金匱腎氣總苷中馬錢苷吸收及代謝動(dòng)力學(xué)過程＊

孫向明，宋 輝，胡 揚(yáng)，丁晶鑫，李文蘭＊＊

（1.哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院 哈爾濱 150076；2.哈爾濱商業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與環(huán)境科學(xué)研究中心 哈爾濱 150076）

金匱腎氣丸是張仲景《金匱要略》中的經(jīng)典名方[1]，該處方由熟地黃、山茱萸、山藥、澤瀉、茯苓、牡丹皮、肉桂、附子（制）八藥味組成，具有溫補(bǔ)腎陽，化氣行水之功效。時(shí)至今日仍被廣泛運(yùn)用于腎虛水腫，腰膝酸軟，小便不利，畏寒肢冷。臨床上用于治療多種疾病，尤其是治療腎陽虛以及由男性更年期綜合征引發(fā)的一些病癥[2-6]。前期實(shí)驗(yàn)表明，金匱腎氣總苷類成分能顯著增加腎陽虛型大鼠血清睪酮含量，提高SOD活性，降低MDA水平，是提高雄性大鼠性激素及抗衰老的主要有效部位[7]。

口服給藥是中藥方劑最主要的用藥方式，決定藥用價(jià)值的首要環(huán)節(jié)就是藥物吸收的程度和速度。對(duì)復(fù)方潛在效應(yīng)物質(zhì)中主要成分進(jìn)行代謝動(dòng)力學(xué)研究，可有效評(píng)價(jià)潛在效應(yīng)物質(zhì)在體內(nèi)的吸收、分布、代謝、排泄過程，具有整體、綜合、動(dòng)態(tài)和定量的特點(diǎn)，為設(shè)計(jì)和優(yōu)化給藥方案、保證臨床用藥的安全性和有效性和指導(dǎo)中藥新藥的開發(fā)設(shè)計(jì)等方面都具有重要意義。馬錢苷是金匱腎氣丸組方中山茱萸的有效成分，具有明顯的抗炎、調(diào)節(jié)免疫、抗休克、強(qiáng)心等作用[8-10]，在金匱腎氣總苷中的量約占7.25%[11]。鑒于馬錢苷具有較強(qiáng)藥理活性和藥用價(jià)值，是總苷中含量較高的成分，且性質(zhì)比較穩(wěn)定，以原型成分入血發(fā)揮作用[12]，本文將以馬錢苷作為金匱腎氣丸總苷有效部位的代表成分進(jìn)行腸吸收機(jī)制、影響因素以及藥代動(dòng)力學(xué)的研究。旨在揭示金匱腎氣總苷藥效物質(zhì)的體內(nèi)作用過程，以期提高總苷的生物利用度，為申報(bào)新藥、進(jìn)行臨床研究提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 試藥與儀器

所用藥材熟地黃、山藥、山茱萸、牡丹皮、澤瀉、茯苓、附子（制）、肉桂均購(gòu)于寶豐醫(yī)藥商業(yè)有限公司，并經(jīng)哈爾濱商業(yè)大學(xué)張德連教授鑒定；馬錢苷標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所（含量＞98%，批號(hào)：111640-200502）（圖1）；酚紅購(gòu)自上海研一生物科技有限公司（批號(hào)：20050602）；甲醇、乙腈、冰醋酸為色譜純，其他試劑為分析純，水為雙蒸水；Waters高效液相色譜儀（W2695泵、W2996DAD檢測(cè)器）；751型紫外可見分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）；DZK-2電熱恒溫振蕩水槽（上海邁捷實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；TDL80-2B高速離心機(jī)（上海宇工機(jī)械有限公司）；HL-2型恒流泵（上海嘉鵬科技有限公司）；Sartorius普及型pH酸度計(jì)PB-10（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；AR1140型電子天平（美國(guó)奧好斯科技有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性Wistar大鼠（220±20）g購(gòu)自長(zhǎng)春國(guó)家生物產(chǎn)業(yè)基地實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：SCXK-（吉）2003-0004。實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，自由飲水。

2 方法

2.1 總苷中馬錢苷的在體腸吸收研究

2.1.1 總苷的制備

金匱腎氣總苷由實(shí)驗(yàn)室制得：按處方比例精密稱取藥材，加入14倍量體積分?jǐn)?shù)為58%的乙醇，回流提取3次，每次180 min，減壓回收乙醇，采用紫外-可見分光光度計(jì)法進(jìn)行總苷含量測(cè)定[11]，以馬錢苷計(jì)乙醇提取物中總苷的含量為3.42%，加適量蒸餾水稀釋成生藥質(zhì)量濃度為0.25 g·mL-1的藥液，以稀鹽酸調(diào)pH=6，上D-101型大孔吸附樹脂柱充分吸附后，用30 BV、pH=8的70%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，干燥得總苷，總苷（以馬錢苷計(jì)）占總洗脫物的43.87%。

2.1.2 溶液的制備

緩沖液：精密稱取 NaCl6.87 g，KCl0.4 g，NaHCO32.2 g，NaH2PO40.13 g，MgSO40.122 g，CaCl20.25 g，葡萄糖5 g置1 000 mL容量瓶中，加適量蒸餾水超聲溶解，補(bǔ)足蒸餾水定容至刻度，作為循環(huán)液備用。

酚紅系列標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取酚紅適量，緩沖液稀釋成質(zhì)量濃度為100 mg·L-1的儲(chǔ)備液備用，分別精密吸取酚紅儲(chǔ)備液適量，用緩沖液稀釋成質(zhì)量濃度為10、20、30、40、50 mg·L-1的酚紅系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，置冰箱4℃冷藏，備用。

圖1 馬錢苷結(jié)構(gòu)式

圖2 馬錢苷及酚紅溶液的紫外吸收光譜圖（1-馬錢苷2-酚紅）

總苷供試品溶液：稱取不同量的總苷浸膏，將其溶于20 mg·L-1的酚紅溶液中，以3 000 r·min-1轉(zhuǎn)速離心5 min，取上清液，制得低（含總苷0.17 mg·mL-1）、中（含總苷0.51 mg·mL-1）、高（含總苷1.87 mg·mL-1）3種質(zhì)量濃度的總苷供試品溶液。

2.1.3 酚紅檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇及標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

用緩沖液將酚紅和馬錢苷標(biāo)準(zhǔn)品配成適當(dāng)濃度，掃描其紫外吸收光譜圖，掃描波長(zhǎng)范圍為200-600 nm。酚紅的最大吸收波長(zhǎng)在558 nm處，馬錢苷在此處幾乎沒有吸收（圖2）。因此，確定酚紅的檢測(cè)波長(zhǎng)為558 nm。精密吸取酚紅系列標(biāo)準(zhǔn)溶液各0.5 mL，分別加入NaOH溶液（摩爾濃度為0.20 mol·L-1）5.0 mL，搖勻，在酚紅的最佳檢測(cè)波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以酚紅質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到酚紅的線性回歸線方程為 Y=0.018X+0.042 9，R=0.999 9，（n=5）。表明酚紅在10-50 mg·L-1內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.4 色譜條件

色譜 柱：Symmetry C18柱（3.9 mm × 150 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.1%冰醋酸水溶液-甲醇（80∶20）；柱溫：30℃；流速：0.8 mL·min-1。檢測(cè)波長(zhǎng)為237 nm。

2.1.5 馬錢苷標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

圖3 馬錢苷標(biāo)準(zhǔn)品（A）、總苷供試品（B）及空白循環(huán)液（C）的液相色譜圖

精密稱取馬錢苷標(biāo)準(zhǔn)品2.0 mg置10 mL容量瓶中，用緩沖液稀釋定容，作為馬錢苷儲(chǔ)備液。再取適量?jī)?chǔ)備液，分別稀釋成質(zhì)量濃度為0.10、0.08、0.04，0.02、0.01 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。用0.45 μm微孔濾膜過濾后，在2.1.4項(xiàng)下的色譜條件下進(jìn)樣10 μL，記錄馬錢苷的峰面積，以峰面積對(duì)質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，得到線性方程為：Y=2×106X-41 688,R=0.999 8，（n=3）。表明馬錢苷在0.01-0.10 mg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.6 方法學(xué)考察

馬錢苷的專屬性實(shí)驗(yàn)：在2.1.3項(xiàng)下的色譜條件下，馬錢苷的保留時(shí)間為10.66 min，空白循環(huán)液在該位置無干擾峰（圖3），總苷的色譜圖中在同一保留時(shí)間可見馬錢苷的峰，且與其他組分達(dá)到基線分離，分離度大于1.5，理論塔板數(shù)按馬錢苷峰計(jì)不低于5 000。

精密度實(shí)驗(yàn)：精密吸取質(zhì)量濃度為0.04 mg·mL-1的馬錢苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液，過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，計(jì)算峰面積的RSD值為0.17%，小于2%，精密度良好。

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取質(zhì)量濃度為0.20 mg·mL-1的馬錢苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別于0、6、12、18、24、30 h取樣，計(jì)算峰面積的RSD值為0.74%，小于2%，表明30 h內(nèi)馬錢苷穩(wěn)定性良好。

回收率實(shí)驗(yàn)：取已知含量的樣品溶液3份，分別加入不同體積質(zhì)量濃度為0.04 mg·mL-1的馬錢苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液，使加入馬錢苷的量達(dá)到樣品中馬錢苷含量的80%、100%、120%，測(cè)定樣品中馬錢苷的量，馬錢苷平均回收率為99.62%，RSD值為1.09%，小于2%，表明該方法的準(zhǔn)確度良好，滿足測(cè)定要求。

2.1.7 大鼠在體腸吸收實(shí)驗(yàn)[13,14]

將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為11組：總苷低、中、高劑量組（含馬錢苷質(zhì)量濃度分別為 0.01 mg·mL-1、0.03 mg·mL-1、0.11 mg·mL-1）；循環(huán)液pH值6、7、8組（含馬錢苷質(zhì)量濃度均為0.01 mg·mL-1）；十二指腸、空腸、回腸組（含馬錢苷質(zhì)量濃度為0.01 mg·mL-1）；P-gp誘導(dǎo)劑利福平組和P-gp抑制劑維拉帕米組（含馬錢苷質(zhì)量濃度為0.01 mg·mL-1，含利福平或維拉帕米質(zhì)量濃度為0.10 mg·mL-1）。將大鼠禁食不禁水12 h，用10%水合氯醛腹腔注射麻醉（0.003 mL·g-1），固定，置加熱器上隨時(shí)調(diào)溫以保持體溫。沿腹腔中線打開腹腔，結(jié)扎膽總管，并分離出所需腸段，于切口處插管（出液口插管約3 cm），結(jié)扎。首先用適量的生理鹽水將小腸內(nèi)容物沖洗干凈，然后用預(yù)熱至37℃的循環(huán)液以5 mL·min-1的速度恒定流速平衡10 min，再以空氣排凈，將傷口用浸有生理鹽水的脫脂棉覆蓋保濕，于紅外燈下保持大鼠體溫。各組循環(huán)液30 mL保持（37±5）℃恒溫，以5 mL·min-1循環(huán)10 min后，記為0時(shí)，后循環(huán)液以1 mL·min-1的流速循環(huán)160 min。分別于 20、40、60、80、100、120，140、160 min時(shí)取循環(huán)液2 mL，用微孔濾膜過濾后，取濾液1 mL進(jìn)樣，測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)循環(huán)液中馬錢苷的量。同時(shí)，取0.5 mL濾液測(cè)定酚紅的量，同時(shí)補(bǔ)加2 mL酚紅溶液。最后將大鼠處死，剪下被灌流腸段，測(cè)量腸內(nèi)徑及長(zhǎng)度。采用上述實(shí)驗(yàn)方法分別考察馬錢苷濃度、pH值、腸段及P-gp各因素對(duì)總苷中馬錢苷在體腸吸收的影響規(guī)律。以馬錢苷剩余藥量的對(duì)數(shù)值對(duì)取樣時(shí)間作線性回歸，由斜率求得吸收速率常數(shù)Ka，由剩余藥量可以求得藥物吸收量。采用SPSS18.0軟件對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，并進(jìn)行單因素方差分析。

2.2 總苷中馬錢苷的藥代動(dòng)力學(xué)研究

2.2.1 灌胃藥液的制備

取總苷浸膏適量，用蒸餾水制成低、中、高濃度的總苷灌胃液，濃度分別為：0.17 g·mL-1（馬錢苷濃度10 mg·mL-1），0.26 g·mL-1（馬錢苷濃度15 mg·mL-1），0.35 g·mL-1（馬錢苷濃度20 mg·mL-1）。取高濃度的總苷灌胃液，加入適量維拉帕米，使其終濃度為1 mg·mL-1，作為維拉帕米+總苷組的灌胃藥液。

2.2.2 色譜條件

色譜柱：Symmetry C18(150 mm×3.90 mm，5 μm)，柱溫：30℃，流速1 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為237 nm。流動(dòng)相條件：乙腈：1%醋酸水（8∶92）。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取馬錢苷對(duì)照品0.84 mg，以甲醇溶解并定容至50 mL，配制成16 800 ng·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，分別精密吸取馬錢苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 50、200、500、750、2 500、4 750、6 250 μL，以甲醇梯度稀釋并定容至10 mL，制備成質(zhì)量濃度為84、336、840、1 260、4 200、7 980、10 500 ng·mL-1的系列溶液，精密吸取系列溶液200 μL，加至離心管中，揮干，加入大鼠空白血漿200 μL，混勻振蕩1 min，加入100 μL 6%高氯酸沉淀蛋白，于混勻振蕩器上振蕩1 min，以14 000 r·min-1轉(zhuǎn)速離心15 min，在2.2.2項(xiàng)下的色譜條件下取上清液50 μL進(jìn)樣分析。以測(cè)定的峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，馬錢苷濃度（X，ng·mL-1）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。馬錢苷血藥濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y=63.979X-4 661.2，R=0.999 7，線性范圍84～10 500 ng·mL-1。在此色譜條件下，測(cè)得馬錢苷的最低檢測(cè)濃度為78 ng·mL-1。

2.2.4 方法學(xué)考察

專屬性實(shí)驗(yàn)：取空白血漿、給藥后的血漿以及加入適量馬錢苷的血漿各200 μL，按2.2.3項(xiàng)下“振蕩1 min”之后的步驟處理并進(jìn)樣分析，色譜（圖4）（1號(hào)峰馬錢苷的保留時(shí)間為9.58 min），經(jīng)比較可知血漿中的內(nèi)源性雜質(zhì)與總苷內(nèi)的其他成分對(duì)馬錢苷的測(cè)定沒有干擾。說明本法具有較高的專屬性。

精密度、穩(wěn)定性及回收率實(shí)驗(yàn)：在一日或日間（3天）不同時(shí)間點(diǎn)，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作配制馬錢苷高（接近標(biāo)準(zhǔn)曲線上限）、中、低（接近最低檢測(cè)限）三個(gè)濃度的血漿溶液，每個(gè)濃度5份，按2.2.3項(xiàng)下“振蕩1 min”之后的步驟操作。測(cè)得馬錢苷的日內(nèi)精密度RSD值為3.56%，日間精密度RSD值為4.58%（n=5），5 h內(nèi)的穩(wěn)定性RSD值為5.86%。總苷中馬錢苷的絕對(duì)回收率為88.93%，RSD值為2.75%；相對(duì)回收率為96.2%，RSD值為3.73%。上述數(shù)據(jù)結(jié)果表明樣品穩(wěn)定性良好，實(shí)驗(yàn)所采用的方法精密度、回收率均符合生物樣品的檢測(cè)要求。

圖4 馬錢苷標(biāo)準(zhǔn)品血漿（A）、總苷給藥后血漿（B）及空白血漿（C）的液相色譜圖

2.2.5 藥代動(dòng)力學(xué)研究

Wistar大鼠禁食12 h，以各劑量組要求按10 mL·kg-1灌胃給藥，分別于給藥后10、20、30、45、60、90、120、180、240、360 min由眼眶靜脈叢取血0.5 mL，置肝素化的離心管內(nèi)，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)約1 min，以3 000 r·min-1轉(zhuǎn)速離心10 min，取上清液，于-20℃凍存。將凍存血漿取出置于4℃下緩慢解凍，取200 μL血漿，按2.2.3項(xiàng)下“振蕩1 min”之后的步驟處理并進(jìn)樣分析。

3 結(jié)果與分析

3.1 總苷中馬錢苷在體腸吸收研究

3.1.1 濃度對(duì)總苷中馬錢苷吸收的影響

腸道的平均pH值為7.4，故在循環(huán)液pH值為7.4生理?xiàng)l件下，采用全腸段循環(huán)灌流法，考察藥物低（含馬錢苷0.01 mg·mL-1）、中（含馬錢苷0.03 mg·mL-1）、高（含馬錢苷0.11 mg·mL-1）3個(gè)質(zhì)量濃度時(shí)總苷中馬錢苷的吸收規(guī)律。數(shù)據(jù)（表1）。

經(jīng)線性回歸統(tǒng)計(jì)，馬錢苷的吸收量對(duì)質(zhì)量濃度的回歸方程為：Y=652.32X-5.653 2（R=0.999 3），表明馬錢苷在0.01-0.11 mg·mL-1范圍內(nèi)，各濃度的吸收量與藥物濃度呈良好線性關(guān)系。經(jīng)方差分析，吸收速率常數(shù)無顯著性差異（P＞0.05），符合線性一級(jí)動(dòng)力學(xué)過程，提示馬錢苷在該范圍內(nèi)的吸收過程為被動(dòng)擴(kuò)散過程。

表1 金匱腎氣總苷中馬錢苷的吸收量及吸收速率（n=5）

表2 不同pH值下總苷中馬錢苷的吸收量及吸收速率（n=5）

表3 不同腸段總苷中馬錢苷的吸收量及吸收速率（n=5）

表4 利福平及維拉帕米對(duì)總苷中馬錢苷吸收量及吸收速率的影響（n=5）

圖5 灌胃3個(gè)劑量總苷后馬錢苷血藥濃度-時(shí)間曲線圖

3.1.2 pH值對(duì)總苷中馬錢苷吸收的影響

用稀鹽酸和稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)總苷樣品溶液（含馬錢苷質(zhì)量濃度為0.01 mg·mL-1）的pH值分別為6、7、8，全腸段循環(huán)灌流，考察循環(huán)液的pH值對(duì)馬錢苷的吸收量及吸收速率影響的情況（表2）。

總苷中馬錢苷的吸收量及吸收速率在循環(huán)液的pH值為6-8范圍內(nèi)無顯著性差異（P＞0.05）。表明馬錢苷的吸收不受環(huán)境酸堿度的影響，符合苷類成分的特征（表2）。

3.1.3 腸段對(duì)總苷中馬錢苷吸收的影響

結(jié)扎所需腸段：十二指腸段自幽門1 cm處開始，空腸段自幽門15 cm處開始，回腸段為盲腸上行20 cm處開始，各段均向下取約10 cm，取pH=7.4的總苷樣品溶液（含馬錢苷質(zhì)量濃度為0.01 mg·mL-1），應(yīng)用分腸段灌流法[15]考察總苷中馬錢苷在各個(gè)腸段的吸收情況（表3）。

結(jié)合表3分析可知：總苷中馬錢苷在十二指腸腸段的吸收明顯優(yōu)于空腸及回腸腸段（P＜0.05），而后兩者無顯著性差異（P＞0.05）。

3.1.4 P-糖蛋白（P-gp）對(duì)總苷中馬錢苷吸收的影響

取pH=7.4的總苷樣品溶液（含馬錢苷質(zhì)量濃度為0.01 mg·mL-1，含利福平或維拉帕米質(zhì)量濃度為0.10 mg·mL-1）為循環(huán)液，考察總苷中馬錢苷在與P-gp誘導(dǎo)劑或抑制劑合用時(shí)與單獨(dú)用藥時(shí)吸收情況的差異（表4）。

利福平與維拉帕米分別作為P-gp的誘導(dǎo)劑與抑制劑，結(jié)合（表4）中數(shù)據(jù)分析可知：利福平組馬錢苷的吸收量及吸收速率較對(duì)照組有顯著降低（P＜0.01），維拉帕米組馬錢苷的吸收量及吸收速率較對(duì)照組有顯著升高（P＜0.01)），即與馬錢苷合用時(shí)分別呈現(xiàn)出對(duì)藥物吸收的抑制和促進(jìn)作用。

3.2 總苷中馬錢苷的藥代動(dòng)力學(xué)研究

大鼠灌胃給予3個(gè)劑量總苷及維拉帕米+總苷后，按2.2.5項(xiàng)下方法實(shí)驗(yàn)，采用3P97程序進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，經(jīng)模型擬合，確定馬錢苷最佳模型為一室開放模型，得到馬錢苷在大鼠血漿中的藥時(shí)曲線（圖5）所示，各組主要的代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)（表5）。

根據(jù)表5的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，總苷低劑量組馬錢苷Cmax為 3 556.9 ng·mL-1，藥時(shí)曲線下面積（AUC0-∞）為0.35 mg·min·mL-1，相比之下，中劑量組Cmax提高了1.48倍，AUC0-∞提高了2.06倍；高劑量組Cmax提高了2.04倍，AUC0-∞提高了2.15倍，表明各劑量組馬錢苷的藥動(dòng)學(xué)行為成線性關(guān)系。經(jīng)模型擬合，以AIC值最小原則結(jié)合相關(guān)指數(shù)、相關(guān)系數(shù)等指標(biāo)確定總苷中馬錢苷的最佳模型為一室開放模型。經(jīng)SPSS軟件驗(yàn)證，各劑量組間主要?jiǎng)恿W(xué)參數(shù)無顯著性差異，Ka為0.04 min-1，Ke為 0.01 min-1，T1/2Ke為 81 min，Tmax為 54 min。以低劑量組各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)分析可知：馬錢苷吸收入血較快，52 min即可達(dá)到最大血藥濃度Cmax3 556.9 ng·mL-1，以一室開放模型在體內(nèi)分布，T1/2Ke為 85 min，CL/f（s）為0.34 L·min-1·kg-1，表明馬錢苷在大鼠體內(nèi)消除較快。

表5 金匱腎氣總苷中馬錢苷的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（n=5）

總苷高劑量組Ka為0.04 min-1，Ke為0.01min-1，Tmax為52 min，T1/2Ke為78 min，Cmax為7 271.4 ng·mL-1，而與維拉帕米合用后，Ka為0.08 min-1，Ke為0.01 min-1，Tmax為 35 min，T1/2Ke為 85 min，Cmax為 10 443.1 ng·mL-1，AUC0-∞增加了0.7倍，經(jīng)SPSS軟件驗(yàn)證，維拉帕米對(duì)總苷中馬錢苷的Tmax、Cmax、Ka、AUC0-∞等藥動(dòng)學(xué)行為有顯著影響（P＜0.05）。尤其是吸收過程，可顯著增加馬錢苷的吸收速率和吸收量，提高了馬錢苷的吸收速度和生物利用度，從藥動(dòng)學(xué)的角度驗(yàn)證了馬錢苷在大鼠體內(nèi)的吸收過程受到P-gp外排作用的影響。

4 討論

在腸吸收的過程中，不僅藥物會(huì)被吸收，水分也會(huì)被吸收，使循環(huán)液體積減少，致使無法通過測(cè)定藥物質(zhì)量濃度來計(jì)算藥物的剩余量。而酚紅在小腸內(nèi)幾乎不被吸收，可用于標(biāo)定循環(huán)液的體積[16]。因此，本實(shí)驗(yàn)中向循環(huán)液中加入已知量的酚紅，通過測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)的酚紅的質(zhì)量濃度，推算循環(huán)液的實(shí)際體積，從而準(zhǔn)確的計(jì)算剩余馬錢苷的量。

維拉帕米是P-gp的抑制劑，與金匱腎氣總苷合用后，能顯著升高總苷中馬錢苷的吸收量及吸收速率，呈現(xiàn)出對(duì)藥物吸收的促進(jìn)作用。在藥動(dòng)學(xué)研究中，合用維拉帕米后，Tmax、Cmax、Ka、AUC0-∞等參數(shù)均顯著增加，表明馬錢苷的吸收確實(shí)受P-gp的影響，提示在臨床用藥時(shí)可以與維拉帕米等抑制劑合用，以提高其生物利用度，增強(qiáng)藥物療效。在不同腸段吸收的研究中，總苷中馬錢苷在十二指腸腸段的吸收明顯優(yōu)于空腸及回腸腸段，提示總苷中馬錢苷吸收也具有位置選擇性，可制成控釋制劑以提高其藥效。由于總苷為金匱腎氣丸的有效部位，且療效顯著，今后更易于應(yīng)用于臨床，因此，可根據(jù)總苷中馬錢苷的吸收部位選擇性，通過控制其釋藥部位來提高總苷中馬錢苷的藥效。

山茱萸是金匱腎氣丸的組方藥味，通過查找相關(guān)文獻(xiàn)[17]，進(jìn)一步與山茱萸提取物中馬錢苷的大鼠藥代動(dòng)力學(xué)比較發(fā)現(xiàn)：金匱腎氣總苷中和單味藥山茱萸中的馬錢苷的藥代動(dòng)力學(xué)模型均符合一室模型，山茱萸中馬錢苷的達(dá)峰時(shí)間為33.90 min，吸收半衰期為12.47 min，消除半衰期為52.45 min，而總苷中馬錢苷低劑量組的對(duì)應(yīng)參數(shù)分別為52.28 min、19.55 min、84.79 min，相比之下均略高于前者，提示馬錢苷在復(fù)方有效部位中的吸收和消除過程變緩，在體內(nèi)作用時(shí)間延長(zhǎng)，推測(cè)可能由于受到復(fù)方中其他藥味及成分的影響，表明中藥復(fù)方最終藥效的發(fā)揮是各藥物各成分之間的一種綜合作用和效應(yīng)。總體而言，馬錢苷在山茱萸和金匱腎氣總苷中的吸收和消除均較快。

依據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)和在體腸吸收機(jī)制研究，揭示了金匱腎氣總苷有效部位的ADME機(jī)制，充分證明BS總苷的吸收受到P-gp外排作用的影響。通過參考腸吸收動(dòng)力學(xué)及藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)，指導(dǎo)新藥的設(shè)計(jì)，正確地闡明藥物的劑型和生物因素與藥效的關(guān)系，以評(píng)價(jià)藥物制劑的質(zhì)量，設(shè)計(jì)合理的劑型，保證臨床用藥的安全性和有效性，以期開發(fā)出生物利用度高的有效制劑。