適配體在毒品毒物分析中的實踐探索

摘要：所謂適配體，主要是指通過體外合成，可以與蛋白質(zhì)、其他小分子物質(zhì)等配體進(jìn)行特異結(jié)合單鏈DNA和RNA，主要是通過SELEX篩選技術(shù)來獲得的。就適配體本身的優(yōu)勢特征而言，具有針對靶標(biāo)的高特異性以及親和性、化學(xué)穩(wěn)定、不存在免疫原性以及毒副作用。本文基于適配體，探討如何將其應(yīng)用于毒品毒物分析中，以供參考。

關(guān)鍵詞：適配體;毒品毒物分析;實踐探索

通過適配體自身存在的優(yōu)勢，充分利用其特點為生物識別分子，將其使用在傳感器和分析試紙中，能夠在最快時間內(nèi)檢測出存在的毒品毒物，有利于提升相關(guān)工作人員的辦案效率，為國家、社會的穩(wěn)定發(fā)展提供一定的技術(shù)支持。下文對此進(jìn)行簡單分析。

1 概述SELEX篩選技術(shù)原理

整個篩選過程是由隨機(jī)選擇的單鏈寡核苷酸庫來開始的，在篩選DNA適配體過程中，單鏈寡核苷酸庫可直接應(yīng)用在SELEX篩選過程中的第一步，將DNA庫或RNA庫結(jié)合其中的靶分子，然后進(jìn)行沖洗工作，使其出現(xiàn)的結(jié)合復(fù)合物，與結(jié)合較弱或沒有結(jié)合的寡核氨酸處于分離狀態(tài)，隨之，洗掉原來與靶分子結(jié)合的寡核苷酸，在利用PCR或RTPCR進(jìn)行有效擴(kuò)增，將通過體外進(jìn)行轉(zhuǎn)錄或者是單鏈DNA與純化合成RNA實施純化提煉，將其制造成雙鏈DNA，隨著形成一個嶄新的寡核苷酸庫，利用擴(kuò)增和篩選的循環(huán)，隨機(jī)狀態(tài)下存在的寡核苷酸庫也隨之變得很少，以此同時針對靶分子具有較高的特異性和親和性，一般情況下，進(jìn)行篩選適配體的階段中需要SELEX循環(huán)的次數(shù)約為6-20次。

2 分析毒品毒物中存在的適配體實踐探索

自上世紀(jì)八十年代以來，全球毒品讀物犯罪活動逐漸增多，因此關(guān)于毒品檢測方面的問題需要加快進(jìn)行。

其一，通過將原本能夠在體外合成的SSDNA轉(zhuǎn)為附在瓊脂糖凝膠顆粒上，其次對這種附在瓊脂糖凝膠顆粒上的SSDNA與其相融的DNA分子實行固相與表面分離，并通過熒光檢測方法進(jìn)行檢測，篩選效率結(jié)果高達(dá)62.1%，并且針對甲胺磷核酸能夠得到5條適配體。

其二，蛤蚌毒素（STX）核酸適體在篩選的過程中，需要經(jīng)過至少十次以上的篩選過程，其中第四輪第十輪的篩選方式利用JeffamineKLH進(jìn)行反篩，最終得到擁有特異識別性質(zhì)的蛤蚌毒素（STX）核酸適體。經(jīng)過對其中一條隨意選取的適體實行SPR檢測，其檢測結(jié)果顯示結(jié)合率優(yōu)良，不存在交叉反應(yīng)情況[1]。

其三，于1997年Anniron報道在RNA適體進(jìn)行檢測過程中，其中檢測結(jié)果顯示多巴胺測出為2.8umol/L。

其四，陸鑫蔚等其他人，通過對SELEX篩選技術(shù)的使用，能有篩選出來具有特異性識別甲基苯丙胺的適配體，然后根據(jù)適配體為基礎(chǔ)，將生物識別分子充分運用到有關(guān)試劑盒中或者是傳染器等方式，以上幾種方式具有體型小、攜帶方便的優(yōu)勢特征，能夠有效應(yīng)用于案發(fā)現(xiàn)場中，以便于刑事案件相關(guān)工作人員開展檢測工作能夠更加快速有效。

其五，建立電化學(xué)傳感器平臺，這個平臺主要用于可卡因的檢測。若靶分子處于存在狀態(tài)下，適配體就有很大可能折疊成結(jié)合位點，這時候氧化還原探針與電極表面兩者之間距離縮小，電子傳遞也因此得到相應(yīng)的改變，而且還加大了能夠?qū)嵭袡z測的亞甲基藍(lán)還原峰。

其六，使可卡因和與其相類似的愛康寧二者之間實行分離。如果樣品種含有可卡因適配體，將形成復(fù)合物，能夠促使其中處于游離狀態(tài)的可卡因數(shù)量降低，同時在毛細(xì)管中，復(fù)合物與處于游離狀態(tài)下的可卡因會呈現(xiàn)分離的狀態(tài)，這種情況下可卡因本身峰將會底下，此外，適配體不會與愛康寧產(chǎn)生反應(yīng)，這時候峰將不會發(fā)生變化，由此能夠得出，當(dāng)可卡因峰降低時，能夠?qū)崿F(xiàn)進(jìn)一步的八項識別，同時能夠確保定量檢測的準(zhǔn)確性，而此時，檢測限為2umol/L。

其七，通過試紙樣平臺對可卡因進(jìn)行相關(guān)監(jiān)測，這種平臺具有一定的測流技術(shù)，充分利用可卡因適配體以及上訴已經(jīng)闡述的腺苷用來制造新型的試紙，使用可卡因檢驗檢測的方法將人體血清進(jìn)行樣本檢測，對試紙進(jìn)行改進(jìn)，形成能夠快速檢測試劑盒，應(yīng)用于犯罪現(xiàn)場，另外適配體與靶標(biāo)兩者之間存在較高的特異性以及親和性特征，能夠促使適配體在面對識別分子時，進(jìn)行有效、靈敏以及快速性的毒品讀物檢測[2]。

其八，除以上幾點之外，初步將可識別氯胺酮的適配體進(jìn)行有效篩選，同時還對其中存在的親和性以及特異性等進(jìn)行表現(xiàn)，進(jìn)一步顯示出該適配體與美沙芬、美沙酮之間將不存在交叉反應(yīng)的現(xiàn)象，所以該適配體能夠起到識別分子的作用，可以制成試劑盒，這樣做可對現(xiàn)場進(jìn)行最快時間檢測，與此同時也在很大程度上提升檢測準(zhǔn)確度。

3 對適配體在毒品毒物分析領(lǐng)域的展望

其一，根據(jù)識別小分子中存在特異性這一形態(tài)而言，篩選毒品毒物中存在的核酸適配體，SELEX篩選開始于單鏈寡核苷酸庫中含有單鏈核苷酸的數(shù)量約為1015個至1016個，而且組成單鏈寡核苷酸的序列是隨機(jī)合成，若隨機(jī)出現(xiàn)偏離情況，就會使得整個序列空間出現(xiàn)歪曲情況，因此也就對能否與靶分子高特異性進(jìn)行結(jié)合的適配體捕獲有一定的限制性，通過以上足以說明寡核苷酸庫在其中重要性。

其二，在進(jìn)行毒品毒物快速檢測方式研發(fā)過程中，利用適配體作為生物識別分子引入其中。從整體上來講，能夠在犯罪現(xiàn)場最快時間、最準(zhǔn)確檢測其中存在的毒品毒物，有利于提升相關(guān)人員的辦案工作成效。而適配體對靶分子而言，其中具有很高的特異性、親和性以及能夠有效超過抗體的使用性特征，以上幾種特征促使適配體可應(yīng)用于傳感器以及分析試紙中。

4 總結(jié)

綜上所述，本文首先概述SELEX篩選技術(shù)原理，分析適配體在毒品毒物中的實踐，最后提出對對適配體在毒品毒物分析領(lǐng)域的展望，旨在針對毒品毒物分析提出更好的適配體檢測，為我國社會發(fā)展、國家穩(wěn)定貢獻(xiàn)一份力量。

參考文獻(xiàn)：

[1]曾玲，蔡能斌，PAWLOWSKANatalia，等.核酸適配體識別技術(shù)在法醫(yī)毒物分析中的應(yīng)用[J].刑事技術(shù)，2017，42（1）：5260.

[2]王宇田，曲晗，郝良玉，等.基于核酸適配體SERS技術(shù)快速檢測大腸埃希菌O157：H7的研究[J].中國病原生物學(xué)雜志，2018（1）：1621.

作者簡介：曹錚（1988），男，漢族，陜西子洲人，工學(xué)學(xué)士學(xué)位，工程師，研究方向：毒品檢驗。