微柱凝膠卡法在配血不符受血者抗體篩檢及鑒定中的應(yīng)用

潘曉紅

交叉配血試驗(yàn)是確保輸血安全的重要環(huán)節(jié)之一。鹽水法、抗人球蛋白法作為以往臨床常用交叉配血方法，存在一定缺陷，具有操作復(fù)雜、檢測時(shí)間常長、敏感性低、干擾因素較多等缺點(diǎn)，對(duì)輸血者生命安全造成嚴(yán)重危害［1］。因此實(shí)施一種敏感性較高、耗時(shí)短且安全可靠的交叉配血方法至關(guān)重要。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，MGT作為免疫血清學(xué)技術(shù)與微柱凝膠技術(shù)結(jié)合產(chǎn)物，可有效彌補(bǔ)上述交叉配血方法的不足，保障輸血安全［2］。本研究選取2890例輸血患者作為研究對(duì)象，旨在研究MGT在在配血不符受血者抗體篩檢及鑒定中的臨床應(yīng)用效果?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年9月～2018年8月本院收治的2890例輸血患者作為研究對(duì)象。其中, 男1980例, 女910例；年齡19～76歲, 平均年齡(48.32±9.24)歲。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn), 且患者及其家屬均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑與儀器 由深圳市康乃格生物技術(shù)有限公司提供的微柱凝膠卡器械(孵育箱、離心機(jī)), 由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供的改良凝聚胺試劑。

1.2.2 標(biāo)本要求 均采用EDTA抗凝管(由上海新睿生物科技有限公司提供), 并以3000 r/min進(jìn)行離心分離。

1.2.3 MPT法 取2支小試管(干凈、無污染), 1支標(biāo)明主側(cè)為血清(受血者)+紅細(xì)胞(獻(xiàn)血者), 另1支標(biāo)明次側(cè)為血清(獻(xiàn)血者)+紅細(xì)胞(受血者), 依照標(biāo)記主側(cè)管滴50 μl受血者血清+1滴獻(xiàn)血者紅細(xì)胞懸液+3滴低離子介質(zhì), 混勻,靜態(tài)放置0.5 min；次側(cè)管滴1滴血清(獻(xiàn)血者)+50 μl紅細(xì)胞懸液(受血者)+3滴低離子介質(zhì), 混勻, 靜態(tài)放置0.5 min。主次側(cè)管均加入1滴凝聚胺, 混勻, 離心時(shí)間15 s, 3500 r/min,扣搖；待出現(xiàn)明顯凝聚狀(肉眼可見), 于管底加入1滴假凝集清除液, 輕輕搖晃, 持續(xù)60 s, 接著將反應(yīng)物置于載玻片上,利用顯微鏡對(duì)其進(jìn)行觀察, 其中陰性為無凝集者；陽性為60 s內(nèi)凝集無法被清除者。

1.2.4 MGT法 將按規(guī)定保存的配血卡取出, 放進(jìn)專業(yè)離心機(jī)進(jìn)行離心分離, 時(shí)間為15 min, 然后取2支小試管(干凈、無污染), 1支標(biāo)明主側(cè)為血清(受血者)+紅細(xì)胞(獻(xiàn)血者), 另1支標(biāo)明次側(cè)為血清(獻(xiàn)血者)+紅細(xì)胞(受血者),依照標(biāo)記主側(cè)管加受血者血清(50 μl)+獻(xiàn)血者紅細(xì)胞懸液(0.5%～0.8%), 次側(cè)管加獻(xiàn)血者血清(50 μl)+受血者紅細(xì)胞懸液(0.5%～0.8%), 放入孵育箱(37℃)孵育0.25 h后離心(900 r/min,離心時(shí)間2 min；1500 r/min, 離心時(shí)間3 min)。肉眼可見條件下,陰性：紅細(xì)胞均勻沉于孔底；陽性：紅細(xì)胞懸浮于微柱凝膠表面。

1.3 觀察指標(biāo) ①兩種檢測方法不規(guī)則抗體篩檢結(jié)果。②兩種檢測方法檢出交叉配血不合情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測方法不規(guī)則抗體篩檢結(jié)果比較 MGT法篩檢出不規(guī)則抗體11例, 不規(guī)則抗體篩檢率為0.38%；MPT法篩檢出不規(guī)則抗體8例, 不規(guī)則抗體篩檢率為0.28%, 兩種方法不規(guī)則抗體篩檢率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.475,P=0.491＞0.05)。見表 1。

2.2 兩種檢測方法檢出交叉配血不合情況比較 MGT法檢出交叉配血不合率為0.97%(28/2890), 明顯高于MPT法的0.52%(15/2890), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (χ2=3.960,P=0.047＜0.05)。

3 討論

不規(guī)則抗體檢查作為引發(fā)交叉配血不相合主要原因，是指與ABO血型法則不相符的血型抗體，多為免疫球蛋白G(IgG)抗體，其產(chǎn)生與輸血、妊娠等免疫刺激有關(guān)，若無法有效檢出不規(guī)則抗體，易誘發(fā)溶血性輸血反應(yīng)，威脅患者生命安全。因此實(shí)施準(zhǔn)確性較高檢測方法對(duì)保證患者生命安全具有重要意義［3］。

MPT通過紅細(xì)胞血型抗原及抗體大分子聚合物，可有效削弱靜電斥力(紅細(xì)胞)，促進(jìn)分子加快運(yùn)動(dòng)，輔助紅細(xì)胞血型抗原聯(lián)合相應(yīng)抗體，同時(shí)借助機(jī)械離心作用，呈現(xiàn)出凝集狀(肉眼可見)，由于特異性免疫凝集因子對(duì)附加假凝集消除液敏感度較低，因此凝集狀維持時(shí)間較長，可檢出免疫球蛋白M(IgM)或IgG等相應(yīng)抗體或抗原。但由于MPT法為純手工操作，過程較為復(fù)雜，后期無法進(jìn)行復(fù)讀，同時(shí)其影響因素較多 ，易忽視較弱凝集 ，影響判定結(jié)果［4］。

MGT法可有效克服MPT法缺點(diǎn)，其主要通過于微孔內(nèi)(注有凝膠)加入血清與紅細(xì)胞懸液，根據(jù)分子排阻原理于特定離心下對(duì)血液中紅細(xì)胞免疫復(fù)合物是否形成、是否含有特異性抗體等進(jìn)行檢測，從而獲得判定結(jié)果。相較于MPT法，其敏感性更好，具有操作簡單、誤差少、可重復(fù)性高、自動(dòng)化檢測、保存時(shí)間長等顯著優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，其選取紅細(xì)胞懸液含量較少，可有效用于新生兒與大面積燒傷等抗體篩檢及交叉配血，另外其離心前將標(biāo)本放入孵育箱，可有效減少或消除冷抗體影響，提高篩檢準(zhǔn)確性［5-8］。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MGT法篩檢出不規(guī)則抗體11例，不規(guī)則抗體篩檢率為0.38%；MPT法篩檢出不規(guī)則抗體8例，不規(guī)則抗體篩檢率為0.28%，兩種方法不規(guī)則抗體篩檢率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (χ2=0.475，P=0.491＞0.05)。MGT 法檢出交叉配血不合率為0.97%(28/2890)，明顯高于MPT法的0.52%(15/2890)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.960，P=0.047＜0.05)。上述結(jié)果提示MGT法應(yīng)用于配血不符受血者，不規(guī)則抗體篩檢率及安全性較高。

綜上所述，MGT法應(yīng)用于配血不符受血者，安全性較高，具有抗體篩檢率較高、操作簡單、保存時(shí)間長等顯著優(yōu)點(diǎn)，可有效用于配血不符受血者的篩檢與鑒定。