荔枝草化學(xué)成分的研究

溫建輝，倪付勇，李 明，謝 雪，王永香，吳 云，王振中，肖 偉?

（1.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇 連云港 222001；2.中藥制藥過程新技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇連云港 222001）

荔枝草為唇形科鼠尾草屬植物荔枝草Salvia plebeiaR.Br.的全草，又名雪見草、蛤蟆草、皺皮草等，主要產(chǎn)自江蘇、浙江、安徽、河南、山東等地，資源豐富，首載于《本草綱目》，其味苦辛、性涼，歸胃、肺、腎經(jīng)，具有清熱解毒、涼血止血、利尿消腫等功效，臨床上主要用于治療扁桃體炎、支氣管炎、崩漏、便血、腎炎水腫、痔瘡腫痛、陰道炎等。荔枝草的化學(xué)成分主要有萜類、黃酮類、苯丙素類及揮發(fā)油類，具有抗菌［1-2］、抗炎［3］、抗氧化［4］、抗腫瘤［5］等藥理活性，本實(shí)驗(yàn)從中分離得到12 個(gè)化合物，其中化合物2、4、6～7、12 為首次從該植物中分離得到。

1 材料

Reveleris 中低壓制備色譜儀（美國(guó)Grace 公司）；AV-400 型核磁共振光譜儀（瑞士Bruker 公司）；AE240 電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo 公司）；Agilent 1290-6538 液質(zhì)聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent公司）；XT-5 顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀（北京科儀電光儀器廠）；ZF-7 型三用紫外分析儀（上海嘉騰科技有限公司）；YMC-C18（粒徑50 μm，日本YMC 公司）；Sephadex LH-20（瑞士Pharmacia 公司）；柱色譜硅膠（200～300 目，青島海洋化工有限公司）；D-101型大孔吸附樹脂（天津海光化工有限公司）。95%乙醇（食用級(jí)，連云港長(zhǎng)和酒業(yè)有限公司）；水（三蒸水，自制）；甲醇（色譜純，瑞典Oceanpak公司）；石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇均為分析純（南京化學(xué)試劑有限公司）。

藥材于2015 年3 月購(gòu)自安徽亳州藥材市場(chǎng)，經(jīng)連云港康濟(jì)大藥房連鎖有限公司吳舟執(zhí)業(yè)藥師鑒定為荔枝草Salvia plebeiaR.Br.全草，標(biāo)本（20150301）保存于江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司標(biāo)本室。

2 提取與分離

荔枝草干燥全草15 kg 用水加熱回流提取2次，分別為2、1 h，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.05～1.10（25 ℃），離心，上清液經(jīng)D101 大孔樹脂，以水、15%、45%、75%、95%乙醇梯度洗脫，分別收集各洗脫液濃縮、凍干，分別得到相應(yīng)洗脫部位312、408、396、213、106 g。取荔枝草75%乙醇洗脫部位100 g，經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇（100∶0～0∶100）梯度洗脫，TLC 檢識(shí)合并得7 個(gè)部分（Frs.1～7），F(xiàn)rs.1 經(jīng)Sephadex LH-20 柱，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫純化，得化 合 物9（11 mg）、10（3.2 g）、11（468 mg）；Frs.3 經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫純化，再經(jīng)制備液相，以60% 乙腈為洗脫劑，得化合物2（14 mg）、3（16 mg）、6（23 mg）、12（19 mg）；Frs.4 經(jīng)Sephadex LH-20 柱，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫純化，再經(jīng)制備液相，以45%乙腈為洗脫劑，得化合物5（15 mg）；Frs.5 經(jīng)Sephadex LH-20 柱，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫純化，再經(jīng)制備液相，以35%乙腈為洗脫劑，得化合物1（13 mg）、4（18 mg）；Frs.6 經(jīng)Sephadex LH-20柱，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫純化，再經(jīng)制備液相色譜，以5% 乙腈為洗脫劑，得化合物7（16 mg）、8（13 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色粉末（甲醇），ESI-MSm／z：181.0 ［M+H］+。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.46（1H，d，J=15.8 Hz，H-7），7.02（1H，d，J=2.0 Hz，H-2），6.90（1H，dd，J=8.2，1.9 Hz，H-6），6.76（1H，d，J=8.1 Hz，H-5），6.23（1H，d，J=15.9 Hz，H-8）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：170.8（C-9），147.8（C-4），147.6（C-3），147.5（C-8），124.9（C-1），122.8（C-6），117.8（C-7），116.8（C-5），115.3（C-2）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］一致，故鑒定為反式咖啡酸。

化合物2：無(wú)色針狀結(jié)晶（甲醇），ESI-MSm／z：121.0 ［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：8.00（2H，m，H-3，5），7.57（1H，tt，J=1.4，8.7 Hz，H-4），7.48（2H，t，J=7.5 Hz，H-2，6）；13CNMR（100 MHz，CD3OD）δ：170.1（-COOH），132.0（C-1），134.0（C-4），130.7（C-2，6），129.4（C-3，5）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］一致，故鑒定為苯甲酸。

化合物3：無(wú)色針狀晶體（甲醇），mp 235～237 ℃，ESI-MSm／z：169.0 ［M-H］-1。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.07（2H，s，H-2，6）；13CNMR（100 MHz，CD3OD）δ：170.4（-COOH），146.4（C-3，5），139.6（C-4），122.2（C-1），110.5（C-2，6）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］一致，故鑒定為沒食子酸。

化合物4：白色粉末，ESI-MSm／z：193.0［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.58（1H，d，J=15.9 Hz，H-7），7.16（1H，d，J=1.9 Hz，H-2），7.08（1H，dd，J=1.9，8.2 Hz，H-6），6.80（1H，d，J=8.2 Hz，H-5），6.30（1H，d，J=15.9 Hz，H-8），3.88（3H，s，3-OCH3）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：171.1（-COOH），146.8（C-7），150.5（C-4），149.4（C-3），127.8（C-1），124.0（C-8），116.5（C-6），116.1（C-5），111.7（C-2），56.4（3-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］一致，故鑒定為阿魏酸。

化合物5：白色粉末；ESI-MSm／z：455.4［M-H］-1。1H-NMR（400 MHz，C5D5N）δ：0.88（3H，s，H-26），0.94（3H，d，J=6.5 Hz，H-29），0.99（3H，d，J=6.5 Hz，H-30），1.02（3H，s，H-23），1.05（3H，s，H-24），1.22（3H，s，H-25），1.24（3H，s，H-27），3.45（1H，dd，J=10.0，6.0 Hz，H-3），5.49（1H，t，J=2.5 Hz，H-12）；13CNMR（100 MHz，C5d5N）δ：39.1（C-1），28.2（C-2），78.2（C-3），39.4（C-4），55.9（C-5），18.8（C-6），33.6（C-7），40.0（C-8），48.1（C-9），37.3（C-10），23.7（C-11），125.7（C-12），139.3（C-13），42.5（C-14），28.7（C-15），24.9（C-16），48.1（C-17），53.6（C-18），39.4（C-19），39.5（C-20），31.1（C-21），37.5（C-22），28.9（C-23），16.6（C-24），15.7（C-25），17.5（C-26），24.0（C-27），180.0（C-28），17.6（C-29），21.5（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］一致，故鑒定為烏蘇酸。

化合物6：淺黃色粉末，ESI-MSm／z：179.2［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，CD3OD），δ：6.18（1H，d，J=15.9 Hz，H-8），6.76（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），6.92（1H，dd，J=2.1，8.4 Hz，H-6），7.01（1H，d，J=2.0 Hz，H-2），7.52（1H，d，J=16.0 Hz，H-7）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：127.9（C-1），115.6（C-2），146.8（C-3），149.3（C-4），116.6（C-5），122.8（C-6），147.0（C-7），115.0（C-8），171.2（C-9）。以 上 數(shù) 據(jù) 與 文 獻(xiàn)［10］報(bào)道一致，故鑒定為咖啡酸。

化合物7：白色粉末，ESI-MSm／z：125.1［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.58（1H，brs，-NH），11.00（1H，brs，-NH），7.25（1H，J=5.0 Hz，H-6），1.72（3H，s，H-7）；13CNMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：165.4（C-4），152.0（C-2），138.2（C-6），108.1（C-5），12.3（C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］一致，故鑒定為胸腺嘧啶。

化合物8：白色粉末，mp 240～243 ℃，ESIMSm／z：282.2 ［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.67（1H，s，NH-1），7.93（1H，s，H-8），6.48（2H，s，-NH2），5.69（1H，d，J=5.9 Hz，H-1′），4.39（1H，t，J=5.3 Hz，H-2′），4.08（1H，brs，H-3′），3.87（1H，d，J=3.4 Hz，H-4′），3.61（1H，dd，J=11.8，3.4 Hz，H-5′a），3.52（1H，dd，J=11.8，3.4 Hz，H-5′b）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：157.3（C-6），154.2（C-2），151.8（C-4），136.0（C-8），117.1（C-5），86.8（C-1′），85.6（C-4′），74.2（C-3′），70.8（C-2′），61.9（C-5′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］一致，故鑒定為鳥嘌呤核苷。

化合物9：黃色粉末。ESI-MSm／z：269.2［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：6.78（1H，s，H-3），12.96（1H，s，5-OH），6.17（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.47（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），7.92（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′），6.91（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，5′）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：164.4（C-2），103.0（C-3），182.0（C-4），161.6（C-5），99.0（C-6），163.9（C-7），94.7（C-8），157.5（C-9），103.9（C-10），121.4（C-1′），128.7（C-2′，6′），116.2（C-3′，5′），161.4（C-4′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］一致，故鑒定為芹菜素。

化合物10：黃色簇狀結(jié)晶（甲醇），mp 238～240 ℃，ESI-MSm／z：425.4 ［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：3.75（3H，s，-OCH3），7.01（1H，s，H-8），6.86（1H，s，H-3），6.93（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，H-5′），7.92（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，H-6′），12.95（1H，s，OH-5），10.42（1H，s，OH-4′），5.11（1H，d，J=5.2 Hz，H-1″），3.29～3.75（6H，m，H-2″～6″）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：60.3（-OCH3），164.3（C-2），102.7（C-3），182.2（C-4），152.1（C-5），132.5（C-6），156.5（C-7），94.3（C-8），152.4（C-9），105.7（C-10），121.1（C-1′），128.6（C-2′，6′），116.0（C-3′，5′），161.4C-4′），100.2（C-1″），73.2（C-2″），77.3（C-3″），69.5（C-4″），76.7（C-5″），60.6（C-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］一致，故鑒定為高車前苷。

化合物11：黃色粉末，ESI-MSm／z：315.3［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：13.05（1H，s，5-OH），7.40（1H，dd，J=2.0，8.1 Hz，H-6′），7.35（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.85（1H，d，J=8.0 Hz，H-5′），6.63（1H，s，H-8），6.52（1H，s，H-3），3.70（3H，s，6-OCH3）；13CNMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：163.9（C-2），102.4（C-3），182.0（C-4），152.2（C-5），131.2（C-6），157.2（C-7），94.0（C-8），152.8（C-9），104.0（C-10），121.5（C-1′），113.2（C-2′），149.6（C-3′），145.7（C-4′），116.0（C-5′），118.9（C-6′），59.9（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］一致，故鑒定為澤蘭黃酮。

化合物12：無(wú)色針晶（氯仿），mp 170～172 ℃，ESI-MSm／z：151.2 ［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：9.84（1H，m，1-CHO），7.44（1H，m，H-2，6），7.06（1H，m，H-5），6.39（1H，dd，J=16.0，11.0 Hz，4-OH），3.97（2H，m，3-OCH3）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：190.9（1-CHO），151.7（C-4），147.2（C-3），129.9（C-1），127.5（C-6），114.4（C-5），108.8（C-2），56.1（3-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］一致，故鑒定為香草醛。

4 討論

荔枝草作為民間常用藥材主要用于治療咽炎、扁桃體炎、氣管炎等疾病且效果顯著；據(jù)《四川中藥志》記載，荔枝草具有清肺熱、除風(fēng)濕、治咳嗽、痢疾、牙痛、癢疹及瘡毒等功效。近年來隨著對(duì)荔枝草的深入研究，發(fā)現(xiàn)其具有廣泛的藥理活性，極具臨床應(yīng)用價(jià)值，師梅梅等［17］通過荔枝草提取物對(duì)大鼠肝線粒體損傷保護(hù)作用研究表明，其可有效抑制線粒體的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)和線粒體膨脹，降低蛋白質(zhì)羰基量，恢復(fù)ATP 酶的活性，清除線粒體中產(chǎn)生的，且呈量效關(guān)系；楊澤華等［1］研究表明，荔枝草乙酸乙酯、正丁醇萃取部位在體外對(duì)金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌具有良好的抑制作用；郭秋言等［18］發(fā)現(xiàn)，荔枝草醇提物質(zhì)量濃度為675 μg／mL時(shí)能明顯抑制單純皰疹病毒Ⅰ型（HSV-1）所致的CPE 產(chǎn)生，具有良好的藥理活性；孔慶新等［19］利用氨水刺激建立慢性咽炎大鼠模型后用不同濃度的荔枝草乙酸乙酯提取物灌胃治療一段時(shí)間后，通過行為觀察、咽部病理學(xué)觀察及酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其可顯著改善咽部的病理形態(tài)學(xué)表現(xiàn)。

荔枝草資源豐富，分布廣泛，除甘肅、新疆、青海、西藏外在全國(guó)各省均有分布［20］，許多中醫(yī)名著如《江西民間草藥驗(yàn)方》《集效方》等有荔枝草治療咽喉痛、痔瘡、犬傷及破傷風(fēng)的記載，現(xiàn)代臨床上用于治療帶狀皰疹［21-22］、小兒急性腎炎［23］、支氣管炎［24］等，其作為保健茶開發(fā)也有報(bào)道［25-26］。然而，作為一種傳統(tǒng)藥材，2015 年版《中國(guó)藥典》并未將荔枝草收錄其中，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、藥物代謝動(dòng)力學(xué)、藥效學(xué)及安全性評(píng)價(jià)均有待于完善，因此，課題組通過對(duì)荔枝草化學(xué)成分的研究，制備含有量高于98%的單體化合物，為下一步藥理藥效的開展及指紋圖譜的建立提供物質(zhì)基礎(chǔ)。