梭砂貝母鱗莖組織培養(yǎng)研究

歐珠朗杰 米瑪潘多 孫澤韌

摘 要 以梭砂貝母鱗莖為外植體，研究梭砂貝母組織培養(yǎng)中不同種類和濃度的植物生長調節(jié)劑對愈傷組織的誘導效果。從多個濃度梯度組合中探尋出適合梭砂貝母組織生長愈傷的最佳種類和濃度。結果表明，適宜誘導梭砂貝母鱗莖的植物生長調節(jié)劑組合及濃度為MS+NAA（0.5 mg·L-1）+6-BA（1.5 mg·L-1），這一結果為梭砂貝母組培擴繁工作提供了技術參數。

關鍵詞 梭沙貝母;鱗莖;植物生長調節(jié)劑;組織培養(yǎng)

中圖分類號：S 文獻標志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.27.067

梭砂貝母（Fritillaria delavayi Franch.）屬百合科（Liliaceae）貝母屬（Fritillaria），藏語為阿皮卡，是百合科多年生草本植物[1]。梭砂貝母又名爐貝，鱗莖外表白色或淺黃棕色，有些具棕色斑點。梭砂貝母在西藏有廣泛出產，四川省西部、云南省西北部和青海省南部也均有出產[2]，具有潤肺清熱、化痰等功效。梭砂貝母價值高、藥效好，但其繁殖系數低、生長環(huán)境特殊、分布分散。隨著市場上對梭砂貝母的需求量增大，其生長環(huán)境和種群自然更新遭到了破壞，致使梭砂貝母資源陷入匱乏[3]。

為了縮短生長周期，提高無性繁殖系數，加強對野生資源的保護和利用，應從外植體的消毒方式、植物生長調節(jié)劑的組合及濃度配比等方面探索梭砂貝母的無性繁殖技術[4]。這一研究有利于梭砂貝母資源及其棲息地的環(huán)境保護，能夠有效緩解資源利用與環(huán)境保護的矛盾，對解決藥材供需矛盾和保護瀕危藏藥材種質資源具有一定的現(xiàn)實意義[5]。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

2019年8月，在西藏山南地區(qū)扎囊縣念薩村海拔4 500 m的高山滑坡巖縫中采集梭砂貝母。從其鱗莖中選取無病害乳白色鱗莖進行實驗室無菌處理，并切成適宜大小的鱗莖小塊接種于不同種類、不同濃度植物生長調劑的培養(yǎng)基上進行調控培養(yǎng)。

1.2 實驗方法

1.2.1 植物生長調節(jié)劑的選擇與組合配比設計

以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基加入30 g·L-1的蔗糖、

7 g·L-1的瓊脂，pH指調至5.8，添加不同濃度的6-芐基氨基嘌呤（6-BA）、萘乙酸（NAA）[6]，以備外植體的接種。如表1所示，對6-BA和NAA分別設置4個梯度、16個組合進行外植體接種。

1.2.2 外植體的選擇與消毒

選取外植體的最適宜時間為每年夏末，以梭砂貝母花謝結果時的鱗莖作為外植體效果較好，其中尤以新鱗莖最佳[7]。應先刮除鱗片上的栓皮和褐色部分，以乳白色為佳，再用自來水長時間沖洗干凈并用適宜的消毒液進行消毒[8]。

在接種之前用75%酒精擦洗超凈工作臺，鱗莖整體充分清洗后移入超凈工作臺，在滅菌的濾紙上切成0.5 cm3大小的接種塊[9]，用75%酒精浸泡材料30 s，用0.1%氯化汞浸泡10 min，再轉入到無菌水中漂洗4次后取出材料放到無菌紙上吸干用于接種[5]。

1.2.3 滅菌

培養(yǎng)基和接種器具在121 ℃、0.15×106 MPa的高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌20 min。滅菌結束冷卻后取出培養(yǎng)基并放置在培養(yǎng)箱中，48 h后無污染的用于接種[10]。

1.2.4 接種

接種前30 min打開超凈工作臺紫外燈，滅菌的培養(yǎng)瓶和接種器具放入超凈工作臺內，用75%酒精擦拭工作臺桌面及內壁，30 min后關閉紫外燈，把接種用外植體移入超凈工作臺，在酒精燈火焰上方嚴格規(guī)范操作，直至切好的外植體植入培養(yǎng)瓶中，一般一個培養(yǎng)瓶植入3～4個適當大小的外植體。

1.2.5 培養(yǎng)

接種后的培養(yǎng)基在溫度為22 ℃、空氣相對濕度為50%～60%的光照培養(yǎng)箱內培養(yǎng)25 d，每天光照時間為10 h、光照強度為1 500 Lx[11]。

2 結果與分析

在添加了不同濃度植物激素的MS組合培養(yǎng)基上接種培養(yǎng)梭砂貝母鱗莖，其愈傷組織的誘導結果存在明顯差異，結果如表2所示。Aa、Ba、Bb、Bc、Cb、Cc、Cd、Da、Db、Dc、Dd組合均不能形成愈傷組織，Ab、Ad、Bd、Ca組合能夠誘導出少量的愈傷組織，Ac組合能形成豐富愈傷組織。因此，適合誘導梭砂貝母鱗莖愈傷組織的培養(yǎng)基為MS+NAA（0.5 mg·L-1）+6-BA（1.5 mg·L-1），其愈傷組織及分化幼苗如圖1所示。

3 結論

本研究以梭砂貝母的鱗莖為外植體，研究6-芐基氨基嘌呤（6-BA）和萘乙酸（NAA）的不同濃度組合對愈傷組織的誘導效果，為克服梭砂貝母組織培養(yǎng)與擴繁試驗的盲目性提供了依據，并為解決梭砂貝母原料的供求矛盾及其資源的合理開發(fā)和保護做出了基礎性工作。

參考文獻：

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[11] 王躍華，江明珠，何詩虹，等.川貝母組培苗快速繁殖研究[J].四川師范大學學報（自然版），2013，36（6）：941-944.

（責任編輯：趙中正）