不同方法炮制后白術(shù)功效指標(biāo)含量變化比較

謝麗靜，高秋芳，楊昊鈺

（江蘇省無(wú)錫市第三人民醫(yī)院中藥房，江蘇 無(wú)錫 214000）

中藥種類多、成分雜、性質(zhì)不一，部分中藥具有刺激性或有毒，而部分中藥則能一藥多用，經(jīng)不同方法炮制后的中藥飲片，其藥效也不盡相同[1]。因此，中藥需經(jīng)過(guò)特定的炮制手段才可作為臨床用藥。目前，中藥炮制仍停留在經(jīng)驗(yàn)、傳統(tǒng)的基礎(chǔ)上，而不同地域?qū)νN中藥炮制的規(guī)范、藥物名稱及制作手法均有較大差異，諸多中藥材炮制品質(zhì)量尚缺乏客觀、統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)[2-3]。本研究中對(duì)比分析了白術(shù)中藥飲片經(jīng)不同方法炮制后水分、揮發(fā)油、內(nèi)酯類及多糖類成分含量的變化，為將來(lái)中藥飲片的炮制提供參考?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Raystzoxbap型非接觸測(cè)溫儀（北京雷泰光點(diǎn)技術(shù)有限公司）；烘烤箱可調(diào)溫式電爐（重慶家旺家用電器廠）；LCZOA型高效液相色譜儀（包括紫外檢測(cè)器，日本島津儀器公司）；Sartorius BP211D型電子分析天平（德國(guó)賽多利斯公司）；BUG25-12型超聲波清洗機(jī)（上海必能信超聲波有限公司）；UV-100型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海天美科技有限公司）。

1．2 試藥

甲醇、乙腈為色譜純，水為蒸餾水，其他試劑均為分析純；純度≥98%的白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ（批號(hào)為10172-201708）、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ（批號(hào)為 10172-201707）、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ（批號(hào)為10172-201708），葡萄糖對(duì)照品（批號(hào)為10172-201709），純度≥98%，均購(gòu)自南昌貝塔生物科技有限公司；白術(shù)藥材產(chǎn)地為浙江磐安，購(gòu)自浙江磐安縣宣和藥材有限公司，經(jīng)我院主管中藥師尤英芬鑒定為菊科植物白術(shù) Atractylodes macrocephala Koidz．的干燥根，藥材質(zhì)量經(jīng)檢驗(yàn)均符合藥典規(guī)定；飲片炮制中所用灶心土由我院中藥房指定中藥師購(gòu)得，并經(jīng)專業(yè)技術(shù)進(jìn)行粉碎。

2 方法與結(jié)果

2．1 樣品炮制

炮制時(shí)，對(duì)白術(shù)飲片質(zhì)量有影響的因素包括預(yù)熱溫度、電爐火力、炒制時(shí)間等。為確保樣品具有代表性及試驗(yàn)結(jié)果的可靠性，將清炒白術(shù)與土炒白術(shù)分別制備至少10批樣品。飲片炮制方法均參照藥典白術(shù)項(xiàng)下炮制方法，并與老藥師的經(jīng)驗(yàn)相結(jié)合，固定各工藝參數(shù)。

凈白術(shù)：取白術(shù)藥材，切片，洗凈，篩除泥沙。

清炒白術(shù)：將電爐功率調(diào)至1200 W，鍋中心溫度預(yù)熱至350℃后，加入切片、洗凈的白術(shù)藥材，翻炒6 min即可。共制備10批。

土炒白術(shù)：將電爐功率調(diào)至1 200 W，鍋中心溫度預(yù)熱至210℃后，放入灶心土翻炒4 min（此時(shí)鍋中心溫度應(yīng)為350℃），加入切片、洗凈的白術(shù)藥材，緩慢翻炒6 min，篩除鍋中余土。每100 g藥材需用灶心土25 g，且不重復(fù)使用。共制備10批。

麩炒白術(shù)：將電爐功率調(diào)至1 200 W，待鐵鍋溫度燒至中熱，放入適量麥麩，翻炒加熱至冒出白色煙霧，投入切片、洗凈的白術(shù)藥材，不斷翻炒至顏色變?yōu)辄S褐色，取出，篩除麥麩，并不斷翻滾至飲片涼透。

焦白術(shù)：鐵鍋中放入切片、洗凈的白術(shù)藥材，將電爐功率調(diào)至1 200 W，炒至白術(shù)表面呈焦褐色，并將內(nèi)部呈黃色部分取出，放涼即可。

白術(shù)炭：鐵鍋中放入切片、洗凈的白術(shù)藥材，將電爐功率調(diào)至1 200 W，翻炒至白術(shù)表面呈焦黑色、內(nèi)部可見(jiàn)焦褐色時(shí)，取出，放涼即可。

2．2 水分檢測(cè)

取2．1項(xiàng)下白術(shù)炮制品各3 g，精密稱定，置恒定質(zhì)量且干燥的扁形稱量瓶?jī)?nèi)，將瓶蓋打開(kāi)并置烘烤箱內(nèi)（100～105℃）干燥5 h，蓋好瓶蓋，移至干燥器內(nèi)，冷卻30 min，精密稱定，再在上述溫度干燥60 min，冷卻，稱定質(zhì)量，連續(xù)干燥2次，稱定質(zhì)量差異不超過(guò)5 mg時(shí)停止干燥。根據(jù)減失的質(zhì)量計(jì)算含水量。

2．3 揮發(fā)油含量測(cè)定

取2．1項(xiàng)下各白術(shù)樣品100 g，精密稱定質(zhì)量，按照2010年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅩD揮發(fā)油測(cè)定法甲法測(cè)定，計(jì)算揮發(fā)油含量。

2．4 內(nèi)酯類成分含量測(cè)定

2．4．1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm× 4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈 -水，梯度洗脫；流速：1 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：242 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2．4．2 溶液制備

稱取 2．1項(xiàng)下白術(shù)樣品粉末（過(guò) 40目篩）各 2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶?jī)?nèi)，精密加入甲醇40 mL，密塞后精密稱定，超聲提取（250 W，20 kHz）45 min，取出放冷至室溫，稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，取上清液，經(jīng)0．45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。稱取白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ2．58 mg、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ2．46 mg、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ3．67 mg，精密稱定，用甲醇溶解后配制成質(zhì)量濃度為 0．103 2，0．146 8，0．098 4 g／L 的溶液，經(jīng)微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得對(duì)照品溶液。

2．4．3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)結(jié)果顯示，在擬訂色譜條件下，甲醇對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。線性關(guān)系考察及回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果的 RSD均小于3%，表明測(cè)定方法可行。

表1 內(nèi)酯類成分含量測(cè)定線性關(guān)系考察及回收率試驗(yàn)結(jié)果

2．5 多糖類成分含量測(cè)定

2．5．1 顯色條件考察

顯色溫度及波長(zhǎng)：分別考察對(duì)照品溶液及供試品溶液在不同溫度下的最大吸光度及最大吸收波長(zhǎng)，結(jié)果顯示，在沸水中，溶液均在490 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。故選用沸水顯色，測(cè)定波長(zhǎng)為490 nm。

顯色時(shí)間：吸取供試品溶液2 mL，共4份，置試管內(nèi)；取2 mL蒸餾水，作為空白溶液；取葡萄糖對(duì)照品溶液1 mL，加蒸餾水稀釋至2 mL。分別加入顯色劑5 mL，搖勻后靜置 10 min，分別在沸水中顯色 10，20，30，40 min，取出并靜置20 min，于490 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度。結(jié)果沸水中顯色30 min吸光度最高，故將30 min作為顯色時(shí)間。

顯色劑用量：吸取供試品溶液 2 mL，共 5份，置試管內(nèi)，取2 mL蒸餾水，作為空白溶液。分別加入顯色劑5 mL，搖勻后靜置10 min，分別在沸水中顯色30 min，取出并靜置15 min，于490 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度。結(jié)果顯色劑用量5 mL時(shí)吸光度最高，故將5 mL作為顯色劑用量。

2．5．2 溶液制備

取葡萄糖對(duì)照品，加入蒸餾水溶解，稀釋成質(zhì)量濃度為1 g／mL的溶液，吸取5 mL，置50 mL容量瓶?jī)?nèi)，用蒸餾水稀釋至50 mL，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取白術(shù)藥材粗粉2 g，置250 mL錐形瓶中，加入80%乙醇100 mL，冷浸30 min，回流提取1．5 h，濾過(guò)，再次加入80%乙醇100 mL，回流提取1 h，濾過(guò)；用80%熱乙醇洗滌藥渣并揮干乙醇，加入蒸餾水100 mL，回流提取1 h，濾過(guò)；合并2次濾液，冷卻后加入蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，吸取2 mL置容量瓶，加入蒸餾水稀釋至100 mL，搖勻，即得供試品溶液。

2．5．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察結(jié)果顯示，線性回歸方程為A＝28．350 C ＋0．084 7，r＝0．999 6（n＝7），葡萄糖質(zhì)量濃度線性范圍為 0．006 2～0．050 0 g／L。精密度試驗(yàn)結(jié)果的 RSD為1．24%（n＝6），穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果的 RSD為 1．23%（n＝5），重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果的 RSD＜3%（n＝6），加樣回收試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。可見(jiàn)，多糖含量測(cè)定方法可行。

表2 多糖加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2．6 樣品中各指標(biāo)含量測(cè)定結(jié)果

結(jié)果見(jiàn)表3。可見(jiàn)，凈白術(shù)水分含量最高，其次為清炒白術(shù)，土炒白術(shù)與麩炒白術(shù)相當(dāng)（t＝1．715，P＝0．104）且均高于焦白術(shù)與白術(shù)炭（P ＜0．05），焦白術(shù)高于白術(shù)炭（t＝80．322，P＝0．05）；清炒白術(shù)揮發(fā)油含量最高，其次為凈白術(shù)，土炒白術(shù)、麩炒白術(shù)、焦白術(shù)與白術(shù)炭相當(dāng)（F＝1．247，P＝0．182）；白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量?jī)舭仔g(shù)均低于其他炮制白術(shù)（兩兩之間則無(wú)差異），白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ含量則均無(wú)明顯差異（F＝1．421，P＝0．144）；凈白術(shù)多糖含量低于后 5種炮制品(P＜0．05）；但后5種炮制品多糖含量相當(dāng)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝1．547，P＝0．131）。

3 討論

炮制中藥飲片是我國(guó)中醫(yī)藥傳統(tǒng)制藥的特色，中藥經(jīng)過(guò)炮制加工后，在功效、性味、歸經(jīng)、作用趨向、毒副作用等諸多方面均會(huì)發(fā)生明顯變化，從而保證中藥最大限度地發(fā)揮其功效[4]。輔料的性能及作用不同，在藥材炮制期間所起到的作用也不盡相同，從而炮制的中藥飲片用途也不相同。如本研究中所選白術(shù)，經(jīng)麩炒后能緩和燥性，促進(jìn)藥物健脾之效增強(qiáng)，多用于運(yùn)化失常、健脾不和導(dǎo)致的食少脹滿、表虛自汗、倦怠乏力之證；而經(jīng)土炒后得到的白術(shù)則主要用于脾虛泄瀉之證，有極佳的止瀉健脾之效[5]，反映了中醫(yī)藥在臨床用藥方面的靈活性，提示了炮制工藝與藥性之間存在的密切聯(lián)系。因此，正確認(rèn)識(shí)炮制工藝對(duì)炮制品功效及毒副作用起到的實(shí)質(zhì)作用，是研究中藥炮制原理的關(guān)鍵。

近年來(lái)，多數(shù)研究均集中于對(duì)輔料炮制中藥飲片后有效成分的測(cè)定及毒副作用的變化等方面，化學(xué)研究方法是其研究的主要思路，對(duì)生藥材與炮制藥材所含成分進(jìn)行對(duì)比分析，觀察炮制前后藥材中的成分變化是質(zhì)變還是量變，以及是否產(chǎn)生新的成分，再進(jìn)一步對(duì)不同成分或單體進(jìn)行提取分析，后與藥理試驗(yàn)結(jié)果相結(jié)合以解釋中藥飲片炮制原理[6-7]。這類研究思路在很大程度上可以解釋中藥飲片炮制原理，但忽略了藥材在炮制期間除輔料外，炒、蒸、炙、煮等其他因素對(duì)藥材功效的影響；而現(xiàn)有研究則無(wú)法解釋中藥飲片在炮制前后藥材所含成分的改變及功效毒理等變化是因加熱引起還是因輔料引起，或者是輔料與加熱共同作用的結(jié)果[8]。另一方面，目前的研究均注重炮制方法導(dǎo)致藥材本身成分發(fā)生變化，而忽視了藥材在體內(nèi)的化學(xué)改變，而這些改變均與藥材的功效及毒副作用關(guān)系密切[9]。特別是經(jīng)輔料炮制，在炮制期間輔料可能在藥物表面附著，并隨著飲片一起進(jìn)入機(jī)體內(nèi)，輔料一方面本身可能有功效，而另一方面可能會(huì)對(duì)藥物在體內(nèi)的吸收及代謝產(chǎn)生影響，從而達(dá)到減毒增效目的[10]。因此，建立與輔料炮制特點(diǎn)相符的研究思路與方法極為關(guān)鍵。

表3 不同方法炮制白術(shù)飲片各指標(biāo)測(cè)定結(jié)果比較（s，n＝10）

表3 不同方法炮制白術(shù)飲片各指標(biāo)測(cè)定結(jié)果比較（s，n＝10）

注：與凈白術(shù)比較，aP ＜0．05；與清炒白術(shù)比較，bP ＜0．05；與土炒白術(shù)比較，cP ＜0．05；與麩炒白術(shù)比較，dP ＜0．05；與焦白術(shù)比較，eP＜0．05。

炮制方法 水分含量（%） 揮發(fā)油含量（%） 內(nèi)酯類成分含量(mg／g)多糖含量（%）31．01 ± 1．57 46．41 ± 2．02a 47．01 ± 1．98a 46．57 ± 2．14a 45．71 ± 1．57a 45．84 ± 1．62a 1．671 0．097凈白術(shù)清炒白術(shù)土炒白術(shù)麩炒白術(shù)焦白術(shù)白術(shù)炭F值P值11．01 ± 0．12 9．02 ± 0．12a 6．17 ± 0．06ab 6．12 ± 0．07ab 4．01 ± 0．03abcd 2．74 ± 0．04abcde 126．579 0．000 0．77 ± 0．02 1．31 ± 0．06a 0．61 ± 0．03ab 0．59 ± 0．02ab 0．58 ± 0．03ab 0．56 ± 0．02ab 1．857 0．067白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ0．44 ± 0．02 0．52 ± 0．03a 0．53 ± 0．02a 0．54 ± 0．03a 0．54 ± 0．02a 0．53 ± 0．03a白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ0．29 ± 0．01 0．29 ± 0．02 0．30 ± 0．02 0．31 ± 0．03 0．29 ± 0．03 0．31 ± 0．04白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ0．41 ± 0．02 0．74 ± 0．04a 0．76 ± 0．03a 0．77 ± 0．03a 0．75 ± 0．04a 0．76 ± 0．04a

本研究中將白術(shù)經(jīng)6道不同炮制工藝分別制備成凈白術(shù)、清炒白術(shù)、土炒白術(shù)、麩炒白術(shù)、焦白術(shù)及白術(shù)炭。凈白術(shù)是白術(shù)的原藥材，在去除雜質(zhì)后曬干即可，其功效偏于利水消腫、健脾燥濕，對(duì)四肢浮腫、脾胃虧虛有理想療效，同時(shí)對(duì)腹痛、便秘、腹脹、嘔吐改善作用極佳，臨床多與陳皮、黨參、茯苓配伍治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛。清炒白術(shù)健脾功效極佳，多用于安胎、和胃、止瀉、健脾。土炒白術(shù)功效主要偏于燥濕、補(bǔ)脾、止瀉，如參苓白術(shù)散中所用的土炒白術(shù)可治療脾胃氣虛之證，癥見(jiàn)形體虛弱、或吐或?yàn)a、飲食不消、四肢無(wú)力等，效果顯著。麩炒白術(shù)有理想的健脾益氣之效，《脾胃論》中提到，麩炒白術(shù)用于補(bǔ)中益氣湯，對(duì)脫肛、中氣下陷、臟器下垂等作用極佳，且治愈后復(fù)發(fā)率低。焦白術(shù)又稱焦術(shù)，有增強(qiáng)醒脾、收斂止瀉、溫化寒濕之效，具有澀腸止瀉、補(bǔ)氣健脾之效，常用于寒性、慢性腹瀉，且焦白術(shù)收澀溫中之效較干炒白術(shù)更佳。白術(shù)炭收斂止血之效較其他方法炮制的白術(shù)飲片更理想，常用于慢性、寒性腹瀉長(zhǎng)久所致出血癥的治療[11-12]。

本研究結(jié)果顯示，與凈白術(shù)相比，清炒白術(shù)、土炒白術(shù)、麩炒白術(shù)、焦白術(shù)、白術(shù)炭中多糖含量更高，而白術(shù)中多糖是止瀉健脾的中藥物質(zhì)基礎(chǔ)，相較于其他白術(shù)飲片，凈白術(shù)止瀉之效較弱。通過(guò)揮發(fā)油含量分析可知，白術(shù)土炒后揮發(fā)油含量明顯降低，且主要成分含量有較大變化，但清炒白術(shù)的揮發(fā)油含量則有明顯升高。出現(xiàn)該結(jié)果的原因可能與炮制輔料吸附揮發(fā)油有關(guān)，而在清炒過(guò)程中揮發(fā)油揮發(fā)后多被飲片表面所吸附，因此清炒白術(shù)出油快且含量高。因蒼術(shù)酮是揮發(fā)油中主要燥性成分，土炒后揮發(fā)油含量降低，則蒼術(shù)酮含量降低，提示土炒白術(shù)藥性緩和，刺激性較小，這與中醫(yī)藥炮制傳統(tǒng)理論相符[13]。多糖與內(nèi)酯類成分含量測(cè)定結(jié)果顯示，土炒、麩炒等輔料炮制后白術(shù)中的內(nèi)酯類成分與多糖含量增加，與凈白術(shù)及清炒白術(shù)相比發(fā)現(xiàn)，加熱是導(dǎo)致白術(shù)化學(xué)成分發(fā)生改變的主要原因，而受到輔料炮制的影響并不明顯，提示在后續(xù)中藥飲片炮制工藝中需注意炮制火力及火候控制，應(yīng)關(guān)注藥材在炒制期間成分變化的動(dòng)態(tài)規(guī)律，為未來(lái)中藥飲片的炮制工藝提供合理、科學(xué)的參考依據(jù)[14-15]。

綜上所述，經(jīng)不同方法炮制的中藥飲片的水分、揮發(fā)油、內(nèi)酯類成分及多糖含量均不相同，特別是藥材本身與其他方法炮制后比較差異最明顯，臨床應(yīng)根據(jù)具體情況選擇炮制方法，以保證用藥的有效性及安全性。