高甲基化兒茶素烏龍茶品種的篩選初探

盧秋華 陳志雄 彭建肯 葉章松

引言

茶葉中含有一系列的功效成分已被證實對人體健康有益，特別是兒茶素中EGCG的研究結(jié)果，表明它具備很強的抗氧化性，對心血管及腫瘤有積極的作用。近年來，研究者在茶葉中發(fā)現(xiàn)另一種兒茶素，甲基化兒茶素 （EGCG3"Me和EGCG4"Me）存在于部分茶樹品種中。甲基化 EGCGEGCG3"Me和EGCG4"Me不僅具有顯著的抗過敏和消炎等功效，還具有顯著的降血壓效果，而且效果明顯強于EGCG[1]。日本學(xué)者通過一系列的臨床實驗，發(fā)現(xiàn)含有高含量甲基化兒茶素的綠茶能夠有效緩解花粉過敏癥患者的癥狀，是替代臨床藥物的一種潛力食品[2][3]。

近年來，工業(yè)的快速發(fā)展帶來了我國空氣的嚴(yán)重污染，從而導(dǎo)致我國過敏患者與日俱增。具備抗過敏的茶葉制品受到了廣大過敏患者的歡迎，預(yù)計市場容量將達到3億人以上。國內(nèi)杭州茶科所曾在2013~2014年對我國71個樹種進行甲基化兒茶素的篩選，發(fā)現(xiàn)在華南區(qū)域（福建廣州）存在三個大于10mg/g以上的樹種[4]，然而并沒有進行后續(xù)的制茶及產(chǎn)業(yè)化。廈門茶葉進出口有限公司針對兩岸四地（閩南、閩北、潮汕、臺灣）的甲基化兒茶素烏龍茶樹品種進行篩選，開發(fā)具有抗過敏功效的高甲基化兒茶素烏龍茶產(chǎn)品。

材料與方法

1.儀器與試劑、材料

主要儀器 ：色譜分析條件儀器:Waters 2695高效液相色譜儀。

主要試劑：EGCG4"Me、EGCG3"Me 2種HPLC分析化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品，乙腈（色譜純）等。

材料：潮州單樅-1（山上）、潮州單樅-2（山下）、潮汕宋種-1、潮汕宋種-2、詔安單樅、詔安八仙、漳平烏龍、平和奇蘭、安溪觀音、永春佛手、永春水仙、永春觀音、臺灣烏龍、臺灣金萱、建甌水仙、建陽水仙、武夷水仙、武夷肉桂。

2.實驗方法

茶葉提取液的制備：稱取茶樣1.00g，加人40mL50%乙睛，在 30℃、120r/min振蕩浸提40min，離心 l0min，上清液定容至 25mL，過0.45um微 孔濾膜過濾，即為HPLC分析液。進樣量 10 ml。

色譜條件：X－Terra C18色譜柱 (250 mm×4.6 mm，5μm);流動相 a:10mmoL KH2PO4，pH2.5;流動相b:乙腈（色譜純）;PDA檢測器 柱溫 40°C。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精確稱取EGCG4"Me、EGCG3"Me標(biāo)準(zhǔn)品2.0mg,溶解于1.0ml水中，準(zhǔn)確移取0.1ml稀釋為1.0ml,即為0.2g/l供試液,再配成濃度為 0.2、0.1、0.05、0.01、0.005 和 0.0025g/l的系列標(biāo)準(zhǔn)液,進行HPLC檢測,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

表1 梯度洗脫表

結(jié)果與分析

經(jīng)實驗分析發(fā)現(xiàn)，甲基化兒茶素含量高的茶樹種質(zhì)資源分布具有一定的區(qū)域性特征。通過圖1、圖 2、圖 3 分析：潮州單樅-1（山上）、潮汕宋種-1、潮汕宋種-2、詔安單樅的甲基化兒茶素含量比較高，干重比%＞1%（即 10mg/g）。 潮州單樅-2（山下）雖然沒有超過1%，但是也比其他品種高。就潮州單樅而言，同一地域，甲基化EGCG含量秋季＞春季＞夏季。山上種植的茶葉甲基化EGCG明顯高于山下所種植的。同一品種，不同地域，甲基化EGCG含量也有所不同，就鐵觀音而言，在實驗中發(fā)現(xiàn)，在大葉種的永春佛手，甲基化EGCG極少，甚至沒有檢出。

圖1 春茶甲基化兒茶素含量

圖2 夏茶的甲基化兒茶素含量

圖3 秋茶的甲基化兒茶素含量

結(jié)論

甲基EGCG含量豐富的產(chǎn)品對花粉過敏癥治療效果良好,所以有著非常巨大的潛在消費群體。因此，我們選定了EGCG3"Me含量相對較高的潮州單樅和宋種進行了重復(fù)實驗,結(jié)果與之前的檢測結(jié)果基本一致,較好地達到了在兩岸四地篩選高含量甲基化兒茶素茶樹品種特異資源的目的，以便公司進一步開發(fā)具有抗過敏功效的高甲基化兒茶素烏龍茶產(chǎn)品。