黃尾鲴胚胎及仔魚的發(fā)育

彭新亮， 倫 峰， 郭旭升，2， 趙良杰，2

(1.信陽農(nóng)林學(xué)院，河南信陽 464000； 2.河南省漁業(yè)生物工程技術(shù)研究中心，河南信陽 464000)

黃尾鲴(XenocyprisdavidiBleeker)別稱黃尾密鲴、黃尾、黃片、黃姑子、黃瓜魚等，隸屬鯉科鲴亞科鲴屬，是一種中小型淡水魚類，在我國長江、珠江、黃河等水系均有分布。該魚具有食性雜、生長快、肉質(zhì)細(xì)嫩、營養(yǎng)價值高、適應(yīng)能力強(qiáng)、易捕撈等特點，且可以自然繁殖，能形成自然種群，有較高的群體生產(chǎn)力，是水庫、湖泊、池塘養(yǎng)殖的理想經(jīng)濟(jì)魚類。黃尾鲴通常生活在水體的中下層，主要以附生藻類、腐殖質(zhì)和有機(jī)碎屑為食，有水中“清道夫”之稱，具有凈化水質(zhì)、減緩水體富營養(yǎng)化、改善水生態(tài)環(huán)境的功能，故又稱生態(tài)魚。因黃尾鲴的生存空間和食性與其他養(yǎng)殖魚類無競爭關(guān)系，養(yǎng)殖成本較低，具有較好的經(jīng)濟(jì)效益和生態(tài)效益，已成為當(dāng)前水產(chǎn)養(yǎng)殖品種結(jié)構(gòu)調(diào)整中首選的優(yōu)良品種之一，也是天然水域增殖放流的優(yōu)良品種。2010年黃尾鲴被列為適宜在全國增殖放流的廣布性經(jīng)濟(jì)物種，功能定位為生物凈水和漁民增收。近年來，黃尾鲴野生資源銳減，因其人工養(yǎng)殖發(fā)展迅速，苗種需求量較大。但該魚性情急躁，應(yīng)激反應(yīng)劇烈，人工繁殖難度較大，難以形成批量的苗種生產(chǎn)。為探索黃尾鲴人工繁殖特性，本研究對其胚胎和仔魚發(fā)育進(jìn)行了觀察，旨在為黃尾鲴大批量人工繁殖提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 親魚的選擇

親魚為河南省信陽市羅山縣小龍山魚類良種繁育場培育的黃尾鲴，年齡為3齡，平均體質(zhì)量為500 g。雄魚頭部、鰓蓋、胸鰭等處“追星”較多，體表撫摸粗糙，輕壓腹部能擠出乳白色的精液；雌魚則腹部膨大，卵巢輪廓明顯，壓感松軟，在催產(chǎn)之前，用挖卵器取卵檢查，卵粒大小均勻、飽滿、容易分開，可以進(jìn)行人工催產(chǎn)。

1.2 催產(chǎn)與人工授精

催產(chǎn)劑為魚用促黃體素釋放激素類似物(LRH-A2)和地歐酮(DOM)，均購自浙江省寧波第二激素廠。催產(chǎn)劑量為雌魚 10 μg LRH-A2+6 mg/kg DOM，雄魚減半，于胸鰭基部一次性注射，注射后按雌雄1 ∶1的比例放入產(chǎn)卵池，微流水刺激，促進(jìn)親魚性腺進(jìn)一步成熟，效應(yīng)時間9 h左右。待黃尾鲴親魚發(fā)情時，將親魚撈出采用半干法授精技術(shù)進(jìn)行人工授精。

1.3 胚胎及仔魚發(fā)育觀察

取受精卵放置于培養(yǎng)皿中進(jìn)行孵化觀察，每2 h換水1次，水溫控制在(23±1) ℃。參照劉筠等對硬骨魚類的胚胎發(fā)育階段劃分方法[1-2]，在尼康體式顯微鏡下進(jìn)行連續(xù)觀察，每次觀察卵數(shù)在30粒以上，當(dāng)其中50%以上出現(xiàn)某時期特征，則記為該發(fā)育階段的起始時間，從前一發(fā)育階段到下一發(fā)育階段的起始時間則為間隔時間。仔魚以24 h為間隔時間記錄其發(fā)育特征。用數(shù)碼攝像機(jī)拍攝各期的典型特征圖片，并記錄發(fā)育所需時間。

2 結(jié)果與分析

2.1 胚胎發(fā)育

2.1.1 受精卵 黃尾鲴發(fā)育成熟的卵呈圓球形，略帶黃綠色，屬黏性卵，卵徑1.1 mm左右。受精后吸水膨脹，出現(xiàn)卵周隙，受精卵徑擴(kuò)大到1.3～1.4 mm(圖1-1)，同時細(xì)胞質(zhì)逐漸向動物極流動集中，并漸漸隆起形成胚盤，受精卵逐漸從圓球型變成橢圓型，從受精卵到形成胚盤約需20 min(圖1-2)。

2.1.2 卵裂期 受精后39 min，胚盤頂端中央凹陷形成分裂溝，受精后50 min，分裂溝逐漸加深、清晰(圖1-3)，隨后出現(xiàn)第1次卵裂，在胚盤上形成2個大小相等的分裂球，進(jìn)入2細(xì)胞期(圖1-4)。受精后1 h 4 min開始第2次卵裂，方向與第1次卵裂方向垂直，形成4個大小形態(tài)相似的分裂球，進(jìn)入4細(xì)胞期(圖1-5)。1 h 14 min后，進(jìn)入8細(xì)胞期，每4個細(xì)胞排成1排，細(xì)胞的大小、形態(tài)略有差異(圖1-6)。隨著受精時間的延長，受精卵以2的倍數(shù)進(jìn)行分裂增長，1 h 31 min 后進(jìn)入16細(xì)胞期，1 h 44 min后進(jìn)入32細(xì)胞期，2 h 6 min 后進(jìn)入64細(xì)胞期(圖1-7)，2 h 30 min后進(jìn)入多細(xì)胞期(圖1-8)。

2.1.3 桑葚胚期 多細(xì)胞期后細(xì)胞分裂的間隔時間越來越短，隨著細(xì)胞的不斷分裂，細(xì)胞越來越多而體積越來越小，因細(xì)胞分裂速度出現(xiàn)差異，細(xì)胞大小不一致開始進(jìn)行分層排列，但界限仍清晰可見，受精后3 h，分裂的細(xì)胞分層排列在卵黃囊上形成隆起的細(xì)胞團(tuán)，類似桑葚，即進(jìn)入桑葚胚期(圖1-9)。

2.1.4 囊胚期 隨著胚盤細(xì)胞的繼續(xù)分裂，細(xì)胞數(shù)量越來越多，層次也逐漸增多，形成胚層，受精后3 h 20 min，在原胚盤處形成高聳的囊胚，其高度與桑葚胚期近似，進(jìn)入高囊胚期(圖1-10)，此時因細(xì)胞的分裂其體積變得更小，細(xì)胞間的界限變得模糊，形成平滑的曲面。受精后4 h 10 min，囊胚的高度逐漸下降，囊胚開始變薄并趨于扁平，囊胚下緣有下包趨勢，進(jìn)入囊胚中期(圖1-11)，此時已完全分不出細(xì)胞間界線。受精后6 h，囊胚變得更為扁平，下緣細(xì)胞開始向卵黃部分下包，下包約1/3，囊胚腔清晰可見，進(jìn)入囊胚末期(圖1-12)。

2.1.5 原腸胚期 受精后6 h 40 min，隨著囊胚細(xì)胞下包，囊胚腔逐漸消失，下包邊緣區(qū)細(xì)胞逐漸增厚隆起一條環(huán)帶，即胚環(huán)出現(xiàn)，此時胚層下包至1/2，進(jìn)入原腸早期(圖1-13)。受精后8 h 30 min，在動物極稍偏部位細(xì)胞層增厚隆起形成胚盾，胚層下包至2/3，進(jìn)入原腸中期(圖1-14)，受精后9 h，胚層下包至3/4，胚盾逐漸延伸，進(jìn)入原腸晚期(圖1-15)。

2.1.6 神經(jīng)胚期 受精后11 h 20 min，胚層下包4/5，植物極的卵黃絕大部分被胚層下包，胚環(huán)大大縮小，胚孔末端的較少卵黃外露形成卵黃栓，胚盾表層細(xì)胞分化出神經(jīng)板，其前端增厚膨大，形成腦原基，進(jìn)入神經(jīng)胚期(圖1-16)。受精后12 h 40 min，胚層下包過程完成，卵黃體已全部被下包胚層包裹，并形成胚孔(圖1-17)。受精后15 h，神經(jīng)板中間下陷，2側(cè)加厚隆起形成神經(jīng)溝和神經(jīng)管，胚層逐漸合攏，胚孔漸漸縮小直至完全封閉，進(jìn)入胚孔封閉期(圖1-18)。

2.1.7 眼囊期 受精后17 h 40 min，腦部開始分化為前、中、后腦3個部分，胚體中部開始出現(xiàn)肌節(jié)，胚體頭部2側(cè)眼囊形成，進(jìn)入眼囊期(圖1-19)。

2.1.8 晶體出現(xiàn)期 受精后20 h 10 min，肌節(jié)增加至5～9對，眼囊開始內(nèi)陷成眼杯，隨著眼杯的不斷擴(kuò)大，眼杯口出現(xiàn)圓形的晶體，進(jìn)入晶體出現(xiàn)期(圖1-20)。受精后21 h 30 min，眼前方出現(xiàn)一灰暗色斑塊，嗅囊形成。

2.1.9 尾芽期 受精后22 h 40 min，隨著肌節(jié)進(jìn)一步增多，胚體后端漸漸形成圓錐形的尾芽，進(jìn)入尾芽期(圖1-21)。受精后23 h 30 min，后腦2側(cè)出現(xiàn)耳囊。

2.1.10 肌肉效應(yīng)期 受精后24 h 10 min，胚體開始做間斷性的抽動，尾部進(jìn)行扭轉(zhuǎn)動作，進(jìn)入肌肉效應(yīng)期(圖1-22)。

2.1.11 心跳期 受精后26 h，尾芽不斷延伸與卵黃完全脫離并最終超出頭部，尾部的扭轉(zhuǎn)更加明顯，耳石出現(xiàn)。受精后27 h 30 min，頭部下后方的圍心腔內(nèi)心臟產(chǎn)生節(jié)律性跳動，進(jìn)入心跳期(圖1-23)，此時胚體轉(zhuǎn)動幅度加大并出現(xiàn)血液流動。

2.1.12 出膜前期 受精后34 h 40 min，胚體胸鰭出現(xiàn)鰭芽，尾部擺動幅度大，胚體在膜內(nèi)轉(zhuǎn)動加劇，視網(wǎng)膜出現(xiàn)色素，進(jìn)入出膜前期(圖1-24)。

2.1.13 出膜期 受精后41 h，胚體較前轉(zhuǎn)動劇烈，尾部擺動幅度增大，不斷將卵膜頂起并拍擊，隨著尾部的劇烈擺動，尾部的卵膜破裂，仔魚尾部先伸展出膜，頭部及大部分卵黃囊仍在卵膜內(nèi)，隨后在胚體轉(zhuǎn)動和尾部擺動共同作用下，頭部及卵黃囊部分整個身體破膜而出，進(jìn)入出膜期(圖1-25)。出膜時大部分仔魚先從尾部出，也有部分從頭部先出。從開始出膜到大量孵化出膜約需4 h 30 min，完全出膜約需13 h。

上述黃尾鲴胚胎發(fā)育觀察結(jié)果于水溫(23±1) ℃條件下進(jìn)行，具體每期時間和間隔時間見表1，圖形見圖1。

2.2 仔魚發(fā)育

2.2.1 初孵仔魚 剛出膜的仔魚身體呈彎曲狀，頭部彎曲靠近卵黃囊前端，背部脊柱彎曲呈弓形，經(jīng)10～20 min軀體才充分伸展，伸直的仔魚全長(4.86±0.13) mm，全身透明，只在眼睛下邊緣有少量色素，卵黃囊較大，呈橢圓形，背鰭褶已分化。出膜后的仔魚不定時進(jìn)行垂直向上運動，隨即頭朝下垂直沉入水底靜臥。

2.2.2 孵化后1 d 1日齡仔魚全長(5.13±0.11) mm，頭部已伸直，不再彎曲靠近卵黃囊，靠近頭部端卵黃囊為橢圓形，另一端向后延伸逐漸由粗變細(xì)，卵黃囊毛細(xì)血管血液流動明顯，除眼睛上下邊緣出現(xiàn)色素外，其他部位無色透明。仔魚很少活動，多靜臥于容器邊緣水底休息。

2.2.3 孵化后2 d 2日齡仔魚全長(6.62±0.14) mm，靠近頭部端卵黃囊橢圓形不再明顯，向后延伸變細(xì)變長，眼睛部位色素加深，出現(xiàn)鰾基、鰓蓋和鰓弓。仔魚活動能力漸漸增強(qiáng)，不定時做短暫水平游動。

2.2.4 孵化后3 d 3日齡仔魚全長(7.08±0.16) mm，卵黃囊前后延伸更長更細(xì)，表面出現(xiàn)少量色素，口能閉合，腸道和鰾形成。仔魚活動能力增強(qiáng)，可短暫水平游動，受到外界刺激能游動躲避，對光線開始敏感，夜晚用手電照射有趨光現(xiàn)象。

2.2.5 孵化后4 d 4日齡仔魚全長(7.51±0.14) mm，卵黃囊前后延伸為細(xì)線狀，表面出現(xiàn)較多色素，出現(xiàn)腰點(鰾充氣)，能夠平穩(wěn)平游，有頂水現(xiàn)象。腸道開始蠕動，腸管與咽部、口腔接通，并主動開口攝食，解剖腸道發(fā)現(xiàn)有少量小球藻、輪蟲出現(xiàn)，進(jìn)入內(nèi)源型營養(yǎng)向混合型營養(yǎng)轉(zhuǎn)換階段。

2.2.6 孵化后5 d 5日齡仔魚全長(7.72±0.19) mm，卵黃囊完全消失，軀干部色素更加密集，體色變深，腸道進(jìn)一步發(fā)育，前端膨大成囊狀，解剖腸道發(fā)現(xiàn)內(nèi)部有較多輪蟲殘肢，由混合型營養(yǎng)完全轉(zhuǎn)換為外源型營養(yǎng)。

2.3 胚胎和仔魚發(fā)育所需積溫

積溫計算參考文獻(xiàn)[3-4]，在水溫(23±1) ℃條件下，黃尾鲴從受精卵到胚胎出膜所需有效積溫(發(fā)育時間×水溫)為902～984 ℃·h；仔魚從胚胎出膜到卵黃囊完全吸收所需有效積溫為2 640～2 880 ℃·h。

3 討論與結(jié)論

黃尾鲴的卵黏性不強(qiáng)，自然產(chǎn)卵會發(fā)生相互粘結(jié)成塊但因黏附性差沉于水底現(xiàn)象，導(dǎo)致受精卵缺氧死亡，并易感染水霉，從而整體影響受精卵的孵化效果。因此，在人工繁殖黃尾鲴時，為提高孵化率，受精卵常進(jìn)行脫黏處理，并用防治水霉病藥物處理[5]。與四大家魚、河鱸[6]、蘭州鲇[7]、松潘裸鯉[8]相比，黃尾鲴的卵較小，卵徑僅1.1 mm左右，受精吸水膨脹后增加不大(1.3～1.4 mm)，不含有像加州鱸[9]、銀鱸[10]、藍(lán)太陽魚[11]等淡水魚類那樣用于增加浮力的油球，加之人工脫黏常使其表面附有泥沙，因而比重較大，為保證胚胎發(fā)育能夠正常進(jìn)行，孵化時要求水流速度必須足夠大，以受精卵能充分上下翻動為宜。

表1 黃尾鲴胚胎和卵黃囊期仔魚發(fā)育時間表

相關(guān)研究表明，黃尾鲴胚胎發(fā)育適宜水溫在20～27 ℃，最適水溫為22～25 ℃[12-13]。當(dāng)水溫低于15 ℃時，胚胎發(fā)育至原腸期便停止；水溫高于29 ℃時，出膜時間只需28～34 h，但仔魚多畸形，死亡率較高；水溫高于31 ℃時，胚胎發(fā)育過快，大批死亡。本研究在水溫(23±1) ℃條件下，受精卵經(jīng)41 h開始脫膜出苗，約13 h后完全脫膜，與黃邦星的研究結(jié)果[12]相一致，李生武則認(rèn)為脫膜的持續(xù)時間較長，需2～3 d才能完全脫膜[13]，差異原因還有待研究。

在胚胎發(fā)育中，黃尾鲴先出現(xiàn)肌肉效應(yīng)期后出現(xiàn)心跳期，與泥鰍[14]、中華沙鰍[15]、神仙魚[16]、松潘裸鯉[8]、圓斑星鰈[17]、蘭州鲇[7]、唐魚[18]順序一致，與銀鱸[10]和白斑狗魚[19]順序相反；出膜時以尾部先出為主，與泥鰍[14]、中華沙鰍[15]、神仙魚[16]、圓斑星鰈[17]、藍(lán)太陽魚[11]、蘭州鲇[7]、唐魚[18]類似，與銀鱸[10]、河鱸[6]、白斑狗魚[19]、黏皮鯔虎魚[20]則不同。孵化所需積溫為902～984 ℃·h，比唐魚(494 ℃·h)[18]、革胡子鲇(783.22 ℃)[21]等偏暖水性魚的值大；比白斑狗魚(2 641.37 ℃·h)[19]、施氏鱘(1 710～1 872 ℃·h)[22]、河鱸(2 540～2 880 ℃·h)[6]等偏冷水性魚的值小。

出膜后的黃尾鲴仔魚不定時進(jìn)行垂直上下運動，與泥鰍仔魚的垂直運動期非常相似，但不存在倒掛期[23]。仔魚出膜第4天出現(xiàn)腰點，能夠平穩(wěn)平游，開始有頂水現(xiàn)象，孵化時須降低水的流速，以減少仔魚體能的消耗。出膜第4～5天，仔魚主動開口攝食，腸道開始出現(xiàn)小球藻、輪蟲等開口餌料，表明黃尾鲴仔魚開口餌料和大多數(shù)淡水魚類相似；此時是內(nèi)源型營養(yǎng)向外源型營養(yǎng)轉(zhuǎn)換階段，可以下塘培育。