分子標(biāo)記輔助選育甘藍(lán)型油菜抗磺酰脲類除草劑恢復(fù)系

張超 胡茂龍 代文東 王軍 唐容 黃莎 楊克相 饒勇

摘?要：

選育抗磺酰脲類除草劑的甘藍(lán)型油菜波里馬細(xì)胞質(zhì)雄性不育（polima cytoplasmic male sterility，pol CMS）恢復(fù)系，為培育抗除草劑pol CMS“三系”雜交種打下基礎(chǔ)。以甘藍(lán)型油菜pol CMS恢復(fù)系2350C為母本與抗磺酰脲類除草劑油菜M342雜交，利用苯磺隆除草劑在F2分離群體中篩選抗性單株，采用分子標(biāo)記輔助選擇純合抗性植株并與pol CMS不育系測(cè)交，鑒定攜帶純合pol CMS恢復(fù)基因的單株，經(jīng)過(guò)多代自交成功選育了抗除草劑的pol CMS恢復(fù)系18Z363，利用18Z363配制的抗除草劑pol CMS“三系”組合中有1個(gè)比對(duì)照品種油研50增產(chǎn)3.85%、2個(gè)組合與對(duì)照產(chǎn)量持平，表明該恢復(fù)系具有一定的配制高產(chǎn)組合的潛力。

關(guān)鍵詞：

甘藍(lán)型油菜;磺酰脲類除草劑;波里馬細(xì)胞質(zhì)雄性不育;分子標(biāo)記輔助選擇;苯磺隆

中圖分類號(hào)：S565.4

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20191230014

油菜是重要的油料作物和經(jīng)濟(jì)作物之一，在我國(guó)廣泛種植[1];油菜生產(chǎn)易受雙子葉闊葉類雜草侵害[2]，防治難度較大，油菜生產(chǎn)因草害造成的減產(chǎn)嚴(yán)重[3];此外，受我國(guó)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的影響，農(nóng)村勞動(dòng)力缺乏，人工除草增加了勞動(dòng)力的投入，降低了油菜生產(chǎn)的效益，因此使用除草劑控制油菜田雜草優(yōu)勢(shì)明顯?；酋ｋ孱惓輨┚哂卸拘缘汀胨テ诙?、殘留少等優(yōu)點(diǎn)，在防治闊葉類雜草中應(yīng)用廣泛[4]，篩選、培育抗磺酰脲類除草劑的油菜品系已是當(dāng)前油菜育種的重要目標(biāo)之一[5]。波里馬細(xì)胞質(zhì)雄性不育（polima cytoplasmic male sterility，pol CMS）是第1個(gè)有實(shí)用價(jià)值的油菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育類型，已被廣泛應(yīng)用于油菜雜交種的配制[6]，而選育pol CMS恢復(fù)系是配制油菜“三系”品種的重要環(huán)節(jié)。因此，抗磺酰脲類除草劑的pol CMS恢復(fù)系的選育對(duì)培育抗除草劑油菜品種以解決我國(guó)油菜生產(chǎn)田間化學(xué)除草難題具有重要意義?；酋ｋ孱惓輨┲饕ㄟ^(guò)抑制植物乙酰乳酸合酶（Acetolactate synthase，ALS），使亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸等 3種支鏈氨基酸生物合成受阻，蛋白質(zhì)合成停止，最終導(dǎo)致植株死亡[7]，利用ALS基因突變可以創(chuàng)制抗磺酰脲類除草劑的種質(zhì)資源。在油菜中，加拿大學(xué)者率先報(bào)道了突變ALS基因獲得除草劑抗性材料[8];近年來(lái)，國(guó)內(nèi)對(duì)ALS為靶向的抗除草劑油菜也開(kāi)展了大量研究，高建芹等[9]在噴施除草劑的油菜-大豆輪作田里也發(fā)現(xiàn)了抗ALS抑制劑類除草劑的油菜自然突變資源M9，具有一定的實(shí)用價(jià)值;隨后江蘇省農(nóng)科院經(jīng)濟(jì)作物研究所采用EMS誘變油菜品系N131創(chuàng)制了多個(gè)抗除草劑的油菜資源[10， 11]。孫妍妍等[12]在篩選甘藍(lán)型油菜中雙9號(hào)EMS誘變庫(kù)時(shí)發(fā)現(xiàn)了抗苯磺隆的突變株，研究發(fā)現(xiàn)抗性植株ALS基因發(fā)生了突變，隨后研究者根據(jù)ALS基因突變位點(diǎn)成功設(shè)計(jì)了等位基因特異的引物，可以用來(lái)進(jìn)行分子標(biāo)記輔助選擇抗除草劑的轉(zhuǎn)育后代;Li等[13]在用苯磺隆進(jìn)行油菜化學(xué)殺雄配制雜交種過(guò)程發(fā)現(xiàn)了1個(gè)ALS基因突變的抗苯磺隆材料，根據(jù)ALS突變位點(diǎn)開(kāi)發(fā)的dCAPS標(biāo)記與苯磺隆抗性共分離;Hu等[14]采用EMS誘變獲得了具有實(shí)用價(jià)值的抗磺酰脲類除草劑油菜資源M342，隨后程麗等[15]等根據(jù)M342的ALS突變基因設(shè)計(jì)了CAPS標(biāo)記，在M342與不抗材料雜交后代分離群體中驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)該標(biāo)記可以有效區(qū)分純合抗性、雜合抗性和純合不抗除草劑的單株;這些研究為采用分子標(biāo)記輔助轉(zhuǎn)育抗磺酰脲類除草劑材料提供了重要參考。Pol CMS恢復(fù)系是配制pol CMS“三系”品種的關(guān)鍵，研究認(rèn)為油菜的pol CMS恢復(fù)基因是1對(duì)顯性主效基因[16]，可通過(guò)雜交來(lái)進(jìn)行恢復(fù)基因的轉(zhuǎn)移，通過(guò)與pol CMS不育系的測(cè)恢來(lái)篩選攜帶純合恢復(fù)基因轉(zhuǎn)育單株[17]，以創(chuàng)制不同遺傳背景的恢復(fù)系。

本研究利用M342為抗磺酰脲類除草劑基因來(lái)源，采用分子標(biāo)記輔助選擇，結(jié)合苯磺隆抗性鑒定、pol CMS測(cè)恢鑒定，快速獲得抗磺酰脲類除草劑的pol CMS恢復(fù)系，減少了工作量，加速了轉(zhuǎn)育進(jìn)程。

1?材料與方法

1.1?供試材料和試劑

1.1.1?實(shí)驗(yàn)材料

甘藍(lán)型油菜抗磺酰脲類除草劑種質(zhì)M342[14]由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所提供;pol CMS恢復(fù)系2350C[17]及pol CMS不育系J068A 、LDX370A、LDX374A、LDX380A、LDX414A、LDX422A、LDX6-18A、LDX82-11A、LDX92-11A、LDX95-58A、常規(guī)03A由貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院貴州省油料研究所提供;組合比較對(duì)照品種油研50（CK）由貴州省油菜研究所提供。

1.1.2?實(shí)驗(yàn)試劑

Ex Taq、dNTP、DNA Marker等購(gòu)自寶生物工程（大連）有限公司;Gold View核酸染料、瓊脂糖購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司;BsrD I（New England Biolabs）購(gòu)自NEB（北京）;苯磺隆（有效成分10%，可濕性粉劑）購(gòu)自安徽省圣丹生物化工有限公司;引物合成委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

1.2?DNA提取及除草劑抗性基因的分子標(biāo)記檢測(cè)

采用CTAB法提取甘藍(lán)型油菜轉(zhuǎn)育后代單株的葉片基因組DNA[18]，用于分子標(biāo)記輔助選擇;DNA提取后采用1.2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，用Nanodrop2000測(cè)定濃度;利用程麗等[15]公布的引物（M342 F：5-GTTTGCGAGCAGGGCTAAGA-3，M342 R：5-GACATCCAACAGGTACGGTCCA-3）和方法進(jìn)行抗磺酰脲類除草劑基因的轉(zhuǎn)育跟蹤：采用M342F+M342R引物用Ex Taq 進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物用BsrD I限制性內(nèi)切酶酶切，1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，攜帶純合除草劑抗性基因的單株電泳產(chǎn)物為766bp單一條帶，攜帶雜合除草劑抗性基因的單株電泳產(chǎn)物為766bp、570bp、196bp 3條條帶，而不抗除草劑單株為570bp、196bp 2條條帶。

1.3?實(shí)驗(yàn)材料田間種植

F2分離群體種植：按2m寬、10m長(zhǎng)廂面均勻撒播，3～6葉期噴施苯磺隆，噴施14d后選抗性單株按行長(zhǎng)2m、行距40cm、株距25cm移栽。轉(zhuǎn)育后代自交材料田間種植：行長(zhǎng)2m、行距40cm、每行按穴距25cm小穴點(diǎn)播3～5粒油菜種子，3～6葉期定苗，每穴留苗1株。測(cè)恢組合種植：行長(zhǎng)2m、行距40cm、每行按穴距25cm小穴點(diǎn)播3～5粒油菜種子，不勻苗，花期調(diào)查育性。pol CMS“三系”組合鑒定試驗(yàn)：設(shè)置5行1小區(qū)，隨機(jī)區(qū)組排列，3次重復(fù)，對(duì)照品種為油研50;行長(zhǎng)2m、行距40cm、每行按穴距25cm小穴點(diǎn)播3～5粒油菜種子，3～6葉期定苗，每穴留苗1株。

1.4?苯磺隆田間鑒定油菜除草劑抗性

幼苗3～6葉期，用苯磺?。ㄓ行С煞?0%，可濕性粉劑）稀釋成400mg/L工作藥液，按18 g.a.i/hm2的用量噴施，14d后調(diào)查死亡情況和受抑制情況。

1.5?抗除草劑pol CMS恢復(fù)系選育過(guò)程

2015年春選健壯的pol CMS恢復(fù)系2350C單株做母本，以M342為父本，人工去雄配制雜交組合，成熟后收獲F1雜交種，并于2015年5月種植于貴州省威寧縣麻乍鎮(zhèn)（緯度：N 26°64′，經(jīng)度：E 104°09′，海拔：2223.50m），套袋自交并于2015年9月底收獲自交種。2015年9月底在貴州省油料研究所貴陽(yáng)試驗(yàn)地種植F2分離群體，于2015年11月中旬幼苗3～6葉期噴施苯磺隆除草劑，不攜帶抗性基因的單株死亡淘汰;選擇健壯的存活單株用M342F+M342R引物進(jìn)行分子標(biāo)記輔助選擇，保留攜帶純合除草劑抗性基因的單株，在2016年春季花期套袋自交，并按單株取花粉與pol CMS不育系LDX95-58A進(jìn)行測(cè)交。2016年5月收獲單株自交種及測(cè)交組合到威寧進(jìn)行夏繁，開(kāi)花期調(diào)查測(cè)交組合的育性，淘汰部分植株不育、全不育及恢復(fù)度差的測(cè)交組合所對(duì)應(yīng)的F2單株，選全可育組合對(duì)應(yīng)的F2單株后代套袋自交。2016年9月收獲自交種后進(jìn)行品質(zhì)分析，篩選“雙低”單株繼續(xù)種植并套袋自交、夏繁、品質(zhì)分析，至F7代選整齊穩(wěn)定株系18Z363與pol CMS不育系測(cè)交及組合配制，2018年9月種植18Z363的F8株系及配制組合，進(jìn)行苯磺隆除草劑抗性鑒定及花期恢復(fù)性調(diào)查，確定18Z363為新選育的抗磺酰脲類除草劑pol CMS恢復(fù)系。

1.6?農(nóng)藝性狀調(diào)查

成熟期，自交系、組合比較試驗(yàn)各小區(qū)隨機(jī)取10株，采用常規(guī)方法考察株高、一次有效分枝高度、一次有效分枝數(shù)、主花序長(zhǎng)、主花序角果數(shù)、單株有效角果數(shù)，每株取1次分枝中部30個(gè)角果計(jì)算每角果粒數(shù)，單株脫粒測(cè)量單株籽粒產(chǎn)量并測(cè)量千粒重;采用FOSS NIR System近紅外分析儀（美國(guó)）進(jìn)行品質(zhì)分析;考種取樣后按小區(qū)收獲并測(cè)量小區(qū)產(chǎn)量。

1.7?數(shù)據(jù)處理

用Excel2013匯總整理數(shù)據(jù)，采用SPSS22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2?結(jié)果與分析

2.1?分子標(biāo)記輔助選擇選育抗除草劑pol CMS恢復(fù)系18Z363

用2350C與M342配制雜交組合，經(jīng)夏繁加代獲得F2分離群體，噴施苯磺隆后從F2分離群體中鑒定出抗除草劑單株213株，按單株提取葉片DNA，采用M342F+M342R引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物用BsrD I酶酶切后經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)可見(jiàn)（圖1）：抗苯磺隆除草劑材料M342僅在766bp處有特征條帶，pol CMS恢復(fù)系2350C和不育系LDX95-58A為不抗除草劑材料，電泳顯示有570bp、196bp 2條條帶（圖1B），而2350C與M342配制的F1帶型為766bp、570bp、196bp 3條條帶（圖1A），表明攜帶純合除草劑抗性基因的植株表現(xiàn)為僅在766bp處有1條特征條帶，攜帶雜合除草劑抗性基因帶型為766bp、570bp、196bp 3條條帶。根據(jù)分子標(biāo)記的帶型從F2抗除草劑單株中挑選出攜帶純合除草劑抗性基因單株67株，于2016年春套袋自交并按單株與pol CMS不育系LDX95-58A測(cè)交。

2016年5月收獲67份單株自交種和測(cè)交組合進(jìn)行夏繁，于盛花期鑒定測(cè)交組合的育性恢復(fù)情況發(fā)現(xiàn)，67份測(cè)交組合中有27個(gè)全不育、18個(gè)有不育/可育株分離、22個(gè)全可育，選擇22個(gè)全可育組合所對(duì)應(yīng)的F2單株后代套袋自交，收獲自交種113份，品質(zhì)分析篩選獲得芥酸<1%、硫甙<40μmoL/g、含油量>40%的單株17份，2016年10月種植篩選的17個(gè)單株自交種，衍生成17個(gè)株系并按生育期稍早、一次分枝多、株型緊湊、株高適中、芥酸<1%、硫甙<40μmoL/g、含油量>40%等標(biāo)準(zhǔn)定向選育到F7代，選擇綜合性狀優(yōu)良的株系18Z363與pol CMS不育系配制組合，發(fā)現(xiàn)該株系對(duì)pol CMS為全恢;噴施苯磺隆除草劑鑒定發(fā)現(xiàn)18Z363和抗磺酰脲類除草劑材料M342能夠正常生長(zhǎng)，而不抗除草劑材料2350C葉片發(fā)紅、發(fā)黃，逐漸死亡，表明抗磺酰脲類除草劑pol CMS恢復(fù)系18Z363選育成功。

2.2?18Z363的主要農(nóng)藝性狀

2019年5月初油菜成熟期，考察18Z363及親本2350C、M342的農(nóng)藝性狀可見(jiàn)（表1），選育的18Z363株高、主花序長(zhǎng)度、含油量及芥酸含量等性狀與親本2350C、M342差異不顯著;18Z363的分枝高度、一次有效分枝數(shù)及單株角果數(shù)介于兩親本之間;18Z363的主序角果數(shù)、主序結(jié)角密度、每角粒數(shù)及千粒重接近親本2350C，而硫代含量及單株產(chǎn)量接近親本M342;此外，經(jīng)過(guò)生育期的多代定向選擇，18Z363的生育期為220d，長(zhǎng)于2350C的213 d，短于M342的335 d。這些結(jié)果表明18Z363綜合了親本2350C、M342的部分優(yōu)良農(nóng)藝性狀。

2.3?抗除草劑pol CMS恢復(fù)系18Z363的組合配制

用18Z363與貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院貴州省油料研究所選育的11個(gè)優(yōu)良pol CMS不育系配制組合，苗期除草劑鑒定發(fā)現(xiàn)所有組合噴施苯磺隆除草劑后能夠存活，而對(duì)照品種油研50噴藥后14 d葉片發(fā)黃，逐漸死亡。采用分子標(biāo)記鑒定可見(jiàn)18Z363在766bp處有特征條帶，說(shuō)明18Z363攜帶純合的除草劑抗性基因（圖2A），而油研50及不育系顯示為570bp、196bp 2條帶，表明其不攜帶除草劑抗性基因;采用18Z363與11個(gè)優(yōu)良pol CMS不育系配制的組合有766bp、570bp及196bp 3條帶，說(shuō)明這些組合攜帶雜合的除草劑抗性基因（圖2B）。

成熟期考種發(fā)現(xiàn)（表2）：18Z363與J068A配制的組合小區(qū)產(chǎn)量最高，達(dá)到1.08±0.01kg/小區(qū)，比對(duì)照品種油研50增產(chǎn)3.85%，18Z363與LDX380A、LDX6-18A配制的組合產(chǎn)量與油研50基本持平，而18Z363與其他不育系配制的組合產(chǎn)量都顯著低于對(duì)照油研50，可見(jiàn)恢復(fù)系18Z363在配制優(yōu)勢(shì)雜交組合上具有一定的潛力;18Z363配制的11個(gè)組合與對(duì)照品種油研50的農(nóng)藝性狀考察發(fā)現(xiàn)，高產(chǎn)組合J068A×18Z363、LDX380A×18Z363、LDX6-18A×18Z363及對(duì)照油研50的一次分枝數(shù)、主花序較長(zhǎng)、主花序角果數(shù)、單株角果數(shù)、每角粒數(shù)及單株籽粒產(chǎn)量等性狀不同程度地高于低產(chǎn)組合LDX92-11A×18Z363、LDX374A×18Z363、LDX82-11A×18Z363。

3?討論

利用除草劑進(jìn)行油菜田的雜草防治，可以減少人工除草的勞動(dòng)力投入，提高油菜生產(chǎn)效益。由于我國(guó)尚未批準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因抗除草劑油菜品系的生產(chǎn)種植，導(dǎo)致我國(guó)抗除草劑種質(zhì)資源有限，近年來(lái)油菜抗除草劑種質(zhì)創(chuàng)新已經(jīng)成為油菜育種的重要目標(biāo)之一[9-14]，但目前可用于生產(chǎn)的非轉(zhuǎn)基因抗除草劑油菜雜交品種鮮有報(bào)道，因此，選育抗除草劑pol CMS恢復(fù)系對(duì)培育抗除草劑pol CMS“三系”品種具有重要的意義。

M342為江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所采用EMS誘變獲得的抗磺酰脲類除草劑種質(zhì)資源，其BnALS3基因序列發(fā)生了單堿基突變，第574處的氨基酸由Trp突變成Leu，導(dǎo)致M342具有較強(qiáng)的磺酰脲類除草劑抗性，且該突變基因遵循1對(duì)顯性基因的遺傳模式[14];研究表明，pol CMS恢復(fù)基因也為1對(duì)主效顯性基因[16];因此，采用雜交轉(zhuǎn)育的方法聚合M342中的抗除草劑基因及pol CMS恢復(fù)系中的恢復(fù)基因在理論上僅有1/16的概率，選育過(guò)程工作量較大。利用M342來(lái)源的抗除草劑基因?yàn)轱@性基因的特性，本研究在F2分離群體對(duì)單株進(jìn)行苯磺隆除草劑處理，殺死不抗除草劑單株，縮小了選育范圍;此外，利用M342選育單位開(kāi)發(fā)的分子標(biāo)記[15]，對(duì)213個(gè)F2抗除草劑單株進(jìn)行了標(biāo)記輔助選擇，獲得了純合抗性單株67株，大大減少了選育的田間工作量。在pol CMS恢復(fù)系選育中往往對(duì)穩(wěn)定自交后代測(cè)恢以篩選攜帶純合恢復(fù)基因的單株[17]，但這種方法需要較大的自交后代群體，具有一定的隨機(jī)性，而本研究在F2代就對(duì)單株進(jìn)行測(cè)恢，可以提前篩選攜帶純合pol CMS恢復(fù)基因的單株，具有較強(qiáng)的目標(biāo)性。采用這套方法，成功選育了抗除草劑的pol CMS恢復(fù)系18Z363，表明該方法可以為選育其它遺傳背景的抗除草劑pol CMS恢復(fù)系提供參考。

雜交轉(zhuǎn)育是作物遺傳育種的基本方法，可以利用具有不同性狀的親本配制雜交組合，在分離后代中定向選育，實(shí)現(xiàn)不同性狀的聚合[17]。本研究選育的18Z363實(shí)現(xiàn)了pol CMS恢復(fù)基因與除草劑抗性基因的聚合，其它農(nóng)藝性狀調(diào)查發(fā)現(xiàn)18Z363遺傳了2350C的主序角果數(shù)多、主序結(jié)角密度高、單株有效角果數(shù)多等優(yōu)點(diǎn)。由于親本M342來(lái)自長(zhǎng)江下游油菜生產(chǎn)區(qū)，其生育期較長(zhǎng)，不適合貴州地區(qū)的生態(tài)環(huán)境，而選育的18Z363的生育期相對(duì)于M342有所縮短，表明本研究在18Z363的選育過(guò)程中對(duì)早熟性進(jìn)行定向選育有一定的效果。18Z363的每角粒數(shù)和千粒重性狀接近母本2350C而顯著低于M342，楊玉花等[19]研究認(rèn)為油菜角粒數(shù)受母體效應(yīng)影響較大，因此18Z363的每角粒數(shù)較低可能是由母本2350C的角粒數(shù)較低造成的;甘藍(lán)型油菜千粒重性狀同時(shí)受到基因的加性效應(yīng)和顯性效應(yīng)共同作用，以加性遺傳效應(yīng)為主[20]，選育高千粒重材料需要利用高千粒重品種（系）做雜交親本， 利用主基因和多基因的加性效應(yīng)來(lái)選育高千粒重后代[21]，可見(jiàn)千粒重改良比較復(fù)雜，需要系統(tǒng)的定向選擇，而本研究在18Z363的選育過(guò)程中重點(diǎn)關(guān)注了其除草劑抗性及pol CMS的恢復(fù)性，未為對(duì)其千粒重性狀進(jìn)行系統(tǒng)選擇，導(dǎo)致其千粒重沒(méi)有提高。

采用18Z363與本單位選育的pol CMS不育系配制了11個(gè)組合，噴施苯磺隆除草劑鑒定發(fā)現(xiàn)11個(gè)雜交組合表現(xiàn)為抗除草劑，表明可以利用該恢復(fù)系培育抗除草劑的品種。組合產(chǎn)量鑒定發(fā)現(xiàn)11個(gè)組合中有1個(gè)組合的產(chǎn)量顯著高于油研50，2個(gè)組合與油研50產(chǎn)量持平，而油研50是貴州省審定和國(guó)家審定品種，具有較好的豐產(chǎn)性[22]，可見(jiàn)18Z363在配制高產(chǎn)組合中具有一定的潛力。對(duì)組合的農(nóng)藝性狀調(diào)查發(fā)現(xiàn)高產(chǎn)組合（J068A×18Z363、LDX380A×18Z363、LDX6-18A×18Z363）及油研50的一次分枝數(shù)、主花序較長(zhǎng)、主花序角果數(shù)、單株角果數(shù)、每角粒數(shù)及單株籽粒產(chǎn)量等性狀不同程度地高于低產(chǎn)組合（LDX92-11A×18Z363、LDX374A×18Z363、LDX82-11A×18Z363），表明在選育恢復(fù)系時(shí)應(yīng)著重選育一次分枝數(shù)、主花序較長(zhǎng)、主花序角果數(shù)、單株角果數(shù)、每角粒數(shù)及單株籽粒產(chǎn)量等性狀配合力高的材料。

參考文獻(xiàn)

[1] 王漢中. 以新需求為導(dǎo)向的油菜產(chǎn)業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略[J]. 中國(guó)油料作物學(xué)報(bào)， 2018， 40（5）： 613-617.

[2]?朱文達(dá)， 魏守輝， 張朝賢. 湖北省油菜田雜草種類組成及群落特征[J]. 中國(guó)油料作物學(xué)報(bào)， 2008， 30（1）： 100-105.

[3]?李揚(yáng)漢. 中國(guó)雜草志[M]. 北京： 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社， 1998.

[4]鄒月利， 陶波. 磺酰脲類除草劑的降解機(jī)制及代謝產(chǎn)物的研究進(jìn)展[J]. 農(nóng)藥科學(xué)與管理， 2011， 32（10）： 24-31.

[5]胡茂龍， 浦惠明， 張潔夫. 我國(guó)抗ALS類除草劑油菜種質(zhì)創(chuàng)制與研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)油料作物學(xué)報(bào)， 2018， 40（5）： 679-686.

[6]Fu T D， Yang G S， Yang X N. Studies on three line Polima cytoplasmic male sterility developed in B. napus[J]. Plant Breeding， 1990， 104（2）： 115-120.

[7]?Binder S， Knill T， Schuster J. Branched-chain amino acid metabolism in higher plants[J]. Physiologia Plantarum， 2010， 129（1）： 68-78.

[8]Swanson E B， Herrgesell M J， Arnoldo M， et al. Microspore mutagenesis and selection： Canola plants with field tolerance to the imidazolinones[J]. Theoretical and Applied Genetics， 1989， 78（4）： 525-530.

[9]?高建芹， 浦惠明， 戚存扣， 等. 抗咪唑啉酮油菜種質(zhì)的發(fā)現(xiàn)與鑒定[J]. 植物遺傳資源學(xué)報(bào)， 2010， 11（3）： 369-373.

[10]?浦惠明， 胡茂龍， 高建芹， 等. 一種基于ALS靶酶的抗除草劑油菜定向選育方法[P]. 201310054645. 9. 2013-05-01.

[11]胡茂龍， 浦惠明， 龍衛(wèi)華， 等. 具有除草劑抗性的乙酰乳酸合酶突變蛋白及其應(yīng)用[P]. 201710568511. 7. 2017-10-13.

[12]孫妍妍， 曲高平， 黃謙心， 等. 甘藍(lán)型油菜抗苯磺隆突變體ALS基因分析與SNP標(biāo)記[J]. 中國(guó)油料作物學(xué)報(bào)， 2015， 37（5）： 589-595.

[13]Li H T， Li J J， Zhao B， et al. Generation and characterization of tribenuron-methyl herbicide-resistant rapeseed （Brasscia napus） for hybrid seed production using chemically induced male sterility[J]. Theoretical and Applied Genetics， 2015， 128（1）： 107-118.

[14]?Hu M L， Pu H M， Gao J Q， et al. Inheritance and molecular characterization of resistance to AHAS inhibiting herbicides in rapeseed[J]. Journal of Integrative Agriculture， 2017， 16（11）： 2421-2433.

[15]?程麗， 胡茂龍， 浦惠明， 等. M342抗除草劑基因CAPS標(biāo)記的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2019， 35（2）： 241-247.

[16]?楊光圣， 傅廷棟， 馬朝芝， 等. 油菜波里馬細(xì)胞質(zhì)雄性不育恢復(fù)基因的篩選與遺傳[J]. 1996， 29（4）： 17-22.

[17]?張超， 李大雄， 羅莉斯， 等. 甘藍(lán)型油菜雙低pol CMS恢復(fù)系2350C的選育與應(yīng)用[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2014，42（10）： 15-17.

[18]Murray M G， Thompson W F. Rapid isolation of high molecular weight plant DNA[J]. Nucleic Acids Research， 1980， 8（19）： 4321-4326.

[19]?楊玉花. 甘藍(lán)型油菜每角粒數(shù)遺傳結(jié)構(gòu)和機(jī)制解析[D]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院博士學(xué)位論文， 2016：26-32.

[20]?董育紅， 關(guān)周博， 韋世豪， 等. 甘藍(lán)型油菜千粒重的遺傳效應(yīng)分析[J]. 作物研究， 2016， 30（5）：516-519.

[21]?戚存扣， 浦惠明， 張潔夫， 等. 油菜（Brassica napus L.）千粒重性狀主位點(diǎn)組遺傳分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2005， 21（1）： 1-5.

[22]?張瑞茂， 陳大倫， 李敏， 等. 抗裂角優(yōu)質(zhì)高效雜交油菜品種油研50的選育[J]. 中國(guó)油料作物學(xué)報(bào)， 2013， 35（增刊）： 239-242.

作者簡(jiǎn)介：

張超（1985-），男，碩士研究生，助理研究員。研究方向：油菜遺傳育種。