毛細管氣相色譜法測定水楊酸苯酚貼膏中苯酚含量

袁 林，陳 穎（重慶市萬州食品藥品檢驗所，重慶 404100）

水楊酸苯酚貼膏治療雞眼效果顯著，其水楊酸成分有抗真菌、止癢及溶解角質(zhì)的作用，所含苯酚為消毒防腐劑，有殺菌、止癢作用?，F(xiàn)行有效的水楊酸苯酚貼膏質(zhì)量標準[1]的含量測定項中只有水楊酸的限值要求，未對苯酚含量的檢測作具體規(guī)定[1]。目前已有關(guān)于苯酚的含量測定方法主要是化學滴定法[2]，該方法的缺點是干擾因素大，滴定終點顏色不明顯，常受樣品本身所具有的顏色干擾而帶來很大的測定誤差[3]。本研究中采用專屬性更高、更優(yōu)化的毛細管氣相色譜法測定水楊酸苯酚貼膏中苯酚含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 7890A型氣相色譜儀（美國安捷倫公司）；CTC PAL自動進樣器（瑞士思特斯分析儀器有限公司）；CP224S型電子分析天平（瑞士梅特勒－托利多公司，分度值0.1 mg）；KQ－800DE型超聲波發(fā)生器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

苯酚對照品（色譜純，山東西亞化學工業(yè)有限公司，批號為O5276，含量為99.5%）；水楊酸苯酚貼膏（購自廣東某藥廠，批號分別為 170802，170916，171015，規(guī)格為每片含藥膏 0.2 g，水楊酸 156 mg，苯酚 8 mg）；乙醇（分析純，重慶川東化工集團有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[4－9]

氣相色譜柱：安捷倫DB－5型毛細管氣相色譜柱（30 m × 0.32 mm，0.25 μm）；檢測器：FID 氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度280℃，進樣口溫度250℃，分流進樣，分流比 5∶1，載氣為高純度氮氣，流速為 1.0 mL ／min，氫氣流速為 30 mL／min，空氣流速為 300 mL／min，尾吹氣流速為 25 mL ／min；進樣量：1 μL；柱溫：100 ℃，保持10 min，以 10℃ ／min的速率升至 260℃，保持 3 min。色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

稱取苯酚對照品0.2 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，用乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，作為標準貯備液；量取標準貯備液2.00 mL，置10 mL容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。稱取樣品約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇50 mL，稱定質(zhì)量，稍振搖，超聲 20 min，使苯酚溶解，放冷至室溫，稱定質(zhì)量，用乙醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液[10－16]。取處方量的水楊酸及輔料制備陰性樣品（由廣東某企業(yè)提供），稱取樣品約0.2 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備，即得陰性對照品溶液。

圖1 氣相色譜圖

2.3 方法學考察

線性關(guān)系考察：分別精密量取2.2項下標準貯備液0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 mL，置 10 mL 容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻。分別量取1 μL，注入氣相色譜儀，測定。以苯酚質(zhì)量濃度（X，mg／mL）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y＝2 166.56 X－10.36， r＝0.999 65（n＝6）。結(jié) 果 表明，苯酚質(zhì)量濃度在 0.101～1.010 g／L 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密量取2.2項下對照品溶液，在擬訂色譜條件下連續(xù)進樣6次，測定峰面積。結(jié)果的 RSD為 0.69%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗：取同一批（批號170802）樣品6份，依法制備供試品溶液，在擬訂色譜條件下進樣測定、計算。結(jié)果樣品中苯酚的平均含量為 99.51%，RSD為1.20%（n＝6），表明方法重復(fù)性好。

穩(wěn)定性試驗：取2.2項下供試品溶液，室溫放置，分別于 0，2，4，6，8，12，24 h 時測定，記錄色譜圖。結(jié)果苯酚峰面積的 RSD為1.60%（n＝7），表明供試品溶液中苯酚含量在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

回收率試驗：取陰性樣品6份，置25 mL容量瓶中，分別精密加入苯酚對照品約10 mg，按2.2項下方法制備供試品溶液依法進樣測定，計算苯酚回收率。結(jié)果見表1。

表1 苯酚回收率試驗結(jié)果(n＝6)

檢出限測定：取對照品溶液適量，逐級稀釋，分別注入氣相色譜儀，計算信噪比（S／N），并以 S／N約為3∶1時的質(zhì)量濃度作為檢出限。結(jié)果苯酚的檢出限為0.03 μg ／mL。

2.4 樣品含量測定

取水楊酸苯酚貼膏3批，按2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定。結(jié)果批號為170802，170916，171015的樣品中苯酚的含量分別為99.45% ，99.68% ，99.21% 。

3 討論

苯酚具有強腐蝕性，且對人體有一定的毒性，現(xiàn)行水楊酸苯酚貼膏的質(zhì)量標準中包括了性狀，水楊酸的鑒別、檢查與含量測定，但未對苯酚的鑒別與含量測定作出規(guī)定，缺乏對苯酚進行量化的標準。本研究中參考文獻[4－9]，采用簡便易行的毛細管氣相色譜法對苯酚的含量進行測定，既可給苯酚的鑒別提供依據(jù)，也可科學、準確測定苯酚含量，能更好地控制其質(zhì)量。

同時分別考察了提取時間為 10，20，30，60 min時樣品含量的差異，結(jié)果表明，提取20 min和60 min時的含量相差不大，而提取10 min時的樣品含量明顯少于提取20 min時，故最終選擇20 min作為超聲提取時間。

根據(jù)苯酚的極性，分別比較了DB－5型，DB－624型，HP－INNOWax型色譜柱，在不同柱溫及程序升溫條件下，最后根據(jù)峰形、理論板數(shù)及峰面積的 RSD，優(yōu)選出了DB－5型毛細管氣相色譜柱。

綜上所述，本研究中建立了測定水楊酸苯酚貼膏中苯酚含量的毛細管氣相色譜法，該方法操作簡單、快速，結(jié)果準確，重復(fù)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制，同時也可為測定其他含苯酚制劑的含量提供參考。