2型糖尿病氣陰兩虛型患者尿液中氨基酸與相關(guān)指標的分析

魯 娜， 馬曉麗， 李琳琳， 王 燁， 王麗鳳， 駱 新， 毛新民， 蘭 怡

(新疆醫(yī)科大學1省部共建中亞高發(fā)病成因與防治國家重點實驗室， 2藥學院， 3基礎醫(yī)學院， 4中醫(yī)學院， 烏魯木齊 830011；5附屬中醫(yī)醫(yī)院， 烏魯木齊 830000)

2型糖尿病(T2DM)約占糖尿病(DM)患者總?cè)藬?shù)的90%以上。文獻回顧總結(jié)發(fā)現(xiàn)氣陰兩虛證型處于T2DM中所有證型的首要位置[1]。有研究發(fā)現(xiàn)，體質(zhì)指數(shù)(BMI)、腰圍(WC)和腰臀比(WHtR)預測糖尿病、高血脂、肥胖等相關(guān)疾病風險的可行性和重要價值已被肯定[2]，支鏈氨基酸(異亮氨酸、亮氨酸、纈氨酸)和芳香族氨基酸(酪氨酸、苯丙氨酸)升高能增加糖尿病的患病風險[3]。本課題組前期利用HPLC技術(shù)對2型糖尿病氣陰兩虛型患者尿液進行研究，發(fā)現(xiàn)其氨基酸代謝性標志物為異亮氨酸、蛋氨酸、酪氨酸[4-5]。有研究認為，T2DM的不同中醫(yī)辨證分型與BMI、WC等臨床指標密切相關(guān)，具有一定的差異性[6]。本研究探討2型糖尿病氣陰兩虛型的特征性氨基酸代謝物與生理、生化指標的相互聯(lián)系，為T2DM中醫(yī)辨證分型客觀量化提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1研究對象對新疆醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院177例2型糖尿病(T2DM)志愿者進行資料采集，其中氣陰兩虛型89例，男性43例，女性46例。由專業(yè)醫(yī)護人員測量志愿者的身高、體質(zhì)量、腰圍、臀圍，其單位分別是cm、kg、cm、cm。

1.1.1 診斷標準 體質(zhì)指數(shù)(BMI)<18.5 kg/m2為體重過低，24 kg/m2≤ BMI<28 kg/m2為超重，BMI ≥ 28 kg/m2為肥胖(標準參照《成人體重判斷》)；收縮壓(SBP)≥140 mmHg和舒張壓(DBP)≥90 mmHg為高血壓(標準參照《中國高血壓防治指南》)；總膽固醇(TC)≥ 6.2 mmol/L、甘油三酯(TG)≥2.3 mmol/L，滿足以上1種即判為血脂異常(標準參照《中國成人血脂異常防治指南》)；空腹血糖(FBG)≥7.0 mmol/L或餐后2 h血糖>11.0 mmol/L為糖尿病(參照《中國糖尿病診療標準》)。

1.1.2 中醫(yī)辨證分型標準 參照周仲英主編普通高等教育“十五”國家級規(guī)劃教材《中醫(yī)內(nèi)科學》,進行中醫(yī)辨證分型，氣陰兩虛型：倦怠乏力，自汗盜汗，氣短懶言，口渴喜飲，五心煩熱，心悸失眠，渡赤便秘，舌紅少津，舌體胖大，苔薄或花剝，脈弦細或細數(shù)。

1.2方法

1.2.1 實驗試劑及儀器 AQC衍生試劑包(美國Waters公司),乙腈(色譜純，Sigma-Aldricl試劑公司),甲醇(色譜純，Sigma-Aldricl試劑公司),高效液相色譜儀(Waters e2695),熒光檢測器(Waters 2475),全自動生化分析儀(BS-120),離心機(Thermo，LEGEND MICRO21)。

1.2.2 氨基酸代謝性標志物 采用HPLC法檢測尿液中17種氨基酸含量，找到氨基酸代謝性標志物，2型糖尿病氣陰兩虛型患者尿液中氨基酸的特征性代謝物是賴氨酸(Lys)、蛋氨酸(Met)和異亮氨酸(Ile)。

1.2.3 尿樣處理 收集志愿者尿液，離心(10 min，4℃，12 000 r/min)，取上清液，過濾，加入70 μL Buffer和15 μL 2A，反復吸打，水浴(55℃，10 min),進樣10 μL進行HPLC色譜分析。

1.2.4 溶液的配制 在蛋白干預對氣陰兩虛型2型糖尿病大鼠的影響[7]的實驗研究中有氨基酸標準品儲備液的配制、衍生試劑制備、空白衍生試劑制備、標準物質(zhì)衍生化反應進行溶液配制方法的詳細描述。

1.2.5 生化指標的檢測 運用全自動生化分析儀檢測血清中空腹血糖(FBG)、葡萄糖、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、極低密度脂蛋白(VLDL)、血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平。

1.3統(tǒng)計學處理采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件，運用Pearson相關(guān)分析，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

Pearson相關(guān)性分析顯示，2型糖尿病氣陰兩虛型患者中，Met與BMI、TG呈顯著性正相關(guān)，與身高呈顯著性負相關(guān)(P<0.05)，Ile與BMI、WC、WHtR呈顯著性正相關(guān)(P<0.05)，Lys與BMI、DBP、FBG呈顯著性正相關(guān)(P<0.05)(表1)。

表1 2型糖尿病氣陰兩虛型Met、Ile、Lys與客觀指標的相關(guān)性

注:*P<0.05,**P<0.01。

3 結(jié)論

目前，全球DM患病率正呈快速上升趨勢，已成為世界上重要的公共健康問題之一[8]。其中T2DM起病較慢，多見于中老年人，偶見于幼兒，其發(fā)病與遺傳、體質(zhì)肥胖、年齡及生活方式等因素有著直接的關(guān)系[9-10]。在T2DM的治療和預防中，BMI、FBG是一個重要的參考指標，且BMI、FBG對T2DM的預測價值高于WC、TG和WHtR。肥胖和超重是T2DM的危險因素，積極控制體質(zhì)量和肥胖有利于T2DM的預防[11]。王家樂等[12]的研究表明，肥胖個體血漿游離氨基酸中丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸等氨基酸水平比正常個體高，且肥胖個體的BMI與苯丙氨酸、異亮氨酸密切相關(guān)。本課題組前期工作研究[13]發(fā)現(xiàn)2型糖尿病氣陰兩虛型的氨基酸代謝標志物有Ile、Lys和Met。

本研究結(jié)果顯示，2型糖尿病氣陰兩虛型患者尿液中Met與BMI、TG呈正相關(guān)，與身高呈負相關(guān)，Ile與BMI、WC、WHtR呈正相關(guān)，Lys與BMI、DBP、FBG呈正相關(guān)。高貝貝[3]研究發(fā)現(xiàn)2型糖尿病氣陰兩虛型患者尿中的Lys、Met、亮氨酸(Leu)與BMI具有顯著性正相關(guān)，Val、Lys與DBP呈顯著性正相關(guān)，本研究結(jié)果與之類似。必需氨基酸Met是構(gòu)成蛋白質(zhì)的一種含硫醚結(jié)構(gòu)的非極性脂肪族氨基酸，在機體生理功能和生化反應中起到不可替代的重要代謝與調(diào)控作用，如參與體內(nèi)膽堿的合成、DNA和蛋白質(zhì)的甲基化等過程，參與機體組織生理代謝活動[14-15]，故Met濃度的變化對身高、BMI、TG水平具有一定的影響。Lys為堿性必需氨基酸，占人體必需氨基酸的12.5%，由于谷物食品中的Lys含量甚低，且在加工過程中易被破壞而缺乏，故稱為第一限制性氨基酸[16]，具有增強胃液分泌、提高蛋白質(zhì)的利用率、增強造血機能等作用，如長期單純食用谷類食物，勢必會造成人體所需Lys的缺乏，從而導致食欲減退、新陳代謝紊亂、體內(nèi)生物酶活性降低、造血機能障礙等癥狀，以至發(fā)生貧血、浮腫、肌肉萎縮、體質(zhì)量下降和早衰等現(xiàn)象[17]，故Lys對體質(zhì)量、BMI、FBG水平具有顯著影響。Ile的作用包括與亮氨酸和纈氨酸一起合作修復肌肉，控制血糖，并給身體組織提供能量，它還提高生長激素的產(chǎn)量，并幫助燃燒內(nèi)臟脂肪，這些脂肪由于處于身體內(nèi)部，僅通過節(jié)食和鍛煉難以對它們產(chǎn)生有效作用[18]，故Ile與BMI、FBG具有很強的相關(guān)性。

由于2型糖尿病氣陰兩虛型患者尿液中的Ile、Met、Lys與身高、BMI、TG、WC、WHtR、DBP、FBG密切相關(guān)，因此控制好血糖、血壓、血脂、BMI等相關(guān)指標，可以提高2型糖尿病氣陰兩虛型患者的生存質(zhì)量，也對中醫(yī)辨證分型治療T2DM有一定的指導價值。