HPLC法測(cè)定銀菊感冒膠囊中馬來酸氯苯那敏的含量及含量均勻度

荀秀彪 張順平

【摘?要】?目的：建立測(cè)定銀菊感冒膠囊中馬來酸氯苯那敏含量及含量均勻度的高效液相色譜法。方法：采用Amethyst?C18色譜柱（4.6?mm×200?mm，5?μm），磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫銨11.5?g，加水適量使溶解，加磷酸1?mL，用水稀釋至1000?mL）-乙腈（80∶20）為流動(dòng)相，?流速?1.0?mL·min-1，?檢測(cè)波長(zhǎng)262?nm，柱溫為30?℃。結(jié)果：馬來酸氯苯那敏質(zhì)量濃度在0.893～44.65?μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9999（n=6），平均回收率為100.95%，RSD=0.67%（n=5）。結(jié)論：該方法快捷，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果可靠，可用于銀菊感冒膠囊中馬來酸氯苯那敏的含量測(cè)定和含量均勻度檢測(cè)。

【關(guān)鍵詞】?高效液相色譜法;銀菊感冒膠囊;馬來酸氯苯那敏;含量測(cè)定;含量均勻度

【中圖分類號(hào)】R284.1?【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】?A【文章編號(hào)】1007-8517（2019）21-0051-03

Determination?of?Content?and?Content?Uniformity?of?Chlorpheniramine?maleate?in?Yunju?Ganmao?Capsules??by?HPLC

XUN?Xiubiao?ZHANG?Shunping

Qujing?Inspection?Center?for?Food?and?Drug?Control，Qujing?655000，China

Abstract：Objective?To?establish?an?HPLC?method?for?the?determination?of?Content?and?Content?Uniformity?of?chlorpheniramine?maleate?in?Yunju?Ganmao?capsules.?Methods?The?HPLC?assay?carried?out?on?an??Amethyst?C18?chromatographic?column（4.6?mm?×?200?mm，5?μm），Phosphate?buffer?（11.5g?ammonium?dihydrogen?phosphate，?dissolved?by?adding?appropriate?amount?of?water，?1ml?phosphate，?diluted?to?1000mL?with?water）?-acetonitrile?（80：20）?was?the?mobile?phase.The?detection?wavelength?was?set?at?262?nm，flow?rate?at?1.0?mL·?min-1?and?column?temperature?at?30?℃.Results?Chlorphenamine?maleate??had?a?good?linear?relationship?within?0.893～44.65?μg/mL，?r=0.999?9?（n=6），?average?recovery?rate?was?100.95%，RSD=0.67%（n=5）.Conclusion?The?method?is?quick，?simple?and?reliable，?and?can?be?used?for?the?determination?of?chlorpheniramine?maleate?in?Yunju?Ganmao?Capsules?and?the?determination?of?content?uniformity.

Keywords：HPLC;?Yunju?Ganmao?Capsules;?Chlorpheniramine?maleate?;?Content?determination;Content?Uniformity

銀菊感冒膠囊為曲靖市中醫(yī)醫(yī)院的院內(nèi)制劑（批準(zhǔn)文號(hào)：滇ZJGF/2005-538），由金銀花、菊花、射干、氨基比林、馬來酸氯苯那敏等組成，具有清熱解毒、解熱鎮(zhèn)痛的作用。臨床用于感冒、發(fā)熱、頭痛、咽喉腫痛等癥[1]。制劑中馬來酸氯苯那敏僅有薄層色譜定性鑒別，未建含量測(cè)定方法。本文參照相關(guān)文獻(xiàn)[2-4]，采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)該品種中馬來酸氯苯那敏含量及含量均勻度進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明本方法簡(jiǎn)單快捷，穩(wěn)定性及重現(xiàn)性較好，可有效控制銀菊感冒膠囊質(zhì)量。

1?儀器與材料

1.1?儀器?Agilent1200型高效液相色譜儀（四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，?紫外檢測(cè)器）;METTLE?MS205DU電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）MS205DU電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）;一體式超純水儀（PURELAB?Flex?3，英國(guó)ELGA公司）。

1.2?藥品與試劑?銀菊感冒膠囊（規(guī)格0.25g/粒，批號(hào)181007、181118、181220）樣品均來自云南省曲靖市中醫(yī)醫(yī)院;馬來酸氯苯那敏（批號(hào)100047-201507，含量99.7%）購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院;乙腈為色譜純，磷酸二氫銨和磷酸為分析純，水為超純水。

2?方法與結(jié)果

2.1?色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)?色譜柱：Amethyst?C18（4.6?mm×200?mm，5?μm）;?磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫銨11.5?g，加水適量使溶解，加磷酸1?mL，用水稀釋至1000?mL）-乙腈（80∶20）為流動(dòng)相;流速：1.0?mL·?min-1;?柱溫：30?℃，;檢測(cè)波長(zhǎng)：262?nm;進(jìn)樣量：10?μL。理論板數(shù)按氯苯那敏峰計(jì)算不低于4000，氯苯那敏峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

2.2?溶液的制備

2.2.1?對(duì)照品溶液制備?取馬來酸氯苯那敏對(duì)照品17.86?mg，精密稱定，置200?mL容量瓶中，加流動(dòng)相使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2?供試品溶液制備?取銀菊感冒膠囊20粒，計(jì)算平均裝量，取內(nèi)容物，研細(xì)，混勻，取適量（約相當(dāng)于馬來酸氯苯那敏4?mg），精密稱定，置50?mL容量瓶中，加流動(dòng)性30?mL，超聲處理15?min，放冷，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過，濾液再用0.45?μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.3?陰性樣品溶液制備?根據(jù)制劑處方及工藝，配制缺馬來酸氯苯那敏的陰性樣品（由云南省曲靖中醫(yī)醫(yī)院提供），再按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.3?結(jié)果

2.3.1?專屬性試驗(yàn)?在上述色譜條件下，分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10?μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果如圖1所示。結(jié)果表明，馬來酸氯苯那敏分離較好，無干擾，說明測(cè)定方法專屬性較好。

2.3.2?線性關(guān)系試驗(yàn)?精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0?mL，分別置于?10?mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。分別重復(fù)進(jìn)樣3次，記錄峰面積。以進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積（以氯苯那敏計(jì)）平均值（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：?Y=9226.8829X-0.6386，?r=0.999?9。結(jié)果表明，馬來酸氯苯那敏質(zhì)量濃度在0.893～44.65?μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3?檢測(cè)限和定量限?取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液適量，等倍逐級(jí)稀釋進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為3∶1時(shí)，得檢測(cè)限為?2.025?ng;當(dāng)信噪比為10∶1時(shí)，得定量限為?6.211?ng。

2.3.4?穩(wěn)定性試驗(yàn)?取經(jīng)“2.2.2”項(xiàng)方法制備的樣品（批號(hào)181007）供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，分別在0、2、4、6、8、12、24?h不同時(shí)間進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果峰面積RSD為1.36%（n=7）。結(jié)果表明供試品溶液在?24?h?內(nèi)色譜峰面積變化不大，溶液較穩(wěn)定。

2.3.5?回收率試驗(yàn)?取已知含量的同一批樣品（批號(hào)：181007）5份，每份約?0.5?g，精密稱定;另取馬來酸氯苯那敏對(duì)照品?25.12?mg，精密稱定，置?25?mL容量瓶中，加流動(dòng)性使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取?2?mL置已稱定樣品中，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果見表1。

2.3.6?精密度試驗(yàn)?精密取經(jīng)“2.2.1”項(xiàng)方法制備的樣品（批號(hào)181007）供試品溶液?10?μL，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，連續(xù)6次。結(jié)果馬來酸氯苯那敏峰面積的RSD分為0.30%，結(jié)果表明儀器平行精密度良好。

2.3.7?重復(fù)性試驗(yàn)?取同一批次的樣品（批號(hào)：181007），平行6份（1.0g），精密稱定，按“2.2.1”項(xiàng)下的方法操作，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，每1?g樣品中含馬來酸氯苯那敏?3.9424?mg，RSD為0.26%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.8?樣品測(cè)定?含量測(cè)定：取樣品3批次（批號(hào)181007、181118、181220）分別按“2.2.1”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，計(jì)算標(biāo)示含量，結(jié)果3批樣品中馬來酸氯苯那敏的平均標(biāo)示含量分別為98.56%、98.96%、99.05%。含量均勻度測(cè)定：取3個(gè)批號(hào)的樣品各10粒，分別置于?25?mL容量瓶中，加流動(dòng)性?15?mL，超聲處理?15?min，放冷，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過，續(xù)濾液再用?0.45?μm微孔濾膜濾過，濾液按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，計(jì)算標(biāo)示含量，結(jié)果見表2，符合《中國(guó)藥典》2015年版通則0941含量均勻度項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定（A+2.2S≤?L，L=15.0）。

3?討論

3.1?檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇?通過實(shí)驗(yàn)馬來酸氯苯那敏在262.5?nm波長(zhǎng)處有最大吸收，結(jié)合中國(guó)藥典及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[5-8]最終選用?262?nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2?提取條件選擇?試驗(yàn)中曾采用甲醇、水、乙醇、流動(dòng)相等溶媒超聲15?min，進(jìn)行提取，經(jīng)比較，以流動(dòng)相作為提取溶劑為佳;再以流動(dòng)相為提取溶劑，對(duì)同一批號(hào)樣品的超聲時(shí)間進(jìn)行考察，選擇超聲10、15、30、45、60?min后處理的樣品溶液分別進(jìn)行分析，結(jié)果各樣品含量基本接近，故選擇超聲時(shí)間?15?min處理樣品。

3.3?分離條件選擇?本試驗(yàn)曾采用了3種流動(dòng)相進(jìn)行成分分離[9-11]。①乙腈：磷酸鹽緩沖液②甲醇-水?;③甲醇-乙腈-水。結(jié)果發(fā)現(xiàn)磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫銨11.5?g，加水適量使溶解，加磷酸?1?mL，用水稀釋至1000?mL）-乙腈（80∶20）為流動(dòng)相保留時(shí)間合適且各成分獲得較好的分離。

4?結(jié)論

本試驗(yàn)中采用高效液相色譜法測(cè)定銀菊感冒膠囊中馬來酸氯苯那敏的含量及含量均勻度，該方法操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確可靠，可有效控制該制劑質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1]云南醫(yī)院制劑標(biāo)準(zhǔn)[S].滇ZJGF/2005-538.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（2015年版一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：62-64，124-125.

[3]吳曉燕，?唐琨，?尚春燕.?高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方銀翹氨敏膠囊中馬來酸氯苯那敏含量及含量均勻度[J].?中國(guó)藥業(yè)，?2018，?27（22）：31-33.

[4]魏麗萍，?吳春敏.?HPLC法測(cè)定維C銀翹片中馬來酸氯苯那敏的含量及含量均勻度[J].?中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，?2011，?12（6）：424-427.

[5]羅遠(yuǎn)秀.?速感寧片中馬來酸氯苯那敏定性定量方法的研究[J].?藥物分析雜志，2010（10）：1969-1971.

[6]羅域城，?張帆.?馬來酸氯苯那敏HPLC法測(cè)定條件的優(yōu)化[J].?海峽藥學(xué)，?2011，?23（3）：56-58.

[7]孫素芳，?劉國(guó)瑞，?王喆.?馬來酸氯苯那敏片的HPLC測(cè)定[J].?中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，?2006（9）.

[8]陳波.?安喘片中馬來酸氯苯那敏的含量測(cè)定及溶出度考察[J].?中成藥，?2009，31（12）：1958-1960.

[9]隋譯，?趙明，?許世偉.?HPLC法測(cè)定感冒清片中馬來酸氯苯那敏的含量[J].?中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，?2011，?08（21）：65-66.

[10]劉楊，?賴慶寬.?高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方茶新那敏片中馬來酸氯苯那敏含量[J].?中國(guó)藥業(yè)，?2012，?21（1）：26-27.

[11]江華.?HPLC法測(cè)定復(fù)方沙芬那敏糖漿含量的研究9[J].?國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào)，?2009，?15（8）：67-69.

（收稿日期：2019-08-32?編輯：劉?斌）