?穿心蓮與了哥王主要活性成分的合并提取工藝研究?

摘 要：根據(jù)穿心蓮與了哥王2種藥材中主要活性成分的特性，提出了2種藥材活性成分的合并提取工藝;通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)研究了提取溫度、提取時(shí)間、料液比和乙醇濃度對(duì)主要活性成分穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯及總黃酮得率的影響，確定合并提取的最佳工藝參數(shù)為提取溫度80、提取時(shí)間4 h、料液比為1︰12、乙醇濃度85%。在此條件下，3種有效成分得率分別達(dá)到1.244%、0.341%和1.138%，其綜合評(píng)分均高于正交試驗(yàn)的最高評(píng)分，說明正交試驗(yàn)所得到的最佳工藝切實(shí)可行。

關(guān)鍵詞：穿心蓮;了哥王;合并提取;工藝優(yōu)化

中圖分類號(hào)：R282.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-060X（2018）12-0073-03

Combined Extraction Process of Main Effective Components of Andrographis Paniculate

and Wikstroemia Indica

WANG Ying1，WANG Hua2，ZHAO Li1，WANG Wei-ting1

（1.Department of Pharmacy， Jiangsu Agri-animal Husbandry Vocational College， Taizhou 225300， PRC; 2. School of Environmental and Pharmaceutical Engineering， Taizhou Institute of Sci. amp; Tech.， NUST， Taizhou 225300， PRC）

Abstract： According to the characteristics of main effective components of Andrographis paniculate and Wikstroemia indica， a combined extraction process of the two active ingredients was proposed. The effects of extraction temperature， extraction time， solid-liquid ratio and ethanol concentration on the yield of andrographolide， dehydrated andrographolide and total flavonoids were studied by single factor and orthogonal experiments. The optimum extraction parameters were determined as follows： extraction temperature 80℃， extraction time 4 hours， material-liquid ratio 1：12， ethanol concentration 85%. Under these conditions， the yields of the three active ingredients were 1.244%， 0.341% and 1.138%， respectively. The comprehensive scores of the three active ingredients were higher than the highest scores of the orthogonal test， which indicated that the optimum process obtained by the orthogonal test was feasible.

Key words： Andrographis paniculate; Wikstroemia indica; combined extraction; process optimization

穿王消炎膠囊為中藥復(fù)方制劑，主要含穿心蓮和了哥王2味中藥，具有消炎解毒之功效[1]，常用于咳喘痰熱、腹痛以及急性腸胃炎、咽喉炎、肺炎、急性扁桃體炎等炎癥反應(yīng)，被人們稱為“綠色消炎藥”[2-3]。穿心蓮為一年生草本植物，其主要的活性成分為穿心蓮總內(nèi)酯[4]。了哥王別名為南嶺蕘花，主要活性成分為黃酮類化合物[5]。傳統(tǒng)工藝中，將穿心蓮和了哥王2味藥材分別提取后再合并提取液濃縮成稠膏[6-7]。這種工藝既費(fèi)時(shí)費(fèi)力，又耗費(fèi)原材料。由于穿心蓮總內(nèi)酯和黃酮類化合物均能溶于乙醇[8]，因此筆者擬合并2種藥材的提取工藝，同時(shí)提取藥材中的主要活性成分。研究以乙醇為溶劑，通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，確定穿心蓮與了哥王合并提取工藝的最佳參數(shù)，并采用分光光度法[9]測(cè)定了提取液中穿心蓮總內(nèi)酯和黃酮類化合物的含量。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試穿心蓮和了哥王由亳州市信遠(yuǎn)中藥科技有限公司提供;試驗(yàn)用穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品（HPLC≥97%）、脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品（HPLC≥97%）和蘆丁對(duì)照品（HPLC≥97%）由上海如吉生物科技發(fā)展有限公司提供;其他試劑均為市售分析純。

主要試驗(yàn)儀器有HH-1數(shù)顯恒溫水浴鍋、HH-1S油浴鍋（金壇市杰瑞爾電器有限公司），722N可見分光光度計(jì)、YP202N電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司），SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 合并提取工藝的單因素試驗(yàn) 根據(jù)賴娟華等[10]的處方，取30 g穿心蓮和20 g了哥王，加乙醇溶液，加熱提取，過濾，得穿王提取液。（1）提取溫度：料液比為1︰10，乙醇濃度為85%，分別在60、65、70、75、80℃下提取4 h，測(cè)定提取液中活性成分含量以確定最適提取溫度。（2）提取時(shí)間：料液比為1︰10，乙醇濃度為85%，在80℃下分別提取1、2、3、4、5 h，測(cè)定提取液中活性成分含量以確定最佳提取時(shí)間。（3）料液比：乙醇濃度為85%，料液比分別為1︰8、1︰9、1︰10、1︰11、1︰12，在80℃下提取4 h，測(cè)定提取液中活性成分含量以確定最適料液比。（4）乙醇濃度：分別采用55%、65%、75%、85%、95%的乙醇，料液比為1︰10，在80℃下提取4 h，測(cè)定提取液中活性成分含量以確定最適乙醇濃度。

1.2.2 合并提取工藝的正交試驗(yàn) 根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，進(jìn)行4因素3水平的正交試驗(yàn)（表1），進(jìn)一步優(yōu)化合并提取工藝。

最佳提取工藝的選擇采用加權(quán)評(píng)分法，將指標(biāo)穿心蓮內(nèi)酯得率（X1）、脫水穿心蓮內(nèi)酯得率（X2）、總黃酮得率（X3）的權(quán)重系數(shù)分別取0.3、0.2、0.5。綜合評(píng)分Yi=X1i/X1max×30+X2i/X2max×20+X3i/X3max×50。

1.2.3 最佳工藝參數(shù)的驗(yàn)證 以正交試驗(yàn)優(yōu)化后的最佳工藝參數(shù)進(jìn)行合并提取試驗(yàn)，平行提取3次，驗(yàn)證最佳工藝參數(shù)的可行性。

1.2.4 活性成分含量測(cè)定 （1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：參考相關(guān)文獻(xiàn)[11-13]，采用分光光度法，分別在225、254和510 nm下繪制穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯和蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1所示。（2）穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量測(cè)定：取1 mL提取液于100 mL容量瓶中，用95%乙醇定容至刻度，搖勻，得到樣品溶液，分別在225、254 nm處測(cè)定穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量。（3）總黃酮的含量測(cè)定：取1 mL提取液于100 mL容量瓶中，用30%乙醇定容至刻度，再用移液管精密量取稀釋后的溶液5 mL于50 mL容量瓶中，用30%乙醇定容至刻度，在510 nm處測(cè)定總黃酮的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 提取溫度 如圖2所示，在試驗(yàn)設(shè)定的提取溫度范圍內(nèi)，隨著溫度的升高，有效成分得率呈上升趨勢(shì);穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的得率在80℃時(shí)達(dá)到最大;而總黃酮含量在70℃時(shí)得率最高，當(dāng)提取溫度超過70℃時(shí)，其得率有所下降。在一定溫度范圍內(nèi)，當(dāng)溫度越高時(shí)，細(xì)胞越容易被破壞，乙醇滲透能力越強(qiáng)，有效成分越容易被提取出來;但由于3種有效成分的熱穩(wěn)定性都較差，因此當(dāng)溫度超過臨界值時(shí)有效成分易發(fā)生水解[14]，從而降低得率;故最適提取溫度在75℃左右。

2.1.2 提取時(shí)間 由圖3可知，在提取1～4 h之內(nèi)，3種有效成分得率隨提取時(shí)間的延長而上升;在一定時(shí)間內(nèi)，提取時(shí)間越長，細(xì)胞破壞越完全，乙醇的滲透效果越好，提取得率越高。當(dāng)提取時(shí)間超過4 h時(shí)，得率的上升趨勢(shì)逐漸變緩，說明提取4 h后有效成分已完成滲出或者溶劑達(dá)到飽和狀態(tài)。

2.1.3 料液比 由圖4可知，在一定范圍內(nèi)，隨著溶劑的增加，有效成分得率隨之升高;穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的得率在料液比為1︰12時(shí)達(dá)到最高，而總黃酮的得率在料液比為1︰11時(shí)最高。

2.1.4 乙醇濃度 由圖5可知，穿心蓮內(nèi)酯得率隨乙醇濃度的增加變化不明顯，在乙醇濃度為85%時(shí)得率最高;而脫水穿心蓮內(nèi)酯得率隨乙醇濃度的增加先上升后下降，在75%時(shí)達(dá)到最大值;總黃酮得率隨乙醇濃度的增加呈上升趨勢(shì)，在95%時(shí)達(dá)到最大值。乙醇為有機(jī)溶劑，對(duì)黃酮類物質(zhì)有較好的溶解度，因此隨乙醇濃度的上升，得率也大幅度提高。同時(shí)，乙醇濃度越高，越容易滲透進(jìn)藥材細(xì)胞進(jìn)行有效成分提取，故在一定范圍內(nèi)乙醇濃度越高有效成分得率越高。

2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

從表2的極差數(shù)據(jù)可以看出，RD>RC>RB>RA，說明各因素對(duì)提取率的影響大小順序?yàn)橐掖紳舛?gt;料液比>提取時(shí)間>提取溫度;從K值可以看出，最佳提取工藝為A3B2C3D3，即提取溫度為80℃，提取時(shí)間為4 h，料液比為1︰12，乙醇濃度為85%。

2.3 最佳提取工藝的驗(yàn)證

如表3所示，在正交試驗(yàn)確定的最佳工藝參數(shù)條件下，穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯和總黃酮的平均得率分別為1.244%、0.341%和1.138%，其綜合評(píng)分為101.1分，高于正交試驗(yàn)的最高評(píng)分，說明正交試驗(yàn)所得到的最佳工藝切實(shí)可行。

3 結(jié) 論

穿王消炎膠囊中的有效成分穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯具有抗炎解熱、抗菌、抗病毒等功效，能夠增強(qiáng)人體的免疫功能，研究表明它們還有抗腫瘤的功效;總黃酮?jiǎng)t具有抗氧化、抗炎的功效，同時(shí)也能夠抵抗或者緩解腫瘤的形成。穿王消炎膠囊作為“綠色消炎藥”，具有很廣闊的市場(chǎng)前景，對(duì)其提取工藝進(jìn)行研究具有非常重要的意義。將穿心蓮與了哥王聯(lián)合進(jìn)行有效成分的提取，通過提取溫度、提取時(shí)間、料液比以及乙醇濃度4個(gè)因素的單因素和正交試驗(yàn)，確定合并提取工藝的最優(yōu)參數(shù)為提取溫度為80℃，提取時(shí)間為4 h，料液比為1︰12，乙醇濃度為85%。經(jīng)3組平行試驗(yàn)驗(yàn)證，試驗(yàn)所得最佳提取工藝切實(shí)可行。

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