苞葉雪蓮化學(xué)成分的研究

蘆永昌，辛青霞，李 欣，任梅娟，趙 英，李海麗

（1.青海民族大學(xué)藥學(xué)院，青海 西寧 810007；2.青海省青藏高原植物資源化學(xué)研究重點實驗室，青海 西寧 810007；3.青海省藥物分析重點實驗室，青海 西寧 810007）

苞葉雪蓮Saussurea obvallata（DC）Edgew.為風(fēng)毛菊屬雪蓮亞屬植物，藏藥名為煞杜果古。生長在海拔 4 500～5 800 m 高山草甸。產(chǎn)于青海、西藏、四川西部、云南西北部等地［1］。其性味苦、寒。具有清熱解毒、祛風(fēng)除濕、通經(jīng)活血之功。主治癲痛、中風(fēng)、癲狂、麻風(fēng)等［2］。但目前對其化學(xué)成分方面研究較少，為了進一步確定其活性成分，對苞葉雪蓮化學(xué)成分進行研究。從苞葉雪蓮乙醇提取物中分離鑒定了10 個化合物，所有化合物均為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

高效液相色譜儀、高效液相制備色譜儀（美國Agilent 公司）；CombiFlash 中壓快速制備色譜儀（美國 Teledyne Isco 公司）；UV-2401 型紫外可見分光光度計、IR Prestige-21 型傅里葉（日本島津公司）；Avance Ⅱ 400 Bruker Biospin 核磁共振波譜儀（德國 Bruker 公司）；Bruker Avance 500 MHz 型核磁共振波譜儀（德國Bruker 公司）；薄層層析、柱色譜硅膠G（青島海洋化工廠）；葡聚糖凝膠LH-20（瑞士 Pharmacia 公司）；大孔吸附樹脂 AB-8（南開大學(xué)化工廠）。

實驗用藏藥苞葉雪蓮于2014年8月采自青海省海南州貴德縣拉脊山，由青海民族大學(xué)藥學(xué)院毛繼祖教授鑒定為正品。

2 提取與分離

將苞葉雪蓮藥材3.5 kg 粉碎，浸泡在一定體積的95%乙醇中24 h，用紗布過濾，取上清液旋蒸成浸膏后；重復(fù)3 次，將3 次所得的浸膏合并，得到浸膏①。繼續(xù)將95%乙醇浸泡過的濾渣放入65%乙醇浸泡24 h，用紗布過濾，取上清液旋蒸成浸膏后；重復(fù)3 次，將3 次所得的浸膏合并，得到浸膏②。繼續(xù)將65%乙醇浸泡過的濾渣放入去離子水中浸泡24 h，用紗布過濾，取上清液旋蒸成浸膏后；重復(fù) 3 次，將 3 次所得的浸膏合并，得到浸膏③。將①②③合并得到總浸膏，用適量的水溶解。置于2 000 mL 的分液漏斗中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水相萃取物，并分別濃縮，得總浸膏700 g。

總浸膏加適量水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收各溶劑，分別得到石油醚部位 20 g、乙酸乙酯部位 24 g、正丁醇部位 39 g、水部位543 g。石油醚部位經(jīng)正相硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯（100 ∶1、50 ∶1、20 ∶1、10 ∶1、5 ∶1、1 ∶1）梯度洗脫，薄層色譜檢測，再經(jīng)葡聚糖凝膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯（20 ∶1）洗脫，石油醚重結(jié)晶，得化合物1；再經(jīng)正相硅膠柱，葡聚糖凝膠柱純化，石油醚-乙酸乙酯（10 ∶1）洗脫得化合物2；乙酸乙酯部位經(jīng)正相硅膠柱色譜，氯仿 ∶甲醇（100 ∶1、50 ∶1、20 ∶1、10 ∶1、5 ∶1、1 ∶1、純甲醇）梯度洗脫，經(jīng)正相硅膠柱，氯仿 ∶甲醇（10 ∶1）洗脫，制備液相色譜，得化合物 3～4；正丁醇相經(jīng) MCI 反相色譜柱，甲醇 ∶水梯度洗脫，再經(jīng)全制備液相色譜，得化合物5～6；將10%進行全制備液相色譜，得化合物7～9；將50%冷卻結(jié)晶，得化合物10。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1：無色針狀結(jié)晶，mp 136～137 ℃。1HNMR（500 MHz，CDCl3）δ：5.35（1H，brd），3.52（1H，m），1.01（3H，s），0.97（3H，d，J= 6.5 Hz），0.86（3H，d，J= 6.0 Hz），0.83（3H，d，J= 6.5 Hz），0.82（3H，d，J= 6.5 Hz），0.72（3H，s）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：37.8（C-1），32.3（C-2），71.3（C-3），43.4（C-4），142.（C-5），121.2（C-6），32.6（C-7），32.3（C-8），50.5（C-9），36.9（C-10），21.3（C-11），40.0（C-12），42.5（C-13），56.8（C-14），24.5（C-15），28.6（C-16），56.3（C-17），12.2（C-18），20.0（C-19），36.4（C-20），19.7（C-21），34.2（C-22），26.4（C-23），46.0（C-24），29.4（C-25），18.9（C-26），19.2（C-27），23.3（C-28），12.2（C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻［3］基本一致，由此判斷該化合物為甾醇或萜類化合物。與β-谷甾醇對照品共薄層Rf 值及顯色行為一致，與對照品混合后熔點不下降，故鑒定為β-谷甾醇。

化合物 2：白色顆粒狀（丙酮結(jié)晶），mp 67.5～69 ℃。溴甲酚綠顯黃色。EI-MSm／z：368［M］＋。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：0.88（3H，t，J= 6.3 Hz，-CH3），1.20～1.40（40H，m，-CH2），2.25（2H，t，J=7.9 Hz，-CH2-COOH）；13C-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：180.0（C-1），34.3（C-2），25.0（C-3），23.0（C-23），14.4（C-24）。以上數(shù)據(jù)與文獻［4］基本一致，故鑒定為二十四烷酸。

化合物 3：黃色粉末，mp 303～304 ℃，365 nm紫外光下黃色熒光，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽性，F(xiàn)eCl3反應(yīng) 呈 陽 性。ESI-MSm／z：301.0［M-H］-。1HNMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：12.48（1H，s，5-OH），10.76（1H，s，7-OH），9.57（1H，d，J= 2.2 Hz，H-2′），7.53（1H，dd，J= 2.2 Hz，H-6′），6.87（1H，d，J= 8.5 Hz，H-5′），6.40（1H，d，J= 2.0 Hz，H-8），6.18（1H，d，J=2.0 Hz，H-6）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：93.3（C-6′），98.2（C-8），115.0（C-2′），l15.6（C-5′），103.0（C-10 ），119.9（C-6′），121.9（C-1′），135.7（C-3），145.0（C-3′），146.8（C-2），147.7（C-4′），156.1（C-5），160.7（C-9），163.8（C-7），175.8（C-4）。以上數(shù)據(jù)與文獻［5］基本一致，故鑒定為槲皮素。

化合物 4：黃色小針狀晶體；mp 185～188 ℃。鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，Molish 反應(yīng)陽性。由其1HNMR 和13C - NMR 可知為黃酮黃酮類化合物。1HNMR（DMSO-d6）δ：6.20（1H，d，J= 1.5 Hz，H-6），6.39（1H，d，J= 1.5 Hz，H-8），7.53（1H，d，J= 2.0 Hz，H-2′），6.84（1H，d，J=8.0 Hz，H - 5′），7.54（1H，dd，J= 8.0，2.0 Hz，H-6′），5.33（1H，d，J= 8.0 Hz，H-1″），4.38（1H，brs，H-1″），1.07（3H，d，J= 6.0，-CH3）；13C-NMR（DMSO-d6）δ：156.5（C-2），133.3（C-3），177.4（C-4），161.3（C-5），98.7（C-6），164.1（C-7），93.7（C-8），156.7（C-9），104.0（C-10），121.2（C-1′），115.3（C-2′），144.8（C-3′），148.5（C-4′），116.3（C-5′），121.7（C-6′），101.2（C-1″），74.1（C-2″），76.5（C-3″），70.4（C-4″），75.9（C-5″），67.1（C-6″），100.8（C-1 ?），70.0（C-2?），70.6（C-3 ?），71.9（C-4?），68.3（C-5?），17.8（C -6 ?）。以上數(shù)據(jù)與文獻［6］基本一致，故鑒定為蘆丁。

化合物 5：半水合物為針狀結(jié)晶（水），mp 205～209 ℃，ESI-MSm／z：100～1 900［MH］-。1H-NMR 7.51（1 H，d，J= 15 Hz），6.20（1H，d，J= 15 Hz），顯示為反式烯烴的質(zhì)子；7.11（1 H，d，J=2.1 Hz），6.96（1 H，dd，J=2.1，8.2 Hz），6.79（1 H，d，J=8.2 Hz），為苯環(huán)三取代的 ABX 體系；5.21（1H，m），4.04（1H，m），3.49（1H，m），2.11～1.59（2H，m）；13CNMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：125.5，115.7，148.3，144.9，114.7，121.3 分別為苯環(huán)上 1～6位上碳的化學(xué)位移；145.5，114.2 分別為 7 和 8位上烯基碳的化學(xué)位移；165.6 為9 位上酯基碳的化學(xué)位移；73.4，37.1，68.0，70.8，70.3，36.2分別為六元環(huán)上 1′～6′位上碳的化學(xué)位移；174.8為7′位上羧基碳的化學(xué)位移，以上數(shù)據(jù)與文獻［7］基本一致，故鑒定為綠原酸。

化合物 6：黃色粉末（甲醇），1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）：12.96（1H，s，5-OH），7.40（1H，dd，J= 8.0，2.0 Hz，H-5′），7.38（1H，d，J=2.0 Hz，H-3′），6.86（1H，d，J=8.0 Hz，H-6′），6.64（1H，s，H-3），6.48（1H，d，J=1.9 Hz，H-8），6.19（1H，d，J=1.9 Hz，H-6）；13C-NMR（DMSO-d6）δ：181.8（C-4），164.2（C-7），164.0（C-2），161.5（C-5），157.4（C-9），149.8（C-4′），145.8（C-3′），121.5（C-1′），119.1（C-6′），116.1（C-5′），113.4（C-2′），103.8（C-10），102.9（C-3），98.9（C-6），93.9（C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻［8］基本一致，故鑒定為木犀草素。

化合物 7：黃色針晶（甲醇），mp 345～347 ℃。鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽性，Molish 反應(yīng)陰性。ESI-MSm／z：270［M］＋。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）：6.82（1H，s，H-3），6.19（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），6.45（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），7.92（2H，d，J=8.7 Hz，H-2′，6′），6.91（2H，d，J=8.7 Hz，H-3′，5′），12.97（1H，s，5-OH）；13C-NMR（DMSO-d6）δ：164.5（C-2 ），102.9（C-3 ），181.9（C-4），157.8（C-5），98.9（C-6），164.0（C-7），94.3（C-8），161.6（C-9），103.9（C-10），121.2（C-1′），128.8（C-2′），116.1（C-3′），161.3（C-4′），116.1（C-5′），128.8（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻［9］基本一致，故鑒定為洋芹素。

化合物 8：黃色粉末（甲醇結(jié)晶）mp 193～195 ℃，365 nm 紫外光下顯黃色熒光，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽性，F(xiàn)eCl3反應(yīng)呈陽性，Molish 反應(yīng)陽性。ESI-MSm／z：447.0［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：12.65（1H，s，5-OH ），10.85（1H，s，7-OH），9.69（1H，s，3′-OH），9.32（1H，s，4′-OH），7.30（1H，d，J=2.1 Hz，H-2′），7.25（1H，dd，J= 2.1，8.1 Hz，H-6′），6.87（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.39（1H，d，J=2.1 Hz，H-8），6.21（1H，d，J=2.1 Hz，H-6），5.25（1H，d，J= 1.5 Hz，H-1″糖端基質(zhì)子），3.11～3.52（5H，m，H-2″～6″糖環(huán)上質(zhì)子），0.82（3H，d，J=5.7 Hz，C-CH3）；13C-NMR（300 MHz，DMSO-d6）δ：156.6C-2），133.7（C-3），177.6（C-4），161.4（C-5），98.9（C-6），164.3（C-7），93.7（C-8），156.5（C-9），104.0（C-10），121.2（C-1′），116.1（C-2′），145.0（C-3′），148.6（C-4′），116.1（C-5′），122.1（C-6′），103.0（C-1″），71.3（C-2″），73.7（C-3″），68.2（C-4″），73.2（C-5″），65.3（C-6″），100.2 C-1?），70.8（C-2?），70.6（C-3 ?），72.0（C-4?），68.4（C-5 ?），18.1（C-6?）。以上數(shù)據(jù)與文獻［10］基本一致，故鑒定為槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖。

化合物 9：黃色粉末（甲醇），mp 266～267 ℃。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：12.72（1H，s，5-OH），7.58（1H，d，J= 2.1 Hz，H-2′），7.57（1H，dd，J= 8.0，2.1 Hz，H-6′），6.84（1H，d，J= 8.0 Hz，H-5′），6.51（1H，s，H-8），5.46（1H，d，J= 7.4 Hz，Glu-H-1），3.75（3H，s，6-OCH3）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：156.3（C-2），133.0（C-3），177.7（C-4），152.3（C-5），131.3（C-6），157.5（C-7），93.8（C-8），151.5（C-9），104.3（C-10），121.6（C-1），115.2（C-2），144.8（C-3），148.4（C-4），I16.2（C-5），121.2（C-6），100.9（C-1″），74.1（C-2″），76.5（C-3″），69.9（C-4″），77.5（C-5″），61.0（C-6″），60.0（6-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［11］基本一致，故鑒定為萬壽菊素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物 10：無色針狀晶體（甲醇）mp 180～182 ℃，ESI-MSm／z：395［M ＋ Na］＋；1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.75（2H，brs，H-3，5），6.55（1H，d，J= 16.0 Hz，，H-7），6.33（1H，dt，J= 16.0，5.5 Hz，H-8），4.87（1H，d，J= 7.0 Hz，H-1′），4.22（2H，dd，J= 5.5，1.5 Hz，H-9），3.86（6H，s，2，6-OCH3），3.78（1H，dd，J=12.0，2.5 Hz，H-6′a），3.67（1H，dd，J=12.0，5.5 Hz，H-6′b），3.21～3.48（4H，m，H-2′-5′）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：135.4（C-1），154.4（C-2，6），105.6（C-3，5），131.4（C-4），136.1（C-7），130.2（C-8），63.7（C-9），105.5（C-1′），75.9（C-2′），78.0（C-3′），71.5（C-4′），78.5（C-5′），62.7（C-6′），57.2（-OCH3×2）。以上數(shù)據(jù)與文獻［12］基本一致，故鑒定為紫丁香苷。

4 討論

本實驗從苞葉雪蓮乙醇提取物中分離得到10個化合物，而且均是首次從苞葉雪蓮中分離得到，以期拓展對其物質(zhì)基礎(chǔ)的認識，為合理有效的開發(fā)利用該資源提供科學(xué)依據(jù)。

苞葉雪蓮性味苦、寒，這與其所含化合物的生物活性有一定關(guān)系，其中化合物10 的作用機制可能是它不僅能夠調(diào)節(jié)人體免疫系統(tǒng)，而且能夠抑制細胞因子TNF-α 的產(chǎn)生和細胞毒素T cell 增殖。一旦體內(nèi)細胞因子失去了平衡就會產(chǎn)生大量炎癥因子，且這些炎癥因子與風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有直接的聯(lián)系。還報道紫丁香苷可能是通過進入人體后水解成芥子醇發(fā)揮藥效作用，推測其可能是苞葉雪蓮表現(xiàn)出苦寒藥性的主要成分之一［13］。此外，同科植物天山雪蓮的化學(xué)成分研究報道其含有蘆丁、槲皮素、紫丁香苷、芹菜素等化合物［14］。苞葉雪蓮中綠原酸和蘆丁具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利膽、抗腫瘤、降血壓、降血脂、清除自由基和興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等作用［15］，但這些活性是否與苞葉雪蓮抗風(fēng)濕及寒屬性相關(guān)仍需進一步探討。