內(nèi)蒙不同產(chǎn)地東北點(diǎn)地梅中槲皮素和山柰素含量測定

齊和日瑪 成日青 那生桑 布仁 塔娜 高晶 薩仁高娃

摘要：目的??測定內(nèi)蒙不同產(chǎn)地東北點(diǎn)地梅中槲皮素和山柰素含量，為制定蒙藥點(diǎn)地梅質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。方法??采用HPLC測定5個產(chǎn)地東北點(diǎn)地梅樣品，色譜柱為COSMOSIL 5C18-MS-II（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.5%磷酸（40∶60），流速0.8 mL/min，檢測波長360 nm，柱溫30 ℃。結(jié)果??東北點(diǎn)地梅中槲皮素含量為3.58～10.51 mg/g，平均7.14 mg/g;山柰素含量為6.28～9.57 mg/g，平均8.15 mg/g。結(jié)論??本研究建立的測定方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，適于同時測定東北點(diǎn)地梅中槲皮素和山柰素的含量，可為蒙藥點(diǎn)地梅質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：東北點(diǎn)地梅;槲皮素;山柰素;高效液相色譜法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2018.10.019

中圖分類號：R284.1 ???文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A ???文章編號：1005-5304（2018）10-0088-03

Content Determination of Quercetinum and Kaempferol in Androsace Filiformis?Retz. in Different Producing Areas?in Inner Mongolia

Qiherima， CHENG Ri-qing， NA Sheng-sang， Buren，?Tana， GAO Jing， Sarengaowa

Inner Mongolia Medical University， Huhhot 010110， China

Abstract： Objective?To determine the contents of quercetinum and kaempferol in Androsace filiformis?Retz. in different producing areas in Inner Mongolia; To provide references for establishing quality standards of Androsace filiformis Retz. Methods?HPLC was performed on the column of COSMOSIL 5C18-MS-II （4.6 mm?×?250 mm， 5 μm） with?mobile phase of acetonitrile - 0.5% phosphonic acid solution （40：60） at a flow rate of 0.8 mL/min; the detection wavelength was 360 nm; column temperature was 30 ℃. Results The contents?of quercetinum in Androsace filiformis?Retz. from 5 different producing areas were from 3.58 mg/g to 10.51 mg/g， the average content was 7.14 mg/g， and the contents of?kaempferol were from 6.28 mg/g to 9.57 mg/g，?the average content was 8.15 mg/g. Conclusion?The method in this study is simple and accurate， with good reproducibility， and can be used for the simultaneous determination of quercetinum and kaempferol in Androsace filiformis?Retz.， which can provide a basis for the establishment of quality standards?for?of?Androsace filiformis?Retz. in Inner Mongolia.

Keywords：?Androsace filiformis?Retz.; guercetinum; kaempferol; HPLC

點(diǎn)地梅屬植物Androsace是報春花科的一個中等大屬，我國約有70多種。點(diǎn)地梅是蒙醫(yī)常用藥，蒙藥名為“達(dá)蘭-套布其”，慣用品種為東北點(diǎn)地梅Androsace filiformis?Retz.和北點(diǎn)地梅Androsace septentrionalis?L.，在《無誤蒙藥鑒》《四部甘露》等蒙醫(yī)藥典籍中均有記載。蒙藥點(diǎn)地梅具有清熱、解毒、消腫、療傷、祛協(xié)日烏素、滋養(yǎng)強(qiáng)壯功效，主治創(chuàng)傷化膿疼痛、腫毒性關(guān)節(jié)炎、協(xié)日烏素癥、赫依協(xié)日烏素合并癥^[1]。

點(diǎn)地梅中主要含有黃酮類和三萜皂苷類成分，其中黃酮類成分主要為槲皮素和山柰素^[2-4]。槲皮素具有抗炎、抗病毒、抗腫瘤等生物活性和廣泛的藥理作用^[5]，山柰素具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒、防癌、抗癌等多種功效^[6]，兩者均為點(diǎn)地梅的有效成分。

點(diǎn)地梅為蒙醫(yī)習(xí)用藥材，但迄今尚無該藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，因此限制了其在蒙醫(yī)藥領(lǐng)域的合理利用。本研究對內(nèi)蒙5個不同產(chǎn)地東北點(diǎn)地梅樣品中的槲皮素和山柰素進(jìn)行含量分析，為蒙藥點(diǎn)地梅質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供依據(jù)。

1 ?儀器與試藥

Dionex UltiMate 3000液相色譜儀（美國Thermo- Fisher公司），BSC電子分析天平（德國塞多利斯科學(xué)儀器有限公司），HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）。

槲皮素對照品（批號100081-200907）、山柰素對照品（批號110861-200606），供含量測定用，中國食品藥品檢定研究院;乙腈（色譜純，F(xiàn)isher公司），水為市售娃哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。5批東北點(diǎn)地梅樣品分別采自內(nèi)蒙古不同地區(qū)，經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室渠弼副教授鑒定為報春花科點(diǎn)地梅屬植物東北點(diǎn)地梅Androsace filiformis?Retz.的干燥全草，樣品來源信息見表1。

2 ?方法與結(jié)果

2.1 ?色譜條件

采用COSMOSIL 5C18-MS-II色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.5%磷酸（40∶60），流速0.8 mL/min，檢測波長360 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL。

2.2 ?對照品溶液的制備

精密稱取槲皮素和山柰素對照品適量，分別加甲醇制成每1 mL含0.3 mg槲皮素和0.3 mg山柰素的對照品溶液。

2.3 ?供試品溶液的制備

取本品粉末約0.5 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加入甲醇-25%鹽酸（體積比為4∶1）混合溶液25 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用上述混合溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液^[7]。

2.4 ?系統(tǒng)適用性試驗

取上述對照品溶液和供試品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果表明，理論板數(shù)以各待測成分峰計均高于10 000，各成分基線分離良好。

2.5 ?線性關(guān)系考察

????分別取上述槲皮素和山柰素對照品溶液，進(jìn)樣量分別為1、2、4、8、12、16 μL，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，以峰面積對質(zhì)量進(jìn)行線性回歸。槲皮素回歸方程為Y=73.81 5X-0.550 9，r²=0.999 9;山柰素回歸方程為Y=76.565 9X+0.215 1，r²=1.000 0，表明槲皮素和山柰素在0.3～4.8 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 ?精密度試驗

取本品供試品溶液1份，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，結(jié)果槲皮素和山柰素峰面積的RSD分別為0.18%和0.51%，表明儀器精密度良好。

2.7 ?重復(fù)性試驗

取6份同一批樣品約0.5 g，精密稱定，分別按“2.3”項下方法制備6份供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，結(jié)果槲皮素和山柰素峰面積的RSD分別為2.81%和3.60%，表明本法重復(fù)性良好。

2.8 ?穩(wěn)定性試驗

取同一份供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，分別于0、2、4、6、8、10、12 h進(jìn)樣測定峰面積，槲皮素和山柰素峰面積的RSD分別為0.59%和0.60%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 ?加樣回收率試驗

取6份已知槲皮素和山柰素含量的樣品粉末，每份約0.25 g，精密稱定，以2份為1組，分別按對照品加入量與供試品中待測成分量之比為0.5∶1、1∶1、1.5∶1同時加入槲皮素和山柰素對照品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液并測定峰面積，計算加樣回收率，結(jié)果見表2。槲皮素加樣回收率為98.23%～104.77%，平均101.91%，RSD=2.51%;山柰素加樣回收率為95.48%～105.12%，平均100.97%，RSD=3.55%。表明本法回收率良好。

2.10 ?樣品含量測定

取5批東北點(diǎn)地梅樣品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，并按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行含量測定，結(jié)果見表3。東北點(diǎn)地梅樣品中槲皮素含量為3.58～10.51 mg/g，山柰素含量為6.28～9.57 mg/g，平均含量分別為7.14 mg/g和8.15 mg/g。

3 ?討論

本研究在選擇樣品提取方法時，首先比較了超聲提取法和回流提取法，結(jié)果回流提取法提取相對完全、重復(fù)性好;其次比較了先甲醇回流后加鹽酸水解方法與同時加入甲醇和鹽酸的提取效果，結(jié)果后者提取率更高，方法學(xué)更穩(wěn)定。故本試驗確定采用文中所述的提取方法。

5個產(chǎn)地東北點(diǎn)地梅中槲皮素和山柰素的含量分別為3.58～10.51 mg/g和6.28～9.57 mg/g，平均含量分別為7.14 mg/g和8.15 mg/g，其中樣品1（烏蘭察布蘇木山）中2種成分的含量均較高，樣品4（興安盟五岔溝）中的含量均最低，且2個產(chǎn)地樣品中槲皮素含量相差較大，說明不同產(chǎn)地東北點(diǎn)地梅品質(zhì)有較大差別。

本研究建立的測定方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用來同時測定東北點(diǎn)地梅中槲皮素和山柰素的含量。試驗結(jié)果表明，5個產(chǎn)地東北點(diǎn)地梅中槲皮素和山柰素的含量均較高，可作為蒙藥點(diǎn)地梅質(zhì)量評價和控制的指標(biāo)成分。

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