桑地更平丸對更年期高血壓大鼠降壓作用的藥效學研究

孟 瑤， 盧 軍， 楊曉迷， 郝 夢， 劉 怡， 姜 林,

(新疆醫(yī)科大學1中醫(yī)學院， 烏魯木齊 830011； 2第四臨床醫(yī)學院藥劑科， 烏魯木齊 830000)

更年期高血壓(Climacterichypertension)是指女性更年期出現(xiàn)血壓升高的情況，主要由于卵巢功能衰退，內(nèi)源性雌激素含量降低導致內(nèi)分泌失調(diào)，自主神經(jīng)功能紊亂引起血壓升高[1]。除了血壓升高外,臨床表現(xiàn)還伴有目眩耳鳴、頭暈頭痛、疲乏失眠、月經(jīng)周期不規(guī)律等[2]。目前主要的治療方法為服用降壓藥物伴雌激素替代療法，但常伴有子宮內(nèi)膜出血或乳腺增生等不良反應[3]。桑地更平丸為新疆醫(yī)科大學第四臨床醫(yī)學院院內(nèi)制劑，由桑椹、生地黃、羅布麻葉、當歸、酸棗仁、玫瑰花等藥材組成，具有補虛潤燥、平肝安神的功效[4]，臨床上多用于更年期高血壓的治療。本研究通過建立更年期高血壓大鼠模型，測定大鼠血清中氧化應激指標、一氧化氮(NO)含量以及內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)濃度，探討桑地更平丸在改善更年期高血壓方面的藥理機制，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1 儀器 MULTI-SKAN型酶標儀(美國Thermo Scientific公司)，TDZ5WSF型低速離心機(鹽城市凱特實驗儀器有限公司)，HC-3518型高速離心機(長沙高新技術產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)湘儀離心機儀器有限公司)，WELLWASH型洗板機(北京伯邁科技有限公司)，BL-420S型生物信號采集系統(tǒng)(成都泰盟軟件有限公司)。

1.1.2 試劑 大鼠血清丙二醛(MDA)測試盒(武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批號2018052)，大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批號20180510)，大鼠血清NO測試盒 (南京建成生物工程研究所，批號20180508)，大鼠血清內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)試劑盒 (武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批號XWK68G9E)，大鼠雌激素試劑盒(武漢華美生物工程有限公司，批號CSB-E07279r)。

1.1.3 藥物 桑地更平丸由新疆醫(yī)科大學第四臨床醫(yī)學院藥劑科自制，纈沙坦膠囊(北京諾華制藥有限公司，批號 X2279)。

1.1.4 動物 雌性SD大鼠40只，體質(zhì)量(200±20) g，由新疆維吾爾自治區(qū)疾病預防控制中心提供[許可證號：SCXK(新)2016-0001]。

1.2方法

1.2.1 藥物制備方法 稱取桑地更平丸，分別配制成濃度為1.08、0.54 g/mL的水溶液；稱取纈沙坦膠囊，配制成濃度為0.001 66 g/mL的水溶液，備用。

1.2.2 模型建立及給藥方法

1.2.2.1 大鼠更年期高血壓模型的建立 隨機抽取32只雌性SD大鼠腹腔注射10%水合氯醛(0.3 mL/100 g體質(zhì)量)進行麻醉，將大鼠腹部絨毛剃除，用碘液對皮膚進行消毒，沿腹部中線將大鼠腹部剖開，用鑷子將腹中組織移開，找出左腎動脈并將其單獨分離，將尖端磨平的4.5號針頭平行放置左腎動脈旁，用4號手術縫合線扎緊后抽出針頭，造成大鼠單側(cè)腎動脈狹窄。找到位于大鼠腰椎兩側(cè)腎后方的卵巢，用4號手術縫合線將卵巢下輸卵管結(jié)扎，切除卵巢，同法切除另一側(cè)卵巢，將組織放回大鼠腹中，逐層進行縫合，最后腹腔注射青霉素鈉40萬單位。大鼠術后正常飲食進水，連續(xù)3 d腹腔注射青霉素鈉40萬單位，觀察動物狀態(tài)，防止傷口感染[5-6]。

1.2.2.2 大鼠的分組及給藥方法 將建模成功的32只大鼠隨機分為陽性組(纈沙坦膠囊，0.008 3 g/kg體質(zhì)量)、模型組(蒸餾水，10.0 mL/kg體質(zhì)量)、桑地更平丸高、低劑量組(10.8、5.4 g/kg體質(zhì)量)，剩余8只大鼠為空白組(蒸餾水，10.0 mL/kg體質(zhì)量)，連續(xù)灌胃8 w。

1.2.3 指標測定

1.2.3.1 血壓測定 稱取大鼠體質(zhì)量，用10%水合氯醛(0.3 mL/100 g體質(zhì)量)對大鼠進行腹腔注射麻醉，仰臥固定在鼠板上，剔除頸部絨毛，將頸部縱向剖開，分離大鼠頸動脈，分離長度為1.0～1.5 cm，將靠近頭部一端的動脈結(jié)扎，行頸總動脈插管術，用BL-420s生物信號采集系統(tǒng)測定各組大鼠血壓值。

1.2.3.2 血清中雌激素、eNOS、NO、SOD、MDA的測定 大鼠腹主動脈取血，4 000 r/min離心10 min,分離血清，置于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆茫丛噭┖姓f明書操作測定各組大鼠血清中雌激素、eNOS、NO、SOD和MDA的濃度。

2 結(jié)果

2.1各組大鼠血壓值的變化情況與空白組比較，模型組大鼠收縮壓和舒張壓均明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；與模型組比較，桑地更平丸高、低劑量組和陽性組大鼠收縮壓與舒張壓均降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05～0.01)，見表1。

表1 各組大鼠血壓值的變化情況

注：與空白組比較，△△P<0.01； 與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.2各組大鼠血清雌激素含量的變化情況與空白組比較，模型組大鼠血清雌激素含量降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與模型組比較，桑地更平丸高、低劑量組大鼠血清雌激素含量均升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 各組大鼠血清雌激素含量的變化情況

注： 與空白組比較，△P<0.05； 與模型組比較，*P<0.05。

2.3各組大鼠血清eNOS濃度和NO含量的變化情況與空白組比較，模型組大鼠血清eNOS濃度下降，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；NO含量下降，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與模型組比較，陽性組、桑地更平丸高劑量組大鼠血清eNOS濃度和NO含量均升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05～0.01)；桑地更平丸低劑量組大鼠血清NO含量升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，eNOS濃度升高，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表3。

表3 各組大鼠血清eNOS濃度和NO含量的

注：與空白組比較，△△P<0.01； 與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.4各組大鼠血清SOD和MDA濃度的變化情況與空白組比較，模型組大鼠血清SOD、MDA濃度均升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；與模型組比較，陽性組、桑地更平丸高、低劑量組大鼠血清SOD、MDA濃度有所降低，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表4。

表4 各組大鼠血清SOD和MDA濃度的

注：與空白組比較，△△P<0.01 。

3 討論

更年期高血壓主要指女性患者同時伴有更年期綜合征和高血壓癥狀，其主要臨床表現(xiàn)為自主神經(jīng)功能紊亂癥候群與促性腺激素分泌增多等[7]。雌激素(Estrongen)主要由雄激素經(jīng)過芳香化酶催化并由卵巢產(chǎn)生，是人體內(nèi)常見的甾體類固醇激素。女性絕經(jīng)后雌激素的缺乏使得雌激素對心血管保護作用減弱，這被認為是絕經(jīng)期女性患高血壓風險升高的主要原因[8-9]。且雌激素具有抗氧化作用，而雌激素的缺乏，可導致氧化活性氧簇(ROS)增多，從而引起血管收縮，造成高血壓發(fā)病[10]；雌激素還可與雌激素受體結(jié)合通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控激活 eNOS 基因的表達，使 eNOS 活性或蛋白表達增加，進而促進 NO 釋放，有快速舒張血管的作用[11-12]。

本實驗通過觀察桑地更平丸的降壓療效，進而探討桑地更平丸改善更年期高血壓的藥理機制。結(jié)果顯示,經(jīng)桑地更平丸治療后，更年期高血壓大鼠的血壓有明顯降低，雌激素分泌較治療前增多，eNOS與NO的濃度也有不同程度的升高，但對SOD和MDA的影響不大。由實驗結(jié)果表明，桑地更平丸對更年期高血壓有一定的降壓作用，還可能對去勢高血壓大鼠體內(nèi)雌激素含量失衡的狀況有所改善，同時伴有eNOS、NO不同程度的增高，提示桑地更平丸藥效的發(fā)揮可能通過雌激素改善eNOS/NO信號，快速激活eNOS的表達，從而誘導內(nèi)皮細胞釋放NO，舒張血管保護內(nèi)皮。在氧化應激方面，桑地更平丸對其影響不明顯,表明本方對更年期高血壓大鼠氧化應激損傷并未起到一定的改善作用。

綜上所述，桑地更平丸具有一定降低更年期高血壓的作用，其降壓機制可能與增加雌激素分泌，并使NO的生成增多有關。動物實驗的結(jié)果為桑地更平丸的新藥開發(fā)提供了一定的研究基礎。