位肌肉組織，加入生理鹽水漂洗1 min，用濾紙吸干，切取肌肉組織每20 mg加入1 mL生理鹽水，在勻漿器中均勻研磨15 min，倒入試管中，防止高速離心機離心15 min，取上清液備用，采用放免法測定勻漿液PGE2含量，具體操作嚴格按照試劑盒要求完成[2]。

1.6 ?統(tǒng)計方法

數(shù)據(jù)應用SPSS 16.0統(tǒng)計學軟件進行分析，其中計數(shù)資料（%）進行χ2檢驗，計量資料（x±s）進行t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 ?結果

2.1 ?損傷癥候指數(shù)比較

不同觀察時間損傷指數(shù)評分統(tǒng)計結果見表2。

3個造模實驗小組組內不同時點損傷癥候對比。造模組在24 h、48 h和72 h 3個時點，皮下組織淤血、肌肉腫脹、肌肉顏色均由緩慢改善，損傷指數(shù)評分平緩降低，造模后48 h、72 h與24 h對比，72 h與48 h對比，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;清熱化瘀組在幾個觀察時點的損傷指數(shù)評分下降速度較快，受損癥狀明顯的到改善，造模后48 h、72 h與24 h對比，72 h與48 h對比，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;清熱益氣化瘀組在幾個觀察時點的損傷指數(shù)評分下降速度快，肌肉組織受損癥狀顯著改善，造模后48 h、72 h與24 h對比，72 h與48 h對比，均差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

各個實驗小組進行組間比較。造模后24 h，觀測各組損傷癥候時，空白組家兔評分為0分，其他3組均出現(xiàn)皮下組織淤血、肌肉腫脹、肌肉暗紅，其中造模組評分最高，清熱化瘀組次之，清熱化瘀組最低，但3組評分比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。造模72 h后，清熱化瘀組和清熱益氣化瘀組的癥狀改善均好于造模組，但是兩組之間的癥狀評分比較后，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。造模組在造模后的PGE2含量符合軟組織損傷的變化趨勢，在組織受損的72 h內PGE2含量持續(xù)升高。造模后選擇的3個觀測時點的結果顯示，清熱化瘀浸漬藥液和清熱益氣化瘀浸漬藥液持續(xù)在改善實驗家兔的受損組織，且清熱益氣化瘀組效果優(yōu)于清熱化瘀組，單兩者評分比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

表2 ? 不同觀察時間損傷癥候指數(shù)評分統(tǒng)計結果[（x±s），分]

注：與空白組對比，P<0.05;與模型組對比，P<0.05

2.2 ?PGE2含量測定

造模后24 h、72 h各組PGE2含量比較如表3。

3個造模實驗小組內部不同時點PGE2含量比較，造模組在造模72 h時，實驗家兔PGE2含量少量上升，但是與24 h比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;清熱化瘀組實驗家兔在造模后30 min涂抹清熱化瘀浸漬藥液，受損部位的PGE2含量迅速降低，72 h時與24 h比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;清熱益氣化瘀組造模后涂抹清熱益氣化瘀浸漬藥液，藥物持續(xù)降低受損部位受損部位的PGE2含量，72 h時與24 h比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

4組進行組間比較。造模后24 h，測定PGE2含量時，空白組家兔較其余3組明顯低;經(jīng)過造模的3組家兔的PGE2含量相差不大，清熱益氣化瘀組最低，造模組最高，3組之間比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），是由于清熱化瘀浸漬藥液和清熱益氣化瘀浸漬藥液清熱益氣化瘀浸漬藥液的藥效開始起作用。造模72 h后，造模組的PGE2含量最高，清熱化瘀組PGE2含量比清熱化瘀組高，造模組與清熱益氣化瘀組和清熱化瘀組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。但清熱化瘀組與清熱化瘀組之間，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。造模組在造模后的PGE2含量符合軟組織損傷的變化趨勢，在組織受損的72 h內PGE2含量持續(xù)升高。造模后24 h、72 h觀測的結果可見，清熱化瘀浸漬藥液和清熱益氣化瘀浸漬藥液持續(xù)在降低實驗家兔受損部位的PGE2含量，且清熱益氣化瘀組的下降幅度更大。

表3 ? 造模后24 h、72 h各組家兔PGE2含量比較[（x±s），pg/mL]

注：與空白組對比，P<0.05;與模型組對比，P<0.05

3 ?討論

急性軟組織損傷多是因為受到外部暴力撞擊、強力壓迫等，臨床表現(xiàn)一般為局部皮膚青紫瘀斑、組織疼痛腫脹、肢體行動不便等[7]，根據(jù)其病情不同，可將其分為筋斷、筋走、筋結、筋歪、筋弛、筋攣、筋翻、筋錯位等不同類別。中醫(yī)將急性軟組織損傷歸為“傷筋”的范疇，認為其病機為“氣滯與血瘀”，“若因傷折內東經(jīng)絡，血行之道不得宣通。積淤不散，為腫為痛”[8]。PGE2是一種機體內合成的中藥炎癥細胞因子，與緩激肽或其他炎癥介質作用，可加劇體內的炎癥反應[3]。有研究表明，在炎癥急性期，損傷部位PGE2含量增加，導致毛細血管的通透性增加，白細胞趨化，造成組織水腫，抑制PGE2可加速修復受損組織[9]。因此，中醫(yī)治療急性軟組織損傷主要是活血散淤、消腫通絡、行氣止痛[10]。中藥外治是治療組織創(chuàng)傷的常用方法，是中醫(yī)治療“筋傷”的一大特色，藥物中的有效成分通過皮膚吸收直接作用于受傷區(qū)域，可保持受傷區(qū)域的藥物有效成分濃度，起到消炎鎮(zhèn)痛的功效[11-12]。

目前中醫(yī)外治急性軟組織損傷大多用淸熱化瘀浸漬藥液，該次實驗選用的外治藥物還有清熱益氣化瘀浸漬藥液（兩種中藥浸漬液均為該院自制）。以上兩種中藥浸漬液成分大致相同，且均有清熱化瘀、通調經(jīng)絡、消腫止痛的功效，只是清熱化瘀浸漬藥液比清熱益氣化瘀浸漬藥液少了黃芪兩味中藥[6]，黃芪能具有行氣益氣的功效，在清熱化瘀的基礎上增強益氣行氣補氣的藥效。清熱益氣化瘀浸漬藥液以黃連為主藥，配以黃岑、黃柏為臣藥。黃連清熱燥濕，干瀉火解毒;黃芩燥濕泄熱，涼血止血，具清熱與止血雙重作用;黃進柏清熱燥濕，退熱除疹;地榆涼血止血與黃連相配，加強清熱解干毒之力;紅花活血祛瘀，通調經(jīng)脈。諸藥配伍以黃連之君泄中焦之火;黃芩泄上焦之火，黃柏泄下焦之火為臣;梔子通泄3焦之火，冰片甘涼解毒，止痛消腫，配以黃芪益氣利水及大黃、紅花活血化瘀、地榆涼血收斂合為佐使;共湊清熱益氣化瘀，通調經(jīng)絡，消腫止痛。上述諸藥合用，共奏行氣清時熱活血、消瘀止痛之效，從而有效緩解急性軟組織損傷帶來的各種癥狀。該次研究中，家兔造模24 h后PGE2含量升高，經(jīng)過造模的各組含量相差不大，但給予中藥浸漬液的兩組在72 h后，PGE2含量分別為（76.99±4.85）pg/mL、（73.42±4.12）pg/mL，遠低于造模組（98.79±2.78）pg/mL。羅宗鍵等人對大鼠進行軟組織損傷造模使用丹歸消腫膏治療，分為高、中、低劑量組以及模型組并進行觀測，發(fā)現(xiàn)PGE2含量受傷后逐漸上升，在24 h升高至高峰，24 h后逐漸降低，給予藥物的3組在72 h后PGE2含量分別為（4.06±0.21）pg/mL、（4.11±0.31）pg/mL、（4.01±0.32）pg/mL，低于模型組（4.38±0.25）pg/mL。家兔和大鼠在軟組織損傷后的PGE2含量在24 h內均在上升，之后逐漸下降，但是中藥外治可快速降低PGE2含量，有利于動物軟組織恢復。

通過該次動物實驗發(fā)現(xiàn)，淸熱化瘀中藥浸漬液與益氣清熱化瘀浸漬藥液對急性軟組織受損的家兔均有治療作用，它們能抑制PGE2含量增高，減少軟組織受損部位炎癥，緩解損傷部位癥狀，且益氣清熱化瘀浸漬藥液的治療效果更為明顯。

[參考文獻]

[1] ?李俊英，朱蜀云.舒筋活絡膏貼敷治療急性軟組織損傷的效果觀察及護理[J].黑龍江中醫(yī)藥，2018，47（1）：77-79.

[2] ?羅宗鍵，邸琳，冷向陽.丹歸消腫膏對急性軟組織損傷大鼠PGE_2、IL-6的影響[J].中國醫(yī)藥指南，2011，9（36）：62-63.

[3] ?吳炎鋒. 鄭氏當歸散對SD大鼠急性軟組織損傷后PGE2及組織形態(tài)學的影響[D].成都：成都體育學院，2018.

[4] ?程濤，黃家駿.中藥內服治療急性軟組織損傷的研究進展[J].中醫(yī)正骨，2017，29（1）：39-41.

[5] ?孫欣，尹宏，卞勇，錢衛(wèi)慶.活血散對大鼠急性軟組織損傷PGE_2及IL-6影響的實驗研究[J].世界中醫(yī)藥，2015，10（6）：900-903.

[6] ?楊洪杰，蔣順琬，苗峻.清熱化瘀及清熱益氣化瘀中藥浸漬液治療急性軟組織損傷療效的對照研究[J].中醫(yī)外治雜志，2014，23（3）：20-21.

[7] ?李順.四黃散外敷治療急性軟組織損傷320例[J].內蒙古中醫(yī)藥，2017，36（1）：58-59.

[8] ?黃愛群，傅國彥.正骨白藥膏治療軟組織急性損傷臨床療效觀察[J].內蒙古中醫(yī)藥，2017，36（9）：99-100.

[9] ?王振，張曉剛，宋敏，等.外用中藥制劑治療急性軟組織損傷的動物實驗研究現(xiàn)狀及進展[J].中國中醫(yī)急癥，2016，25（11）：2104-2107.

[10] ?董澤順，蔣武平，陳妙娟.小針刀療法治療急性嚴重閉合性軟組織損傷臨床觀察[J].新中醫(yī)，2016，48（1）：98-100.

[11] ?羅清龍，唐良華，熊屹，等.苗藥筋骨傷噴霧劑治療急性軟組織損傷的臨床療效觀察[J].臨床醫(yī)藥文獻電子雜志，2017， 4（15）：2909-2910.

[12] ?宋圓圓，呂發(fā)明.藥膏貼敷治療閉合型急性軟組織損傷的相關研究[J].新疆中醫(yī)藥，2017，35（2）：93-96.

（收稿日期：2019-09-11）