三七總皂苷對(duì)心肌缺血模型大鼠血清生化學(xué)和血液流變學(xué)指標(biāo)的影響

王瑞峰，姜克悅

（河南南陽市油田總醫(yī)院心血管內(nèi)科，河南 南陽 473132）

心肌缺血為冠狀動(dòng)脈血流不全而導(dǎo)致的冠狀動(dòng)脈供血不足，進(jìn)而導(dǎo)致心臟供氧減少和能量代謝不正常，不能支持心臟正常工作的一種病理狀態(tài)，見于多種臨床常見缺血性心臟疾病，目前尚無特效藥物，致殘率及病死率高[1]。三七總皂苷可抗血小板凝集，防止心肌缺血-再灌注損傷的發(fā)生，改善缺血性模型動(dòng)物的心腦損傷程度[2]。本研究中建立了大鼠以心肌缺血模型，探討三七總皂苷對(duì)其血清生化學(xué)和血液流變學(xué)指標(biāo)的影響，為三七總皂苷的臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1．1 動(dòng)物、儀器與試藥

動(dòng)物：清潔級(jí)SD大鼠(北京維通利華動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號(hào)為 SCXK＜京＞2012-0001)60只，雄性，5～6周齡，體質(zhì)量 180～220 g。適應(yīng)性喂養(yǎng) 7 d，實(shí)驗(yàn)期間自由飲水進(jìn)食。

儀器：Multiskan FC型酶標(biāo)儀(美國Thermo公司)；SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵(常州市金壇友聯(lián)儀器研究所)；TGL-18C型高速臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；GX 964型血小板黏附兩用儀(上海第三分析儀器廠)；ZX-6020型全自動(dòng)生化分析儀(西化儀＜北京＞科技有限公司)；LS-20ECG型大鼠心電圖記錄儀（北京拜安吉科學(xué)儀器有限公司）。

試藥：三七總皂苷（成都普瑞法科技開發(fā)有限公司，批號(hào)為20150609）；苦碟子注射液（通化華夏藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)為20150912，規(guī)格為每支20 mL）；丙二醛（MDA）檢測試劑盒（批號(hào)為 20150217）、一氧化氮(NO)檢測試劑盒（批號(hào)為 20150326）、游離脂肪酸(FFA)檢測試劑盒（批號(hào)為20141108），均購自南京建成生物工程研究所有限公司；水合氯醛及其余試劑均為藥用級(jí)，水為蒸餾水。

1．2 方法

分組與給藥：將60只SD雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（A組，生理鹽水）、模型組（B組，生理鹽水）、苦碟子注射液組（C 組，100 mg／kg）和三七總皂苷高、中、低劑量組（D1組，D2組，D3組，200，100，50 mg／kg），每組10只。各組大鼠灌胃相應(yīng)藥物，每天1次，連續(xù)7d。

造模：于末次給藥后，參照文獻(xiàn)[3]建立大鼠心肌缺血模型，給予大鼠腹腔注射水合氯醛（300mg／kg），并在大鼠右上肢和左下肢皮下置入心電圖電極針記錄Ⅱ?qū)?lián)形態(tài)。在距離大鼠左冠脈前降支起始處3～4 mm穿線，結(jié)扎，觀察心電圖變化，顯示ST段明顯抬高視為造模成功。假手術(shù)組手術(shù)過程與上述相同，只穿線不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈。

血清生化學(xué)指標(biāo)檢測：造模成功后24 h，腹腔注射10%水合氯醛（300 mg／kg）麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血5～6 mL，靜置 10～20 min后 3 200 r／min離心 10 min，取上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測。采用酶標(biāo)儀分別在100，200，300 nm 波長處檢測 MDA，NO，F(xiàn)FA 的吸光度，以說明書相應(yīng)公式得上述指標(biāo)含量。

血液流變學(xué)指標(biāo)檢測：取上述血清適量，以3．8%枸櫞酸鈉進(jìn)行抗凝，采用血小板黏附兩用儀檢測血小板黏附情況，按下列公式計(jì)算血小板黏附率：血小板黏附率＝（黏附前血小板數(shù)-黏附后血小板數(shù)）／黏附前血小板數(shù)×100%。采用全自動(dòng)生化分析儀檢測纖維蛋白原含量和紅細(xì)胞比容水平。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2．1 大鼠血清中MDA，NO，F(xiàn)FA含量

與假手術(shù)組比較，A組大鼠血清中MDA，NO，F(xiàn)FA含量均顯著增加（P＜0．05）；與 B 組比較，C 組、D1組、D2組、D3組大鼠血清中MDA，NO，F(xiàn)FA含量均顯著減少（P＜0．05）。詳見表 1。

表1 各組大鼠血清中MDA，NO，F(xiàn)FA含量比較（s，n＝10）

表1 各組大鼠血清中MDA，NO，F(xiàn)FA含量比較（s，n＝10）

注：與 A 組比較，P ＜0．05；與 B 組比較，＃P ＜0．05。下表同。

組別A組B組C組D1組D2組D3組劑量(mg／kg)100 200 100 50 MDA(nmol／mL)7．43 ± 1．35 9．06 ± 1．68 7．75 ± 1．62＃7．74 ± 1．05＃7．61 ± 0．92＃8．76 ± 1．97 NO( mol／mL)17．33 ± 0．82 31．45 ± 2．82 23．25 ± 1．11＃25．82 ± 1．08＃27．45 ± 2．82＃32．68 ±164 FFA(mmol／mL)389．62 ± 9．12 468．92 ± 9．47 395．62 ± 9．36＃393．73 ± 9．82＃416．28 ± 8．82＃432．81 ± 9．22

2．2 大鼠血小板黏附率、纖維蛋白原和紅細(xì)胞比容水平

與A組比較，B組大鼠血小板黏附率和紅細(xì)胞比容水平顯著升高，纖維蛋白原含量顯著增加（P＜0．05）；與A組比較，C組、D1組、D2組、D3組大鼠血小板黏附率和紅細(xì)胞比容水平顯著降低，纖維蛋白原含量顯著減少（P ＜0．05）。詳見表 2。

表2 各組大鼠血液中血小板黏附率、纖維蛋白原和紅細(xì)胞比容水平比較（X ± s，n＝10）

3 討論

缺血性心臟病多發(fā)于中老年人群，主要是因患者心臟血液灌注減少，心臟供氧量下降，心肌能量代謝異常，從而導(dǎo)致心臟不能正常工作[4]。臨床治療本病以降低患者心肌梗死頻率，縮短心肌梗死的持續(xù)時(shí)間為主，以改善患者的生活質(zhì)量，降低死亡率[5]。臨床多給予患者鈣拮抗劑、抗氧化劑、腺苷受體激動(dòng)劑、β-受體阻滯藥等進(jìn)行干預(yù)，但并未取得理想效果[6]。丹參、紅花、三七具有活血化瘀、通絡(luò)活絡(luò)之功效；三七為五加科植物的干燥根和莖[7]，其主要活性成分為三七總皂苷，包括三七皂苷R1、人參皂苷Re1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rd和人參皂苷Rb1[8]。藥理學(xué)研究表明，三七總皂苷可有效抑制血栓形成，還能改善血壓水平，擴(kuò)張外周血管，保護(hù)受損的缺血性心肌細(xì)胞[9-10]。

血液流變學(xué)主要是針對(duì)血液黏滯性、凝固性的研究，是評(píng)估患者疾病發(fā)展程度的重要參數(shù)，該指標(biāo)如果發(fā)生異常會(huì)加重細(xì)胞組織缺氧缺血，導(dǎo)致紅細(xì)胞膜功能障礙進(jìn)一步加重，從而損傷組織細(xì)胞。心肌細(xì)胞缺血缺氧可抑制NO釋放，同時(shí)使冠狀動(dòng)脈進(jìn)一步痙攣，加重心肌受損。因此，NO含量可一定程度反映心肌受損程度。MDA是大量的氧自由基造成脂質(zhì)過氧化損傷的產(chǎn)物，可抑制前列環(huán)素合成酶活性，使血管收縮，加重心肌損傷。血清中FFA的含量與脂代謝、糖代謝、內(nèi)分泌功能有關(guān)，心肌缺血使FFA含量異常增加，會(huì)進(jìn)一步加重其缺血程度。本研究結(jié)果表明，三七總皂苷可顯著減少心肌缺血模型大鼠血清中MDA，F(xiàn)FA，NO含量，顯著降低血小板黏附率和紅細(xì)胞比容水平，減少血液中纖維蛋白原的含量。但本研究由于樣本量較少，且僅限于血清生化學(xué)和血液流變學(xué)指標(biāo)，結(jié)果可能存在一定片面性，后期還需增大樣本量，同時(shí)在基因和蛋白水平層面進(jìn)行深入研究，為三七總皂苷的臨床應(yīng)用提供更有力的依據(jù)。

綜上所述，三七總皂苷對(duì)心肌缺血模型大鼠的血清生化學(xué)和血液流變學(xué)指標(biāo)有一定改善作用，其機(jī)制可能與抗氧化和改善血液質(zhì)量有關(guān)。