核桃青皮化學(xué)成分及其抗腫瘤活性研究

殷田田，石偉峰，閆福林*

1新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院三全學(xué)院藥學(xué)院，新鄉(xiāng) 453003； 2河南中杰藥業(yè)有限公司，新鄉(xiāng) 453000

核桃青皮，又稱青龍衣，為胡桃科植物核桃(JuglansregiaL.)和核桃楸(J.mandshuricaMaxim.)的未成熟果皮[1]。我國(guó)核桃資源豐富，除河南外，在河北、山東、東北等省份都有分布。核桃青皮辛、苦、澀、有毒、微寒，具有清熱、解毒、治痢、明目、抗腫瘤等作用，因而具有較大的醫(yī)藥應(yīng)用價(jià)值[2]。但迄今為止，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)核桃青皮有效成分的系統(tǒng)研究不多，往往更關(guān)注經(jīng)濟(jì)價(jià)值最高的果實(shí)部分，而核桃外面的果皮部分常被忽略，核桃成熟期間，大量青皮常作為垃圾被堆放在地頭，造成環(huán)境污染及資源浪費(fèi)。如能搞清楚核桃青皮的化學(xué)成分，加以綜合開發(fā)利用，不僅可以保護(hù)環(huán)境，還可以增加經(jīng)濟(jì)收入[3]。為了進(jìn)一步了解不同產(chǎn)地的核桃青皮的化學(xué)成分，探討其藥用價(jià)值，本實(shí)驗(yàn)對(duì)采自河南省洛陽(yáng)市嵩縣車村鎮(zhèn)的核桃青皮的化學(xué)成分進(jìn)行研究，從中分離得到13個(gè)化合物，分別鑒定為：3,5-二甲氧基-4-羥基-苯甲酸-7-O-β-D-葡萄糖苷(1)、myricananinF(2)、β-谷甾醇(3)、齊墩果酸(4)、核桃酮(5)、積雪草酸(6)、常春藤皂苷元(7)、β-胡蘿卜苷(8)、 (4R)-4，8-二羥基-α-四氫萘酮-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、3β,23-二羥基-12-烯-28-烏蘇酸(10)、熊果酸(11)、丁香酸(12)、JuglanosideB(13)。其中，化合物1、2、6、7、9、10為首次從該植物中分離得到，且該六種化合物也均為首次從該屬植物中分離得到。

采用MTT染色法，將化合物1～6、9、11、13分別與人肝癌細(xì)胞(HepG2),人食管癌細(xì)胞(Eca109),人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7),人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT-116)進(jìn)行體外腫瘤細(xì)胞抑制測(cè)試。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：化合物4對(duì)人肝癌細(xì)胞(HepG-2)的增殖顯示了較強(qiáng)的生長(zhǎng)抑制活性，化合物9對(duì)人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)的增殖具有一定的生長(zhǎng)抑制活性。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Bruker-400型核磁共振波譜儀(Bruker公司，德國(guó))；HP-5988A GC/MS 質(zhì)譜儀(HP公司，美國(guó))；X-4型數(shù)顯顯微熔點(diǎn)儀測(cè)定(北京光電設(shè)備廠)。

1.2 試劑

Sephadex LH-20(Pharmacia公司，美國(guó))；MCI GEL CHP20/P120(Mitsubishi Chemical公司，日本)；柱層析用硅膠(200～300目)及薄層層析用硅膠GF254(10～40 μm)(青島海洋化工廠)；所用試劑均為分析純(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)。細(xì)胞株：人肝癌細(xì)胞(HepG2)、人食管癌細(xì)胞(Eca109)、人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)、人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT-116)(中科院上海細(xì)胞庫(kù))。

1.3 植物來源

實(shí)驗(yàn)用核桃青皮于2013年6月采自河南省洛陽(yáng)市嵩縣車村鎮(zhèn)，由新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院中藥學(xué)教研室吳嬌副教授鑒定，樣本存放于新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院天然藥物化學(xué)研究室。

2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

2.1 提取與分離

取核桃青皮17 kg(干重)，陰干粉碎后，用甲醇在常溫下對(duì)其進(jìn)行浸泡，總共4次，每次浸泡6天，過濾后的濾液進(jìn)行減壓蒸餾得甲醇提取物浸膏，加水懸浮后分別用乙酸乙酯和正丁醇對(duì)其進(jìn)行多次萃取，萃取液減壓濃縮得乙酸乙酯部分浸膏(207.7 g)和正丁醇部分浸膏(82.1 g)。

乙酸乙酯部分浸膏用硅膠(3 500 g,200～300目)柱層析，以氯仿-甲醇(1∶0→0∶1)進(jìn)行梯度洗脫，將洗脫液通過薄層色譜檢識(shí)合并后，得到5個(gè)部分(FrI-FrⅤ)。FrI通過硅膠柱色譜，用石油醚-乙酸乙酯(15∶1→0∶1)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，重復(fù)進(jìn)行硅膠柱層析及重結(jié)晶得到化合物12(72 mg)。FrII通過硅膠柱色譜，用石油醚-乙酸乙酯(30∶1→0∶1)進(jìn)行梯度洗脫，重復(fù)進(jìn)行柱層析和純化得到化合物2(17 mg)、3(254 mg)、4(150 mg)、5(105 mg)。FrⅢ先用大孔吸附樹脂處理，以甲醇-水體系洗脫，得到的浸膏經(jīng)硅膠柱層析，以氯仿-異丙醇(25∶1→0∶1)為洗脫系統(tǒng)反復(fù)進(jìn)行硅膠柱層析及凝膠柱層析得到化合物6(36 mg)、7(20 mg)、10(21 mg)。FrⅣ通過硅膠柱色譜，用氯仿-甲醇(30∶1→0∶1)進(jìn)行梯度洗脫，重復(fù)進(jìn)行柱層析和純化得到化合物8(245 mg)。FrⅤ通過硅膠柱色譜，用氯仿-甲醇(25∶1→0∶1)進(jìn)行梯度洗脫，重復(fù)進(jìn)行柱層析、重結(jié)晶、凝膠柱層析得到化合物11(34 mg)。

正丁醇部分浸膏用硅膠 (1 500 g,200～300目)柱層析，以氯仿-甲醇 (30∶1→0∶1)進(jìn)行梯度洗脫，得到3個(gè)部分(Fr A-C)。Fr A以氯仿-甲醇(10∶1→0∶1)為洗脫系統(tǒng)經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析及純化得到化合物1(11 mg)。Fr B先用氯仿-甲醇(10∶1→0∶1)進(jìn)行梯度洗脫，然后用MCI-GEL CHP 20/P 120反相柱色譜，以甲醇/水(10% →40%)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，最后用葡聚糖凝膠柱Sephadex LH-20，以甲醇/水(10%、15%、20%)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，最終得到化合物13(40 mg)。Fr C通過硅膠柱色譜，用氯仿-甲醇(20∶1→ 0∶1)進(jìn)行梯度洗脫，重復(fù)進(jìn)行硅膠柱層析、凝膠柱層析，最終得到化合物9(34 mg)。

2.2 體外抗腫瘤活性測(cè)定

采用MTT法對(duì)人肝癌細(xì)胞(HepG2),人食管癌細(xì)胞(Eca109),人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7),人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT-116)進(jìn)行化合物體外腫瘤細(xì)胞抑制測(cè)試。將HepG2,Eca109,MCF-7,HCT116細(xì)胞培養(yǎng)于含有10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基，在37 ℃,5% CO2條件下培養(yǎng)24 h。各細(xì)胞均按每1 mL 1×104 個(gè)鋪于96孔板。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞分別用不同濃度的不同化合物處理(150 μL/孔)，而對(duì)照組只用DEME培養(yǎng)基處理(150 μL/孔)。每孔加入5 mg/mL 的MTT溶液15 μL，繼續(xù)孵育4 h，棄去培養(yǎng)基，每孔加入DMSO 150 μL，振蕩10 min，于490 nm處測(cè)定OD值，計(jì)算IC50值。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1無色針狀晶體(CH3OH)，分子式C15H20O10，mp.160～161 ℃；1H NMR (400 MHz,CD3OD)δ:7.38(2H,s,H-2,6),3.87(6H,s,3,5-OMe),5.66(1H,d,J=7.74 Hz,H-1′),3.36～3.50(4H,m,H-2′～5′),3.83(1H,dd,J=12.0,2.3 Hz,H-6′a),3.66(1H,dd,J=12.0,4.3 Hz,H-6′b);13C NMR (100 MHz,CD3OD)δ:120.7 (C-1),108.6 (C-2),148.9(C-3),142.4(C-4),148.9(C-5),108.6(C-6),166.7(C-7),96.2(C-1′),74.1(C-2′),78.9(C-3′),71.4(C-4′),78.1(C-5′),62.3(C-6′),56.9(3,5 × -OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道基本一致，可以鑒定該化合物為3,5-二甲氧基-4-羥基-苯甲酸-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物2白色無定形粉末，分子式C20H24O4， mp.196～198 ℃;HR-ESI-MS:m/z351.156 8 [M+Na]+(calculated for 351.156 7);1H NMR (400 MHz,CDCl3)δ:6.67(1H,s,H-5),2.90～2.97(1H,m,Ha-7),2.47～2.54(1H,m,Hb-7),1.83～2.01(1H,m,Ha-8),1.83～2.01(1H,m,Hb-8),1.66～1.73(1H,m,Ha-9),1.53～1.59(1H,m,Hb-9),4.11 (1H,t,J= 9.6 Hz,H-10),1.83～2.01(1H,m,Ha-11),1.53～1.59(1H,m,Hb-11),2.90～2.97(1H,m,Ha-12),2.90～2.97(1H,m,Hb-12),2.28～2.35(1H,m,Ha-13),1.66～1.73(1H,m,Hb-13),7.10(1H,d,J=8.3 Hz,H-15),6.91(1H,d,J= 8.3 Hz,H-16),7.19(1H,s,H-18),6.81(1H,s,H-19),3.92(MeO-,s,C-4);13C NMR (100 MHz,CDCl3)δ:124.7(C-1),125.1(C-2),139.2(C-3),146.8(C-4),110.4(C-5),131.6(C-6),30.7(C-7),26.8(C-8),23.0(C-9),69.0(C-10),39.7(C-11),27.2(C-12),35.1(C-13),131.0(C-14),130.3(C-15),117.3(C-16),151.8(C-17),133.7(C-18),126.4(C-19),56.5(MeO-,C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道基本一致，可以鑒定該化合物為myricananinF。

化合物3無色針狀結(jié)晶(石油醚)，mp.139～140 ℃,分子式C29H50O;Liebermann-Burchard反應(yīng)呈現(xiàn)陽(yáng)性,Molish反應(yīng)呈現(xiàn)陰性;1H NMR (400 MHz,CDCl3)δ:5.36(1H,d,J= 5.2 Hz,H-6),3.55(1H,m,H-3),1.02(3H,s,Me-19),0.93(3H,d,J= 6.3 Hz,Me-21),0.85 (3H,d,J= 2.0 Hz,Me-29),0.83(3H,d,J=6.6 Hz,Me-27),0.83(3H,s,Me-26),0.69(3H,s,Me-18);13C NMR (100 MHz,CDCl3)δ:37.6(C-1),32.1(C-2),72.4(C-3),42.7(C-4),141.0(C-5),121.9(C-6),32.0(C-7),32.1(C-8),50.4(C-9),37.0(C-10),21.5(C-11),40.0(C-12),42.4(C-13),57.0(C-14),24.6(C-15),28.5(C-16),56.4(C-17),12.3(C-18),19.2(C-19),36.4(C-20),19.5(C-21),34.2(C-22),26.3(C-23),46.0(C-24),29.5(C-25),19.0(C-26),19.8(C-27),23.3(C-28),12.3(C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道基本一致，因此鑒定該化合物為β-谷甾醇。

化合物4白色粉末，mp.279～280 ℃，分子式C30H48O3;Liebermann-Burchard反應(yīng)呈現(xiàn)陽(yáng)性;1H NMR(400 MHz,C5D5N)δ:0.91,0.93,1.06,1.07,1.08,1.15,1.29(each 3H,s,7-CH3),3.38(1H,dd,J=10.6,4.0 Hz,H-3),5.44(1H,m,H-12),2.98(1H,dd,J=13.6,4.0 Hz,H-18);13C NMR(100 MHz,C5D5N)δ:38.9(C-1),28.0(C-2),78.1(C-3),39.3(C-4),55.8(C-5),18.7(C-6),33.2(C-7),39.7(C-8),48.1(C-9),37.3(C-10),23.7(C-11),122.5(C-12),144.8(C-13),42.1(C-14),28.3(C-15),23.7(C-16),46.6(C-17),42.0(C-18),46.4(C-19),30.9(C-20),34.2(C-21),33.2(C-22),28.7(C-23),16.5(C-24),15.5(C-25),17.4(C-26),26.1(C-27),180.2(C-28),33.2(C-29),23.8(C-30)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道基本一致，因此鑒定該化合物為齊墩果酸。

化合物5無色針狀結(jié)晶(CHCl3),紫外光365 nm下有熒光斑點(diǎn)，mp.73～74 ℃，分子式C10H10O3。1H NMR (400 MHz,CDCl3)δ:12.5(1H,s,OH-8),7.48(1H,t,J=8.0,H-6),7.01(1H,d,J=7.6 Hz,H-5),6.90(1H,d,J=8.4 Hz,H-7),4.89(1H,dd,J=7.2,4.0 Hz),2.98(1H,ddd,J=18.0,8.3,4.8 Hz,H-2a),2.64(1H,ddd,J=18.0,8.3,4.8 Hz,H-2b),2.33(1H,m,H-3a),2.16(1H,m,H-3b);13C NMR (100 MHz,CDCl3)δ:204.6(C-1),34.7(C-2),31.4(C-3),67.8(C-4),117.6(C-5),137.2(C-6),117.9(C-7),162.8(C-8),146.1(C-9),115.4(C-10)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道基本一致，因此鑒定該化合物為核桃酮。

化合物6白色粉末，mp.327～328 ℃，分子式C30H48O5； Liebermann-Burchard反應(yīng)呈現(xiàn)陽(yáng)性;1H NMR (400 MHz,C5D5N)δ:5.49(1H,t,J=4.0 Hz,H-12),4.26(1H,d,J=4.0 Hz,H-2),4.26(1H,d,J=4.0 Hz,H-3),4.22(1H,d,J=10.6 Hz,Ha-23),3.72(1H,d,J=10.6 Hz,Hb-23),1.16(3H,s,Me-25 ),1.10(3H,s,Me-24 ),1.09(3H,s,Me-26),1.08(3H,s,Me-27),0.99(3H,d,J=6.2 Hz,H-30),0.97(3H,d,J=6.2 Hz,H-29);13C NMR (100 MHz,C5D5N)δ:48.2(C-1),66.7(C-2),78.5(C-3),44.0(C-4),48.3(C-5),18.8(C-6),33.5(C-7),40.4(C-8),48.2(C-9),38.6(C-10),24.2(C-11),125.9(C-12),139.6(C-13),42.9(C-14),29.0(C-15),25.2(C-16),48.4(C-17),53.8(C-18),39.8(C-19),39.7(C-20),31.4(C-21),37.8(C-22),69.2(C-23),14.8(C-24),17.9(C-25),17.8(C-26),24.1(C-27),180.3(C-28),17.8(C-29),21.7(C-30)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致，因此鑒定該化合物為積雪草酸。

化合物7白色無定形粉末，分子式 C30H48O4，mp.331～333 ℃；Liebermann-Burchard反應(yīng)呈現(xiàn)陽(yáng)性;1H NMR (400 MHz,C5D5N)δ:4.25(1H,d,J=10.5 Hz,H-3),3.31(1H,dd,J= 13.0,3.9 Hz,H-5),5.49(1H,brs,H-12),3.30(1H,dd,J= 13.1,4.2 Hz,H-18),4.25(1H,d,J=10.3 Hz,H-23α),3.73(1H,d,J=10.3 Hz,H-23β),1.25(3H,s,H-24),1.05(3H,s,H-25),1.03(3H,s,H-26),1.02(3H,s,H-27),1.00(3H,s,H-29),0.94(3H,s,H-30);13C NMR (100 MHz,C5D5N)δ:39.1(C-1),28.0(C-2),73.7(C-3),43.2(C-4),48.9(C-5),18.9(C-6),33.6(C-7),40.1(C-8),48.5(C-9),37.6(C-10),24.2(C-11),122.9(C-12),145.2(C-13),42.5(C-14),28.7(C-15),24.1(C-16),47.0(C-17),42.3(C-18),46.8(C-19),31.3(C-20),34.5(C-21),33.5(C-22),68.2(C-23),13.5(C-24),16.3(C-25),17.8(C-26),26.5(C-27),180.6(C-28),33.3(C-29),24.0(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致，故鑒定此化合物為常春藤皂苷元。

化合物8白色粉末，分子式 C35H60O6，mp.295～296 ℃；Liebermann-Burchard反應(yīng)呈現(xiàn)陽(yáng)性;1H NMR (400 MHz,C5D5N)δ:5.33 (1H,t,J=2.6 Hz,H-6),5.07 (1H,d,J=7.8 Hz,H-1′),4.56 (2H,dd,J=2.5,11.6 Hz,H-6′),4.40(1H,dd,J=5.5,12.0 Hz,H-4′),0.96(3H,d,J=6.6 Hz,CH3-21),0.92(3H,s,CH3-18),0.88(6H,d,J=1.9 Hz,CH3-26,27),0.86(3H,t,J=6.9 Hz,CH3-29),0.67(3H,s,CH3-19);13C NMR (100 MHz ,C5D5N)δ:38.0(C-1),30.9(C-2),79.0(C-3),40.5(C-4),141.4(C-5),122.5(C-6),32.8(C-7),32.8(C-8),50.9(C-9),37.5(C-10),21.9(C-11),40.5(C-12),42.9(C-13),57.3(C-14),25.1(C-15),28.9(C-16),56.9(C-17),19.5(C-18),12.5(C-19),36.9(C-20),19.9(C-21),34.9(C-22),27.0(C-23),46.5(C-24),29.9(C-25),20.5(C-26),19.9(C-27),23.9(C-28),12.8(C-29),103.2(C-1′),75.8(C-2′),79.1(C-3′),72.2(C-4′),78.6(C-5′),63.3(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，故鑒定此化合物為β-胡蘿卜苷。

化合物9白色粉末,紫外光365 nm下有熒光斑點(diǎn)，分子式C16H20O8， mp.120～122 ℃;HR-ESI-MSm/z:363.1060[M+Na]+(calculated for 363.1050[M+Na]+);1H NMR (400 MHz,CD3OD)δ:3.02(1H,m,Hβ-2),2.54(1H,m,Hα-2),2.32(2H,m,H-3),5.13(1H,m,H-4),7.48(1H,d,J=7.4 Hz,H-5),7.42(1H,t,J=8.0 Hz,H-6),7.00(1H,dd,J=8.3,1.0 Hz,H-7),5.00(1H, d,J= 7.8 Hz,H-1′),4.08(1H,m,H-2′),4.24(1H,m,H-3′),4.24(1H,m,H-4′),4.00(1H,m,H-5′),4.29(2H,d,J=7.4 Hz,H-6′),12.80(br s,-OH);13C NMR (100 MHz,C5D5N)δ:205.3(C-1),34.7(C-2),30.4(C-3),73.8(C-4),119.7(C-5),136.8(C-6),117.8(C-7),163.1(C-8),143.9(C-4a),116.2(C-8a),103.5(C-1′),75.3(C-2′),78.6(C-3′),71.6(C-4′),78.6(C-5′),62.8(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道基本一致，故鑒定此化合物為(4R)-4,8-二羥基-α-四氫萘酮-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物10白色粉末，分子式C30H48O4，mp.283～285 ℃；Liebermann-Burchard反應(yīng)呈現(xiàn)陽(yáng)性;1H NMR(400 MHz,C5D5N)δ:5.35(1H,t,J=3.5 Hz,H-12),4.02(1H,d,J=10.6 Hz,Ha-23),3.60(1H,d,J= 10.6 Hz,Hb-23),3.59(1H,m,H-3),1.40,1.35,1.15,1.13(each 3H,s,4×-Me),1.08(3H,d,J= 2.8 Hz,H-30),1.06(3H,d,J=6.5 Hz,H-29);13C NMR (100 MHz,C5D5N)δ:39.3(C-1),26.5(C-2),73.7(C-3),43.9(C-4),48.4(C-5),18.8(C-6),33.3(C-7),40.3(C-8),48.9(C-9),37.5(C-10),24.3(C-11),126.0(C-12),139.6(C-13),43.2(C-14),27.9(C-15),24.3(C-16),48.4(C-17),53.9(C-18),39.3(C-19),31.3(C-20),37.5(C-21),33.3(C-22),65.2(C-23),13.5(C-24),16.5(C-25),17.8(C-26),24.3(C-27),180.3(C-28),17.8(C-29),21.8(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道基本一致，故鑒定此化合物為 3β,23-二羥基-12-烯-28-烏蘇酸。

化合物11無色針晶(CH3OH)，分子式C30H48O3，mp.258～260 ℃;Liebermann-Burchard反應(yīng)呈現(xiàn)陽(yáng)性;1H NMR(400 MHz,C5D5N)δ:3.36(1H,dd,J= 10.6,5.6 Hz,H-3),5.45(1H,brs,H-12),1.02(3H,s,H-23),0.85(3H,s,H-24),0.88(3H,s,H-25),1.16(3H,s,H-26),1.30(3H,s,H-27),0.92(3H,s,H-29),1.01(3H,s,H-30);13C NMR (100 MHz,C5D5N)δ:39.4(C-1),28.5(C-2),78.9(C-3),39.4(C-4),55.5(C-5),18.5(C-6),33.5(C-7),40.2(C-8),47.8(C-9),39.0(C-10),23.3(C-11),125.5(C-12),138.7(C-13),42.2(C-14),28.5(C-15),24.3(C-16),48.0(C-17),53.0(C-18),40.9(C-19),38.9(C-20),31.0(C-21),37.1(C-22),28.5(C-23),15.6(C-24),16.1(C-25),17.3(C-26),23.6(C-27),180.3(C-28),17.3(C-29),21.5(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14,15]報(bào)道基本一致，故鑒定此化合物為熊果酸。

化合物12無色針狀結(jié)晶(CO(CH3)2),紫外光365 nm下有熒光斑點(diǎn)，分子式 C9H10O5，mp.207～208 ℃;1H NMR (400 MHz,CO(CD3)2)δ:8.02(4-OH),7.30(2H,s,H-2,6),3.87(6H,s,3,5-OMe);13C-NMR (100 MHz,CO(CD3)2)δ:121.0(C-1),107.6(C-2,6),148.0(C-3,5),141.1(C-4),167.2(-COOH),56.3(3,5-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道基本一致，故鑒定此化合物為丁香酸。

化合物13白色無定形粉末,紫外光365 nm下有熒光斑點(diǎn);分子式C16H20O8,mp.157～158 ℃;1H NMR (400 MHz,CD3OD)δ:3.14(1H,m,Ha-2),2.49(1H,m,Hb-2),2.20(1H,m,Ha-3),2.57(1H,m,Hb-3),5.42(1H,t,J=3.2 Hz,H-4),7.11(1H,dd,J=7.9,1.1 Hz,H-6),7.29(1H,t,J=7.9 Hz,H-7),7.49(1H,dd,J=7.9,1.1 Hz,H-8),4.62(1H,d,J=7.9 Hz,H-1′),3.20(1H,dd,J=8.7,7.9 Hz,H-2′),3.36(1H,H-3′),3.37(1H,H-4′),3.36(1H,H-5′),3.72(1H,dd,J=12.2,2.9 Hz,Ha-6′),3.93(1H,d,J=11.9 Hz,Hb-6′);13C NMR(100 MHz,CD3OD)δ:201.1(C-1),34.1(C-2),30.2(C-3),69.9(C-4),157.1(C-5),122.1(C-6),130.6(C-7),119.0(C-8),134.6(C-9),129.9(C-10),104.0(C-1′),75.5(C-2′),78.2(C-3′),71.7(C-4′),78.2(C-5′),62.8(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道基本一致，故鑒定此化合物為JuglanosideB。

3.2 體外抗腫瘤活性結(jié)果

由表1可知，化合物4對(duì)人肝癌細(xì)胞(HepG2)的增殖顯示了較強(qiáng)的生長(zhǎng)抑制活性，化合物9對(duì)人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)的增殖具有一定的生長(zhǎng)抑制活性，其他化合物則無明顯的細(xì)胞毒性。

表1 化合物的抗腫瘤活性( IC50 )Table 1 In vitro antitumor activity of compounds ( IC50 )