雞甲胺磷中毒性遲發(fā)性神經(jīng)病的電生理特點及藥物干預(yù)研究

胡軼虹， 周 艷， 邢英琦， 孫宏俠

急性有機磷中毒后引起遲發(fā)性周圍神經(jīng)病(organophosphate induced delayed neuropathy，OPIDN)多發(fā)生于急性中毒后20 d左右，發(fā)生率5%左右[1]，主要表現(xiàn)為感覺-運動性多發(fā)性神經(jīng)病，其特點為運動重于感覺，遠端重于近端，下肢重于上肢。以往許多文獻報告OPIDN選用大劑量B族維生素、ATP、地巴唑、硝酸一葉秋堿治療，但療效不確切。目前普遍認為糖皮質(zhì)激素早期應(yīng)用可以加速OPIDN的恢復(fù)，但副作用較大。三磷酸胞苷二鈉(CTP)，在機體內(nèi)參與磷脂類及核酸的合成和代謝，具有營養(yǎng)神經(jīng)，支持神經(jīng)細胞存活，延緩死亡，提高神經(jīng)細胞抗損傷能力，增強神經(jīng)細胞活性，促進神經(jīng)突起生長的作用。在臨床上廣泛應(yīng)用于糖尿病性及酒精性周圍神經(jīng)病，但缺乏科學(xué)的實驗研究。本研究用甲胺磷使leghorn雞染毒，將在出現(xiàn)遲發(fā)性神經(jīng)病臨床表現(xiàn)前進行神經(jīng)電生理檢測并觀察其動態(tài)變化，并通過神經(jīng)電生理研究評估地塞米松及CTP的療效。

1 材料與方法

1.1 動物來源及分組 萊亨母雞(長春市生物制品所免疫室)75只，雞齡8～14 m，體重(1.5±0.5) kg，營養(yǎng)良好。隨機分為3組，每組25只，從染毒后第2 d起給A組地塞米松(長春圣泰動物藥業(yè)有限公司1 mg/kg)，B組CTP(北京三九萬東藥業(yè)有限責(zé)任公司 3 mg/kg)，C組生理鹽水(1 ml/kg)，肌肉注射，每天1次，連續(xù)7 d。

1.2 動物模型的建立 這些Leghorn雞實驗前稱重，單只飼養(yǎng)于底是鐵絲網(wǎng)眼的鐵絲籠(0.5 m×0.5 m×0.8 m)之中，房間的溫度控制在21～23 ℃，每12 h光照/12 h黑暗為一個循環(huán)，甲胺磷(湖北沙隆達股份有限公司)用植物油溶解，濃度為5 mg/ml，按2 ml/kg體積通過套管直接灌入已斷食24 h的雞素囊中，染毒的雞用阿托品(河北省鄭州獸藥廠)保持度過急性期，染毒前20 min(8 mg/kg)肌注，染毒后3、6、10 h(4 mg/kg)肌注。

1.3 標本的留取 分別于染毒后1 w、2 w、3 w、4 w、8 w隨機取各實驗組2～6只進行標本取樣。雞在腹腔注射水合氯醛麻醉下，固定在特制木板上，室溫25 ℃，下肢去皮，在髂關(guān)節(jié)處沿坐骨神經(jīng)走行鈍性剝離肌肉，用玻璃分針游離坐骨神經(jīng)，至膝關(guān)節(jié)分為脛神經(jīng)和腓神經(jīng)，于髂關(guān)節(jié)及膝關(guān)節(jié)兩處用小剪刀剪斷，取坐骨神經(jīng)長約3 cm浸于臺式液中，除去周圍脂肪組織，進行電生理檢測。

1.4 主要儀器及電生理學(xué)檢測方法 連接Powerlab生物信號記錄儀(澳大利亞艾德公司生產(chǎn)，吉林大學(xué)生理實驗室提供)各組件，打開電源開關(guān)，予熱20～30 min。將神經(jīng)屏蔽盒的所有電極用臺氏液棉球擦拭，然后用一臺氏液浸濕的棉線調(diào)試記錄儀。其后將神經(jīng)粗的一端放在刺激電極上，細的一端放在記錄電極上。蓋上屏蔽盒，在50 Hz交流干擾小的情況下進行實驗。調(diào)節(jié)刺激強度，從0.1 v開始，逐漸增加刺激強度至產(chǎn)生雙向動作電位，當(dāng)刺激強度增至1 v，動作電位不再加大，記錄刺激偽跡前沿到動作電位起始處時間間隔即為潛伏期，動作電位的上相波頂點與下相波的最低點之間的距離即為波幅。運動神經(jīng)傳導(dǎo)速度的測定基本同前，近端置于刺激電極上，遠端置于兩個記錄電極上，兩記錄電極間距離為2.5 cm，放大器有A、B兩組，示波器Y上和Y下條件一致(放大倍數(shù)均為500)，按刺激器起動鈕可產(chǎn)生上下兩個動作電位，用兩記錄電極間距離除以兩動作電位潛伏期差即為神經(jīng)傳導(dǎo)速度。

1.5 臨床觀察指標 每日觀察雞流涎，流淚，呼吸，瞳孔及肌束顫動、步態(tài)等遲發(fā)性神經(jīng)毒性的臨床體征，臨床OPIDN的分級標準依照1987年Robertson的分級標準[2]，0級：沒有體征；1級：步態(tài)異常；2級：動物用后臀休息后但還能站立；3級：完全癱瘓。

2 結(jié) 果

2.1 模型死亡、體征變化 雞經(jīng)甲胺磷染毒后5～10 min即表現(xiàn)萎靡、流涎、瞳孔縮小、喜臥，從第2 d開始有動物死亡，共死亡10只，死亡時間為2～6 d，另2只分別死于染毒后12 d及40 d，3組間死亡率無顯著性差異。之后經(jīng)過1 w左右的潛伏期，出現(xiàn)周圍神經(jīng)病的癥狀和體征，動物的表現(xiàn)開始呈全身無力狀態(tài)，喜臥，后出現(xiàn)步態(tài)不穩(wěn)，逐漸發(fā)展為站立困難，此期肌力下降表現(xiàn)為1級及2級，無完全癱瘓者，至第4 w肌力恢復(fù)正常，3組間發(fā)病率無顯著性差異。

表1 各實驗組死亡及發(fā)病情況的比較

各實驗組死亡及發(fā)病差異無顯著性P>0.05

2.2 電生理檢測結(jié)果 染毒后1 w，波幅有明顯降低，而運動神經(jīng)傳導(dǎo)速度無明顯改變，提示周圍神經(jīng)早期以軸索損害為主。其后2，3 w波幅逐漸升高，至第4 w波幅已近恢復(fù)正常。染毒后2 w出現(xiàn)運動神經(jīng)傳導(dǎo)速度減慢，提示出現(xiàn)脫髓鞘改變，至第8 w運動神經(jīng)傳導(dǎo)速度已恢復(fù)正常。3個實驗組相比較差異無顯著性(見表2、表3)。

表2 各實驗組運動神經(jīng)傳導(dǎo)速度變化

注：組內(nèi)比較1 w、8 w與2 w、3 w、4 w間有顯著性差異P<0.05；組間比較差異無顯著性P>0.05

表3 各實驗組波幅變化

注：組內(nèi)比較1 w、2 w、3 w與4 w、8 w間有顯著性差異P<0.05；組間比較差異無顯著性P>0.05

3 討 論

OPIDN發(fā)生與有機磷農(nóng)藥的種類，中毒途徑及中毒量有關(guān)。甲胺磷(又名多滅磷或克螨?。篗ethamidophos/Tamaron，化學(xué)名OS-二甲基-硫代磷酰胺：OS-dimethylphosphoramidothiolate)屬硫代磷酸酯類化合物，高毒，是一種高效、內(nèi)吸、觸殺、低殘留、廣譜性有機磷殺蟲劑，對人、畜高毒[3]。不同的有機磷農(nóng)藥引起的OPIDN有種屬特異性，以人類和雞最為敏感，而嚙齒動物則不敏感。鑒于消化道染毒毒物劑量易于控制，雞對甲胺磷的敏感性高，我們選用萊亨母雞進行甲胺磷染毒制成遲發(fā)性神經(jīng)病的動物模型。本實驗發(fā)現(xiàn)電生理改變(染毒后1 w)明顯早于臨床體征(染毒后2 w)的出現(xiàn)，電生理檢測的陽性率(90%)也明顯高于臨床體征的陽性率(14.7%)，這更加客觀地說明甲胺磷染毒萊亨雞是一種成功的OPIDN模型。

1987年Senanayake首次報道急性有機磷中毒后1～4 d可發(fā)生一種以肌無力為突出表現(xiàn)的綜合征，因發(fā)病時間居于急性膽堿能危象和遲發(fā)性周圍神經(jīng)病之間被稱為中間綜合征[4]，為有機磷中毒的主要病死原因。本實驗死亡動物染毒后已用阿托品搶救度過急性期，死亡時間主要在2～6 d，主要原因可能是中間綜合征。曾有學(xué)者就早期使用激素治療中間綜合征進行過臨床研究[5]，發(fā)現(xiàn)其未降低發(fā)病及死亡率，這與我們的實驗結(jié)果相一致。有學(xué)者[6]提出中毒引起的周圍神經(jīng)變性，先影響最長神經(jīng)的末稍端，而后慢慢地向中樞段擴布。中毒性變性的原發(fā)病變主要在胞體，是代謝性障礙，導(dǎo)致軸漿流中營養(yǎng)成分減少，供應(yīng)末梢減少，很少有脫髓鞘變化。因此中毒變性時，主要表現(xiàn)為動作電位波幅劇減，而運動神經(jīng)傳導(dǎo)速度大多正?；蜉p度減慢[7]。本實驗電生理檢測顯示染毒后1 w出現(xiàn)波幅明顯降低，2 w出現(xiàn)運動神經(jīng)傳導(dǎo)速度減慢，但比波幅改變輕，這與上述理論完全吻合。

以往許多文獻報告OPIDN選用大劑量B族維生素、改善微循環(huán)及針灸理療等治療，但療效不確切，中醫(yī)以各種活血化淤方劑為主[8～10]，臨床取得一些療效，但缺乏實驗證據(jù)。虞炳慶等應(yīng)用激素治療25例OPIDN患者，發(fā)現(xiàn)其能顯著提高遲發(fā)性神經(jīng)病1 y內(nèi)痊愈顯效率[11]。王敏等[12]對22例有機磷中毒后遲發(fā)性神經(jīng)病患者進行為期10～14 d的CTP治療，發(fā)現(xiàn)總有效率達77%。本實驗中應(yīng)用地塞米松及CTP進行干預(yù)治療，但各時間點組間比較差異無顯著性。至第8 w，電生理檢測結(jié)果已近恢復(fù)正常，提示本病有自愈傾向，且激素副作用大，因此不主張臨床應(yīng)用。CTP也未得到陽性結(jié)果，可能與用藥劑量及治療療程有關(guān)。為了在OPIDN治療上有所突破，還應(yīng)進行發(fā)病機制方面的相關(guān)研究。