3種微柱凝膠抗人球蛋白試劑卡的檢測差異比較

楊 光，劉自強，吳艷紅，楊 靜，王 嵐

(四川省人民醫(yī)院輸血科，四川 成都 610031)

微柱凝膠抗人球蛋白技術現(xiàn)已普遍應用于臨床。但不同的試劑卡，由于生產(chǎn)廠家不同，操作步驟相異，造成靈敏度差異，導致試驗結(jié)果出現(xiàn)不一致。本研究選取A、B卡2種進口卡和國產(chǎn)C卡進行平行比對，討論其差異性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選取本院交叉配血次側(cè)不合住院病人標本97例。標本均為3 ml的EDTA- K2抗凝全血，3000 r/min 離心5 min，分離紅細胞和血漿，標本均無溶血、脂血、凝集，血清蛋白異常。

1.2 儀器及試劑 (1)試管法：抗人球蛋白試劑(上海血液醫(yī)藥有限公司)，恒溫水浴箱(天力醫(yī)療) 及Baso2005-1型離心機；(2)微柱凝膠法：A公司抗人球蛋白Liss/Coombs卡[A卡(批號：50531.02.05)]及其專用孵育器和離心機、 B公司抗人球蛋白Anti-IgG卡[B卡(批號：IGC623A)]及其專用孵育器和離心機、C公司抗人球蛋白Anti-IgG卡[C卡(批號：201511003)]及其專用孵育器和離心機。

1.3 陰陽性對照 (1)陽性對照細胞： 取3份正常人O型Rh(D)陽性紅細胞等量混勻，經(jīng)生理鹽水洗滌3次后取少量壓積紅細胞，加IgG抗D血清，置37 ℃水浴致敏30 min，取出后用生理鹽水洗滌3次，用低離子液配成5%紅細胞懸液，離心備用。(2)陰性對照細胞： 取3份正常人O型紅細胞等量混勻，經(jīng)生理鹽水洗滌后，用低離子液配成5%紅細胞懸液，離心備用。將質(zhì)控標本與檢測標本一起檢測，結(jié)果均在質(zhì)控范圍內(nèi)。

1.4 方法 (1)試管法：將1滴受檢者紅細胞加入干凈的小試管中，用鹽水洗滌后以1000 r/min離心1 min，洗滌3次后，將上清液全部倒出，用低離子液配成5%紅細胞懸液，取懸液1滴加入試管中，再加入抗人球蛋白血清1滴，搖勻，3000 r/min離心15 s觀察結(jié)果，陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集，鹽水管不凝集，則受檢管出現(xiàn)凝集為陽性，不凝集為陰性。(2)微柱凝膠法：將3種抗人球蛋白檢測卡分別標記A、B、C卡，用生理鹽水稀釋患者紅細胞到0. 8%濃度，分別加入50 μl于3種試劑卡中，將3種試劑卡分別放入對應的專用離心機中離心，B卡為5 min，A卡和C卡為15 min，取出觀察結(jié)果。試管法參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[1]，微柱凝膠法所有操作嚴格按照SOP及試劑說明書進行。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 3種試劑卡及試管法檢出率比較 3種試劑卡檢出率間比較有顯著性差異 (χ2=45.986，P<0.05)；試管法與A、B卡比較均無顯著性差異(P>0.05)；試管法與C卡比較存在顯著性差異(P<0.05)； A、B卡與C卡比較均存在顯著性差異(χ2=22.371、χ2=38.893，P<0.05)；但A、B卡比較無顯著性差異(P>0.05)。見表1。

表1 3種抗人球蛋白卡及試管法檢測的陰、陽性頻數(shù)及檢出率(例)

注：1)與C卡及試管法比較P<0.05

2.2 3種試劑卡不同凝集強度的頻數(shù)分布 C卡檢測較多為陰性；對于弱陽性標本(0.5+～1+)，凝集強度A卡>B卡>C卡；對于強陽性標本(2+～3+)，凝集強度B卡>A卡>C卡。檢測靈敏度B卡>A卡>C卡。見表2。

表2 3種試劑卡不同凝集強度的頻數(shù)分布(例)

2.3 3種試劑卡不同凝集強度的頻數(shù)對比 A、B卡檢測效力相同，而C卡檢測效果較弱。對于弱陽性標本，C卡較A、B卡大多檢測不出，漏檢率較高。3種卡檢測病人標本得到相同凝集強度的概率均較低， A卡與B卡為41.2%、A卡與C卡為48.4%、B卡與C卡為30.9%，差異性明顯。對于弱陽性標本，重合率A卡與B卡為33.9%、A卡與C卡為28.8%、B卡與C卡為6.9%；對于強陽性標本，重合率A卡與B卡為43.8%、A卡與C卡為64.5%、B卡與C卡為54.3%。見表3。

表3 3種試劑卡不同凝集強度的頻數(shù)對比(例)

3 討 論

微柱凝膠抗人球蛋白技術是一種改良抗人球蛋白試驗方法，與傳統(tǒng)試管法相比，簡化了操作步驟，縮短了孵育時間。有研究比較微柱凝膠卡與傳統(tǒng)方法對抗人球蛋白的篩選以及不規(guī)則抗體的檢測，認為微柱凝膠法對抗體敏感性更高，甚至可以檢測出傳統(tǒng)方法不能檢測出的抗體，更自動化、標準化。因此，微柱凝膠抗人球蛋白技術是一種簡便、快速、靈敏、準確的試驗方法[2]，且具有結(jié)果易于觀察、反應穩(wěn)定、易于保存、拍照長期保存等優(yōu)點[3-4]。 微柱凝膠技術于1994年獲得美國 FDA批準為免疫學檢測技術，歐美等發(fā)達國家已經(jīng)將微柱凝膠技術作為常規(guī)性的檢測技術在臨床廣泛推廣。目前，微柱凝膠技術在國內(nèi)已較多運用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配血及多種IgG類抗體的檢測中。

現(xiàn)階段，國內(nèi)較多使用進口A、B卡，而較少使用國產(chǎn)C卡[5-7]。本研究以試管法作為參照進行比較，發(fā)現(xiàn)3種試劑卡的檢出率有顯著性差異，再進行組間兩兩比較后發(fā)現(xiàn)，A、B卡與試管法之間無顯著性差異，而C卡檢出率顯著低于進口卡和試管法。

C卡對于進口卡檢測為陽性的標本檢出能力很低；在檢測弱陽性的標本時，出現(xiàn)進口卡檢測為弱陽性而C卡檢測為陰性、A卡與C卡檢測為弱陽性而B卡檢測為強陽性的情況；在檢測強陽性的標本時，出現(xiàn)進口卡檢測為強陽性而C卡檢測為弱陽性甚至陰性、C卡檢測為強陽性而A卡檢測為弱陽性的情況。3種試劑卡差異性較大。

綜上所述， 檢測靈敏度B卡>A卡>試管法>C卡，但容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果，對于已考慮存在弱抗原反應的樣本，首選靈敏度高的試劑卡鑒定，高效確保輸血安全；而C卡陽性檢測率和檢測靈敏度最低，容易出現(xiàn)假陰性結(jié)果，漏檢率較高，對輸血的安全性造成隱患，但不能以此否認其在輸血試驗中的運用價值；推薦臨床各實驗室使用B卡對患者標本進行輸血相容性檢測，輔以A卡與C卡進行比較和排異，既達到安全輸血的需要，又省時省力。不同廠家要建立共同的行業(yè)標準，實驗室之間建立標準化操作程序，再經(jīng)過長期大量臨床研究，建立起微柱凝膠抗人球蛋白技術在檢測上的“金標準”，讓該技術在輸血相容性檢測中更準確、有效和安全。