ＨＳ－ＳＰＭＥ－ＧＣ－ＭＳ分析桂枝及蜜桂枝的揮發(fā)性成分

馬銀宇 盧金清 韓蔓

摘要：采用頂空固相微萃取法（HS-SPME）結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）對(duì)桂枝及蜜桂枝揮發(fā)性成分進(jìn)行分析鑒定，用面積歸一化法計(jì)算各成分的相對(duì)百分含量。結(jié)果表明，桂枝生品中檢測(cè)出42個(gè)峰，鑒定出27種成分，占揮發(fā)性成分的75.53%，含量最高的為肉桂醛（42.28%）;從蜜桂枝中檢測(cè)出46個(gè)峰，鑒定出31種成分，占揮發(fā)性成分的86.93%，含量最高的為肉桂醛（61.65%）。桂枝蜜制后揮發(fā)性成分的組成和含量均發(fā)生了變化，在臨床上治療虛寒疼痛方面病癥時(shí)使用蜜桂枝更加適宜。

關(guān)鍵詞：桂枝;蜜桂枝;頂空固相微萃取;氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù);揮發(fā)性成分

中圖分類號(hào)：O657.63;S567.1+2? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2019）23-0185-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.23.046? ? ? ? ? ?開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Analysis of volatile compounds in cassia twig and honey cassia twig by HS-SPME-GC-MS

MA Yin-yu，LU Jin-qing，HAN Man

（Hubei University of Chinese Medicine/Research and Development Center of Medicinal Plant in Hubei Province，Wuhan 430065，China）

Abstract： The volatile components in the cassia twig and honey cassia twig were analyzed by headspace solid-phase micro-extraction （HS-SPME） and gas chromatography-mass spectrometry （GC-MS） techniques. The relative hundred of each component was calculated by area normalization method. The results show that 42 peaks were detected from the raw materials of cassia twig， and 27 components were identified， accounting for 75.53% of the volatile components，the highest content was cinnamaldehyde（42.28%）; 46 peaks were detected from the honey twig， and 31 components were identified， accounting for 86.93% of the volatile components， of which the highest content was cinnamon aldehyde （61.65%）. The total amount of volatile components in honey cassia twig had been increased. The composition and content of the volatile components of the cassia twig were changed，It is more suitable to use honey cassia twig in clinical treatment of deficiency cold pain.

Key words： cassia twig; honey cassia twig; HS-SPME; GC-MS; volatile components.

桂枝為樟科植物肉桂（Cinnamomum cassia Presl）的干燥嫩枝，春、夏二季采收，別名柳桂，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。主要分布于廣東、廣西和云南等地[1]，現(xiàn)在是著名的廣藥之一。桂枝性味辛、甘、溫，歸心、肺、膀胱經(jīng)，具有發(fā)汗解肌、溫通經(jīng)脈和助陽(yáng)化氣等功效[2]?，F(xiàn)代臨床多以桂枝生品入藥，也有蜜桂枝入藥。如《重訂通俗傷寒論》中“桂枝橘皮湯”方即為蜜桂枝入藥。蜜桂枝辛通作用減弱，長(zhǎng)于溫中補(bǔ)虛，散寒止痛[3]。2015年版《中國(guó)藥典》中并未收載蜜桂枝，為合理利用桂枝資源，有必要對(duì)蜜桂枝的物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行研究。目前，筆者未見(jiàn)到國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中有關(guān)運(yùn)用頂空固相微萃取法結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)桂枝及蜜桂枝揮發(fā)性成分進(jìn)行分析的研究報(bào)道。本研究首次利用該法對(duì)桂枝及蜜桂枝的揮發(fā)性成分進(jìn)行分析和比較，旨在從揮發(fā)性成分的角度為臨床合理用藥提供科學(xué)依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 試藥

桂枝藥材購(gòu)于武漢聚草堂藥業(yè)有限公司，經(jīng)湖北中醫(yī)藥大學(xué)鑒定教研室鑒定為樟科植物肉桂的干燥嫩枝。

1.2? 儀器

手動(dòng)固相微萃?。⊿PME）進(jìn)樣裝置（德國(guó)IKA公司）;Agilent6890/5973型氣相-質(zhì)譜-計(jì)算機(jī)聯(lián)用儀（美國(guó)Hewlett-Packard公司）;容積為15 mL的頂空瓶;65 μm聚二甲基硅氧烷-二乙烯基苯（PDMS/DVB）萃取纖維頭（美國(guó)Supelco公司）;JY1002型電子天平（上海浦春計(jì)量?jī)x器有限公司），d=0.01 g。

1.3? 方法

1.3.1? 蜜桂枝的制備? 參照2015版《中國(guó)藥典》四部0213炮制通則中的炮制方法[2]：蜜炙時(shí)，先將煉蜜加適量沸水稀釋后，加入桂枝中拌勻，悶透，置炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒至老黃色，不黏手時(shí)，取出放涼。每100 kg桂枝用煉蜜25 kg。

1.3.2? 頂空固相微萃取條件? 試驗(yàn)時(shí)對(duì)樣品取樣量、平衡溫度、平衡時(shí)間、萃取頭種類、萃取時(shí)間、解吸時(shí)間都做了考察，確定頂空固相微萃取的最佳條件為稱取桂枝粉末樣品0.5 g，置于15 mL固相微萃取儀頂空瓶中，插入裝有65 μm PDMS/DVB萃取纖維頭的手動(dòng)進(jìn)樣器，在120 ℃下平衡10 min后，再壓縮手柄伸出萃取頭萃取15 min，取出，立即插入氣相色譜儀進(jìn)樣口（溫度230 ℃）解吸3 min，不分流進(jìn)樣。蜜桂枝試驗(yàn)條件同上。

1.3.3? GC-MS色譜與質(zhì)譜條件? 色譜條件參照2015版《中國(guó)藥典》[2]，本試驗(yàn)采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)分析樣品的揮發(fā)性成分，屬于定性試驗(yàn)，采用面積歸一化法計(jì)算桂枝及其蜜制品各揮發(fā)性成分的相對(duì)百分含量，通過(guò)相對(duì)峰面積發(fā)現(xiàn)不同物質(zhì)所占揮發(fā)性成分的含量。

GC條件：經(jīng)反復(fù)考察最終確定色譜柱為HP-5MS石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）;升溫程序?yàn)閺?0 ℃開(kāi)始，以30 ℃/min升至150 ℃，再以5 ℃/min升至165 ℃，然后以1 ℃/min升至171 ℃，以10 ℃/min升至177 ℃，最后以30 ℃/min升至230 ℃;載高純度He（99.999%），柱流速0.8 mL/min，進(jìn)樣口溫度230 ℃。

MS條件：EI源;離子源溫度230 ℃，電離電壓70 eV;四級(jí)桿溫度150 ℃;掃描質(zhì)量范圍35～550 m/z。

1.3.4? 重復(fù)性試驗(yàn)? 按“1.3.2”項(xiàng)下條件操作，進(jìn)樣分析，重復(fù)6次，在相同積分條件下，以桂枝生品、蜜制品揮發(fā)性成分的總峰面積為主要考察指標(biāo)，質(zhì)譜鑒定出的化合物種類為輔助指標(biāo)，計(jì)算其RSD均小于2.0%，表明該方法重復(fù)性好，所選萃取條件適合桂枝及其蜜制品揮發(fā)性成分的分析。

2? 結(jié)果與分析

經(jīng)化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理及用面積歸一化法從各總離子流圖中計(jì)算各組分相對(duì)百分含量，按各峰的質(zhì)譜圖經(jīng)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，結(jié)合相對(duì)保留時(shí)間，確定各成分。從桂枝生品中檢測(cè)出42個(gè)峰，鑒定出27種成分，占揮發(fā)性成分的75.53%，其中含量最高的為肉桂醛（42.28%）;從蜜桂枝中檢測(cè)出46個(gè)峰，鑒定出31種成分，占揮發(fā)性成分的86.93%，其中含量最高的為肉桂醛（61.65%）。具體結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2及表1。

3? 討論

研究結(jié)果表明，桂枝及蜜桂枝揮發(fā)性成分的組成和含量均發(fā)生了一定變化，桂枝生品中含量最高的為肉桂醛（42.28%），其次為α-蒎烯、β-石竹烯、d-杜松、1，7，7-三甲基二環(huán)[2.2.1]庚-2-醇等。蜜桂枝中含量最高的為肉桂醛（61.65%），其次為α-蒎烯、（S）-1-甲基-4-（5-甲基-1-亞甲基-4-己烯基）-環(huán)己烯、 β-石竹烯、d-杜松等。與生品相比，蜜桂枝中新增了（S）-1-甲基-4-（5-甲基-1-亞甲基-4-己烯基）-環(huán)己烯、（+）-α-長(zhǎng)葉蒎烯、香豆素等10種成分。桂枝蜜制前后共有的揮發(fā)性成分有：肉桂醛、α-蒎烯、β-石竹烯、d-杜松、1，7，7-三甲基二環(huán)[2.2.1]庚-2-醇、4-甲氧基苯乙烯、5-丁香酚、1，2，4a，5，6，8a六氫-4，7-二甲基-1-（1-甲基乙基）萘等21種，其中肉桂醛的相對(duì)百分含量明顯增加，α-蒎烯和β-石竹烯的相對(duì)百分含量相對(duì)減少。肉桂醛具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗凝血、體外抗菌作用，還具有抗腫瘤和顯著的降血壓功效，可作為食品的天然防腐劑;α-蒎烯具有抗肝癌、抗氧化和抗衰老活性[4-8];β-石竹烯具有抗炎、鎮(zhèn)咳和祛痰等多種藥理活性，還對(duì)蚊蟲(chóng)有一定的趨避作用[9，10]。蜜制后桂枝揮發(fā)性成分總量有所增加，其功效更利于溫中補(bǔ)虛，散寒止痛。在臨床上治療虛寒疼痛方面病癥時(shí)使用蜜桂枝更加適宜。試驗(yàn)從揮發(fā)性成分的角度論證了桂枝及蜜桂枝功效差異的物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)桂枝及蜜桂枝揮發(fā)性成分進(jìn)行比較，為合理利用桂枝資源提供了科學(xué)依據(jù)。

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