豬鉤端螺旋體病的診斷與防控措施

李天芝，于新友

（山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

鉤端螺旋體簡稱鉤體，在世界范圍內(nèi)廣泛存在，尤其是在熱帶、亞熱帶地區(qū)江河、湖泊、沼澤、池塘、水田中長期存活[1]?？煞譃橹虏⌒秃透蛢纱箢怺2]，其中致病型可感染豬、牛、羊、貓、鼠、狗、鴨、鵝、蛙等多種動(dòng)物，也可以感染人，是一種人獸共患病原體，引起鉤端螺旋體病。該病是一種自然疫源性傳染病[3]。世界衛(wèi)生組織將其列為重點(diǎn)防范的傳染病，我國將其列為法定報(bào)告?zhèn)魅静　?800年，首次出現(xiàn)鉤體病記載，1888年得到證實(shí)，1916年以后，德國、法國、意大利、英格蘭等相繼發(fā)生過此病，并分離到病原體，我國于1934年首次報(bào)道該鉤體病，目前是鉤體病的主要疫區(qū)之一[4]。

豬是鉤體的主要傳染源之一，豬鉤體病感染率高，發(fā)病率低，臨床表現(xiàn)為高熱、貧血、黃疸、血紅蛋白尿、流產(chǎn)及水腫等[5]，一旦傳入豬群，很難根除。鉤體可分為250多種不同血清型，不同血清型對豬致病性不同，各血清型之間交叉保護(hù)力弱。一年四季均可發(fā)病，夏秋季節(jié)多發(fā)。各品種和日齡豬均可感染，幼齡仔豬及妊娠母豬受到的危害較嚴(yán)重[6]。耐過豬預(yù)后不良，生長發(fā)育緩慢，造成飼料報(bào)酬下降，給

養(yǎng)豬業(yè)帶來極大的經(jīng)濟(jì)損失。流行病學(xué)調(diào)查表明，豬鉤體病在我國流行廣泛，危害嚴(yán)重，豬鉤體病相關(guān)研究的深入開展，不僅對養(yǎng)豬業(yè)，也對公共衛(wèi)生安全具有重要意義。本文主要介紹了鉤端螺旋體病的病原學(xué)、流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化、診斷及防控措施，以期為該病的診斷及防控提供參考。

1 病原學(xué)

鉤體為細(xì)螺旋體科細(xì)螺旋體屬，是一種介于細(xì)菌和原蟲之間的病原微生物，也是一種廣義上的細(xì)菌。鉤體形態(tài)纖細(xì)，呈圓柱狀，長約6～20 μm，直徑約1～2 μm[7]，至少有18個(gè)致密而規(guī)則的螺旋。鉤體中央為原生質(zhì)柱體，外有2根軸絲纏繞，由與肽聚糖細(xì)胞壁緊密結(jié)合的細(xì)胞膜包繞，并覆蓋一層主要成分為脂多糖的外膜。鉤體無鞭毛，在液體環(huán)境下，能翻轉(zhuǎn)、屈伸或沿長軸旋轉(zhuǎn)快速前進(jìn)，使菌體呈“8”字、“丁”字、C、S、O等多種形狀，兩端柔軟，有較強(qiáng)的穿透力[8]。暗視野顯微鏡下觀察，呈細(xì)長串珠樣，革蘭氏染色陰性，但很難著色，姬姆薩染色為紅色或藍(lán)色，鍍銀染色法染成棕褐色[9]。鉤體可分為兩大類，即有致病性的問號鉤體和無致病性的雙曲鉤體，前者為單鉤，后者為雙鉤。致病型鉤體有25種血清群，190種血清型，我國存在18種血清群，70種血清型，引起豬鉤體病的血清型有波摩娜型、犬型、黃疽出血型、流感傷寒型、哈爾喬型、豬型，我國以波摩娜型和犬型為主。

鉤體對外界環(huán)境有一定抵抗力，在池塘、沼澤、水田、淤泥中能存活數(shù)月，鉤體不能在海水中長期存活，在自來水中能生存5 d。陽光直射和干燥環(huán)境鉤體迅速死亡，對酸堿環(huán)境抵抗力弱[10]。常規(guī)消毒劑70%酒精、2%鹽酸、漂白粉、1%石炭酸、0.25%甲醛溶液可殺滅病原，45℃ 30 min、50℃ 10 min、60℃ 10 s即可致死。

鉤體生長對營養(yǎng)要求不高，需氧，分離培養(yǎng)時(shí)可用含10%滅活兔血清的柯氏培養(yǎng)基。最佳生長溫度為28～30℃，最適生長pH為7.2～7.4。液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)1～2周后，可見培養(yǎng)基先出現(xiàn)半透明、云霧狀渾濁，后變?yōu)橥该?，底部有沉淀。固體培養(yǎng)時(shí)可見光滑、透明、大小不等、緊貼于瓊脂表面的菲薄菌落。鉤體不發(fā)酵糖類、不分解蛋白質(zhì)，氧化酶和過氧化氫酶均為陽性，某些菌株能產(chǎn)生溶血素。多種抗生素如青霉素、鏈霉素、慶大霉素、土霉素、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素、金霉素等都對鉤體具有很好的殺滅作用。

2 流行病學(xué)

鉤體廣泛存在于自然界中，氣候溫暖、濕潤的熱帶、亞熱帶地區(qū)尤為常見，能感染豬、牛、羊、馬、狗、貓、兔、鼠、鴨、雞、鵝、麻雀、蛙、蛇、蜥蜴、龜?shù)榷喾N動(dòng)物，引起發(fā)病，也可感染人，是一種人獸共患病原菌。病豬、帶菌豬及鼠類是主要傳染源[11]。豬帶菌期長達(dá)1年以上，鼠類可終生帶菌、排菌。各品種和日齡豬均可感染，妊娠母豬和仔豬受到的危害最嚴(yán)重。妊娠母豬主要表現(xiàn)為流產(chǎn)、死胎及產(chǎn)弱仔。該病既能水平傳播，又能垂直傳播，如通過破損的皮膚、黏膜及消化道傳播，也可通過交配、人工授精傳播，菌血癥時(shí)期能通過吸血的蚊、蠅、虱等傳播。

該病有明顯的季節(jié)性，7～9月份高發(fā)，一般多散發(fā)，呈地方流行性。該病很少出現(xiàn)全場大范圍暴發(fā)，首次發(fā)病后，會(huì)暫時(shí)趨于平靜，經(jīng)5～50 d左右再度暴發(fā)流行，一般不會(huì)連續(xù)暴發(fā)，流行發(fā)病曲線呈階梯式。此外，很少見到在一個(gè)場內(nèi)發(fā)病后，波及到絕大部分或整個(gè)畜群的例子。鉤體在宿主體內(nèi)主要存在于腎臟、尿液和脊髓液里。鉤體在急性發(fā)熱期，廣泛存在于血液和各內(nèi)臟器官，通過尿液、糞便等排出，污染飲水、飼料、土壤、圈舍、用具等，感染其它健康動(dòng)物。人主要通過接觸被污染的疫水而感染。鉤體侵入動(dòng)物機(jī)體后，經(jīng)過約2～20 d的潛伏期，出現(xiàn)7～8 d的菌血癥期，動(dòng)物出現(xiàn)發(fā)熱，鉤體進(jìn)入肝、腎、腦脊液、生殖道、眼睛等多種組織器官，在腎臟中大量增殖，隨尿液排出體外，排菌期2～3個(gè)月，排菌量大，1 mL尿液中可含菌1億個(gè)以上。

3 臨床癥狀

不同血清型鉤體對豬致病性不同，豬只病情的嚴(yán)重程度也與其自身抵抗力及侵入機(jī)體的鉤體量有一定關(guān)系。總體來說感染率高，發(fā)病率低，大部分癥狀輕。病程短則1～2 d，長的可達(dá)2周以上。

急性黃疸型中、大豬，表現(xiàn)為發(fā)熱、黃疸、厭食、皮膚干燥，偶見豬在圈舍或欄桿上摩擦出血，后肢無力，全身震顫，可視黏膜黃染，茶色尿或血尿，常突然驚厥死亡，病死率高，病程1～2 d。亞急性及慢性型斷奶仔豬和保育豬多發(fā)，也常由急性型轉(zhuǎn)化而來，臨床表現(xiàn)為精神不振，被毛粗亂無光澤，食欲減退，飲欲增加，體溫升高，喜離群獨(dú)臥，眼結(jié)膜潮紅、腫脹，鼻孔流漿液，呼吸急促，走路后軀搖擺，上下頜、頭、頸部浮腫，指壓凹陷，不易恢復(fù)，俗稱“大頭瘟”，尿發(fā)黃或血紅蛋白尿，糞便干稀交替，個(gè)別病例病程長達(dá)1個(gè)月，易繼發(fā)感染，豬舍有特殊腥臭味，康復(fù)豬生長緩慢，成為僵豬。

妊娠母豬表現(xiàn)為流產(chǎn)、死胎和產(chǎn)弱仔，妊娠不足1月的母豬，常在鉤體感染后4～7 d發(fā)生流產(chǎn)，流產(chǎn)率高達(dá)70%，流產(chǎn)前體溫微升高，鼻鏡干燥，眼屎多，死胎皮膚表面有出血點(diǎn)，剖檢可見內(nèi)臟器官黃染，弱仔不能站立，移動(dòng)時(shí)呈游泳狀，不會(huì)吸乳，1～2 d內(nèi)死亡，產(chǎn)后母豬少乳或無乳。

4 病理變化

剖檢可見皮膚、皮下組織、漿膜和黏膜有不同程度黃疸，心包和胸腔有黃色積液，胸肋膜和腹膜黃染，心內(nèi)膜出血，大腸出血，尤以盲腸、結(jié)腸出血嚴(yán)重，膀胱出血、積茶色尿，有時(shí)見褐色絮狀物，肝臟腫大，黃染，質(zhì)脆、易碎，膽囊腫大、膽汁濃稠，腎臟腫大，腎皮質(zhì)與腎盂周圍出血，皮質(zhì)表面有白色壞死點(diǎn)，頭頸部水腫，膀胱黏膜出血，皮下水腫，腸系膜水腫，胃壁水腫，氣管周圍組織水腫，脾臟腫大、淤血、有紫黑色梗死灶，肺臟黃染或有出血點(diǎn)。

5 診斷

根據(jù)流行情況、臨床癥狀及特征性病變可作出初步診斷，需要注意的是，需和一些類似的疾病作出鑒別診斷，如豬水腫病、豬蛔蟲病、豬黃脂病，黃曲霉毒素中毒、豬附紅細(xì)胞體病等。豬水腫病由致病性大腸桿菌產(chǎn)生的毒素引起，有運(yùn)動(dòng)失調(diào)、驚厥、麻痹等神經(jīng)癥狀，一般可見眼瞼、頭部皮下及下頜水腫，剖檢可見胃壁、腸系膜等膠凍樣水腫，腸黏膜出血。豬患蛔蟲病，3～6月齡仔豬多發(fā)，生長發(fā)育不良，被毛粗亂，體溫一般不高，咳嗽、嘔吐、流涎，蟲體阻塞膽道，膽汁排出受阻，使全身出現(xiàn)黃疸變化。剖檢膽道、腸道可見蟲體，肝臟出血、壞死，有云霧狀蛔蟲斑，糞便檢查有蟲卵。豬黃脂病多因飼喂含大量易酸敗的魚粉、豆餅、米糠等高脂肪飼料或機(jī)體維生素E缺乏引起，皮下及腹腔脂肪尤其是腎周、下腹、耳根脂肪呈黃色或黃褐色，具有魚腥味，骨骼肌、心肌呈灰白色，肝臟呈黃褐色，脂肪變性，淋巴結(jié)腫脹、水腫，腎臟呈灰紅色，胃腸黏膜出血，體溫正常，頭頸部不水腫，尿液中不能檢測到鉤體[12]。黃曲霉毒素中毒因采食被黃曲霉毒素污染的飼料引起，病豬臨床表現(xiàn)為皮膚發(fā)黃、嘔吐、腹瀉、呆立、昏睡、孕豬流產(chǎn)。剖檢有肝臟發(fā)黃、黃疸等病變，但肝臟觸片、鍍銀染色不能檢出鉤體。豬附紅細(xì)胞體病皮膚發(fā)紅，毛孔滲血、貧血、黃疸，肛門及眼周圍發(fā)青，茶色尿。剖檢一般血液稀薄、凝固不良，胸、腹、心包積水，心肌蒼白、松弛，肝臟棕黃色，膽囊膨脹，充滿膠樣膽汁，脾臟呈黑色。

如要確診可采用實(shí)驗(yàn)室方法檢測，最常用的實(shí)驗(yàn)室檢測方法有顯微鏡檢、鉤體分離培養(yǎng)、動(dòng)物接種試驗(yàn)、血清學(xué)檢測及分子生物學(xué)檢測等方法。進(jìn)行鏡檢及鉤體分離培養(yǎng)時(shí)一定要選取正確的病料樣本以提高檢出率，選取未經(jīng)抗生素治療的病豬，病豬死前高熱期宜采集血液，中、后期采集中段尿液或腦脊液，病豬死亡后應(yīng)1 h內(nèi)采集腎臟、肝臟，病料觸片、干燥后，姬姆薩或鍍銀染色法進(jìn)行檢查，檢測時(shí)可采集尿液或血液5 mL，血液中加入10%體積的1%草酸鈉抗凝，當(dāng)樣品為肝、腎時(shí)采集組織1 g，后用滅菌生理鹽水制成1∶5懸液，1 500 r/min離心5 min，取上清液再以4 000 r/min離心1 h進(jìn)行集菌，取沉淀物涂片、染色、鏡檢。暗視野顯微鏡檢可見串珠樣能運(yùn)動(dòng)的鉤體，姬姆薩或鍍銀染色后更易分辨。分離培養(yǎng)時(shí)尿液樣品加入100 μg/mL的新霉素除菌，或無菌采集肝、腎等病料組織塊，于培養(yǎng)基管壁上研磨成糊狀，加入培養(yǎng)基中，常選用含10%血清的柯氏培養(yǎng)基，最好現(xiàn)用現(xiàn)配，4℃保存不超過1星期，28～30 ℃溫箱中培養(yǎng)，5～10 d觀察 1次，不同鉤體的生長速度不同，快的7 d即可見培養(yǎng)基渾濁，慢的可能需延長培養(yǎng)基至3個(gè)月。動(dòng)物接種試驗(yàn)用抗凝血2～3 mL、尿原液15 mL或10%組織懸液2～3 mL，腹腔接種于體重為150～200 g豚鼠，1 mL/只，并設(shè)置對照組，接種24 h后試驗(yàn)組豚鼠發(fā)熱、厭食、皮膚黏膜及眼結(jié)膜黃染、血紅蛋白尿，一般120 h內(nèi)全部死亡。剖檢可見肝腎腫大，膀胱積茶色尿，肝腎涂片鏡檢可見鉤體。對疑似疫水的檢測可將豚鼠除毛后，浸泡其中30 min，觀察豚鼠發(fā)病者為陽性。

鉤體感染5～10 d后血清中即檢出抗體，21 d達(dá)高峰，后下降。血清學(xué)檢測是診斷豬只鉤體感染的一種重要方法，主要包括凝集溶解試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）及間接熒光抗體法等。凝集溶解試驗(yàn)是鉤體血清學(xué)檢測的常用方法，也是血清分型方法，待檢血清按一定比例稀釋后，與鉤體標(biāo)準(zhǔn)菌株或當(dāng)?shù)爻Ｒ娋?7℃作用2 h，暗視野顯微鏡檢，可見“小蜘蛛狀”凝集的鉤體，凝集效價(jià)1∶800以上判為陽性，凝集后菌體裂解成碎片，但血清效價(jià)高時(shí)無溶解現(xiàn)象，1∶400以下者兩周后再次采血檢測，效價(jià)增高4倍者判為陽性。ELISA適于大量血清樣品檢測，用于早期診斷，較凝集溶解試驗(yàn)敏感性高，不能區(qū)分血清型，制備的包被抗原可長期保存，但我國尚無商品化檢測試劑盒。間接熒光抗體法是將鉤體標(biāo)準(zhǔn)株涂片，取待檢血清滴于玻片上，洗滌后，加抗動(dòng)物球蛋白熒光抗體，鏡檢，有熒光者即為陽性，否則為陰性，但該法無型特異性，較凝集溶解試驗(yàn)法能更早檢出抗體，對該病早期診斷具有重要意義。

分子生物學(xué)檢測尤其是熒光PCR檢測方法目前已經(jīng)廣泛用于多種疾病檢測。臨床應(yīng)用檢測速度快、敏感性高、特異性好，對臨床病料檢測效果好。LAMP檢測方法適合基層實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用，但檢測敏感性太高，有時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

6 防控措施

實(shí)行自繁自養(yǎng)全進(jìn)全出的飼養(yǎng)模式，減少引種，引種時(shí)隔離1個(gè)月以上，并進(jìn)行相關(guān)檢測，合格后，方可并入大群飼養(yǎng)。飼喂優(yōu)質(zhì)全價(jià)配合飼料，不飼喂霉變飼料，提供干凈飲水，水線定期消毒，飲水中添加葡萄糖、維生素C等以提高豬只抵抗力。豬舍衛(wèi)生保持清潔衛(wèi)生，糞尿及墊料集中發(fā)酵處理，定期通風(fēng)，降低氨氣濃度，采取一定防暑降溫及保暖措施，每周消毒2次，豬舍保持干燥，減少外來人員進(jìn)場次數(shù)，進(jìn)場前根據(jù)不同情況做一定時(shí)期的隔離，并按流程進(jìn)行洗澡、換衣等。飼養(yǎng)管理人員嚴(yán)禁串舍，豬場清除雜草，清除積水，做好防蚊蠅等工作。鼠類在鉤體傳播過程中起著非常關(guān)鍵的作用，嚴(yán)防鼠類污染豬場水源，可在豬場周圍鋪設(shè)1 m寬尖石子路，防止鼠類進(jìn)入豬場，豬場投放1%安妥、2%鼠敵等滅鼠藥或請一些專業(yè)滅鼠公司[13]。豬場內(nèi)禁養(yǎng)貓、狗等，防范外來狗和貓等進(jìn)入豬場，豬場遠(yuǎn)離牛、羊飼養(yǎng)場，設(shè)防鳥網(wǎng)或做安裝超聲波驅(qū)鳥設(shè)備。做好豬瘟等疾病的疫苗免疫接種工作提高豬群抵抗力和抗應(yīng)激能力。

豬場發(fā)病后，病死豬、流產(chǎn)胎兒及墊料、糞尿等做好焚燒、深埋等無害化處理，病豬隔離、淘汰，場地、用具、設(shè)備嚴(yán)格消毒。發(fā)病早期可選用青霉素和鏈霉素進(jìn)行治療，堅(jiān)持連續(xù)用藥1周以消除腎臟中的鉤體。鉤體血清型眾多，康復(fù)豬對同型鉤體具有持久免疫保護(hù)作用，但能長期帶菌排菌。國外有商品化豬鉤體多聯(lián)滅活疫苗，包含犬型、感冒傷寒型、哈爾喬型、黃疸出血型、波摩娜型、伯拉弟斯拉瓦等不同血清型，免疫后能對各種不同型鉤體發(fā)揮良好免疫作用，鉤體的體液免疫起主要作用，目前尚無鉤體活疫苗。我國無商品化鉤體疫苗，進(jìn)口產(chǎn)品中有犬用鉤體滅活疫苗，但只包括犬型和黃疸出血型兩種，無豬用進(jìn)口鉤體疫苗。

由于鉤體是一種人獸共患病原體，也可以感染人，因此，生豬飼養(yǎng)管理人員及相關(guān)從業(yè)工作者一定要做好自身防護(hù)，避免眼、嘴唇等黏膜以及破損的皮膚接觸豬尿液，防止被感染。水田、水塘等受污染疫水在人鉤體傳播過程中也起著非常重要的作用，人們接觸疫水時(shí)一定要做好自身防護(hù)。

7 小結(jié)

鉤體廣泛存在于自然界中，種類繁多，能感染豬等多種動(dòng)物，康復(fù)豬能長期帶菌排菌。在潮濕外界環(huán)境中尤其是水中長期存活，也能感染人，是一種人獸共患病原菌，因此具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。豬場飼養(yǎng)員及相關(guān)技術(shù)人員一定要重視該病的危害，做好自身防控，減少或避免與污水接觸的機(jī)會(huì)，避免被感染。

我國尚雖無豬鉤體病預(yù)防用疫苗，但鉤體對青霉素、鏈霉素等多種抗生素敏感，尤其是發(fā)病初期堅(jiān)持連續(xù)用藥1周，治療效果較好。但因豬鉤體感染率高、發(fā)病率低，臨床上報(bào)道少，長期不被重視，即使發(fā)病也不能早期診斷、對癥治療，貽誤最佳治療時(shí)機(jī)，給養(yǎng)殖場造成大的損失。平時(shí)應(yīng)加強(qiáng)豬群飼養(yǎng)管理，搞好環(huán)境衛(wèi)生，做好豬場生物安全措施，做好常規(guī)消毒，降低豬鉤體病發(fā)病概率。