淺析您最關(guān)心的獸用疫苗工藝技術(shù)

張韌

生物咖啡茶（微信號(hào)：cafmetea）組織的《您最關(guān)心哪些獸用疫苗工藝技術(shù)？》投票活動(dòng)結(jié)束了，共得到286位朋友投票選擇，投票結(jié)果如圖1。

懸浮培養(yǎng)工藝技術(shù)獲得17%得票率，毫無懸念的高居榜首;而以13%得票率獲得第二名的疫苗佐劑多少有些出人意外。近兩年受到行業(yè)重視的下游純化過濾技術(shù)、層析技術(shù)分別以12%、11%得票率獲得第三和第四名;同樣是近年來異軍突起的病毒樣顆粒（VLP）疫苗以10%得票率排名第五。

而傳統(tǒng)疫苗原輔料牛血清以4%得票率排名最后，其次是與之對(duì)應(yīng)的低血清培養(yǎng)基;新興工藝設(shè)備的制藥一次性系統(tǒng)和當(dāng)今生物技術(shù)熱點(diǎn)之一的CRISPR基因編輯技術(shù)在獸用生物制品中的應(yīng)用以6%得票率排在第八和第九位i獸用疫苗生產(chǎn)企業(yè)生物安全三級(jí)防護(hù)以7%得票率排名第七;無血清培養(yǎng)基以g%得票率排名第六。

筆者認(rèn)為得票率高低主要是技術(shù)難度高低和行業(yè)發(fā)展關(guān)注度高低所決定的，而不一定代表市場(chǎng)需求多少。懸浮培養(yǎng)工藝技術(shù)自2008年在獸用疫苗生產(chǎn)工藝中實(shí)現(xiàn)突破到現(xiàn)在整整10年，已經(jīng)成為獸用疫苗行業(yè)普遍采用的生產(chǎn)工藝技術(shù)，其中大部分采用低血清培養(yǎng)方式，為什么懸浮培養(yǎng)工藝技術(shù)得票率第一，而牛血清和低血清培養(yǎng)基得票率反而排在倒數(shù)第一和第二呢？這只能說明細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的方式和成本、病毒培養(yǎng)的效果和成本、以及新型細(xì)胞和疫苗等方面仍然存在很多挑戰(zhàn)，而牛血清和低血清培養(yǎng)基已非技術(shù)要點(diǎn)和難點(diǎn)。更進(jìn)一步說，獸用疫苗生產(chǎn)企業(yè)為了提高疫苗質(zhì)量，更加追求高質(zhì)量的懸浮培養(yǎng)工藝技術(shù)，例如對(duì)細(xì)胞株進(jìn)一步馴化、變微載體培養(yǎng)為全懸浮培養(yǎng)、進(jìn)一步提高細(xì)胞密度和降低培養(yǎng)成本、進(jìn)一步提高病毒產(chǎn)率、進(jìn)一步降低牛血清添加量等等。由此可以研判，獸用疫苗行業(yè)對(duì)懸浮培養(yǎng)工藝技術(shù)的開發(fā)和優(yōu)化的需求是持續(xù)的，其開發(fā)和優(yōu)化的速度和成功率直接影響獸用疫苗企業(yè)的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)能力和企業(yè)經(jīng)營(yíng)業(yè)績(jī)。而從實(shí)際情況看，企業(yè)自身的技術(shù)開發(fā)能力尚不能很好地滿足這種發(fā)展需求。

疫苗佐劑的關(guān)注度異軍突起，與疫苗技術(shù)發(fā)展、新型疫苗不斷涌現(xiàn)的需求直接相關(guān)，這也引發(fā)不少企業(yè)投身到佐劑研發(fā)和生產(chǎn)的行列中。然而疫苗佐劑作為疫苗的主要成分之一，具有很高的安全性和有效性要求，因此其研究也是長(zhǎng)時(shí)間大資金的工程，且具有較大風(fēng)險(xiǎn)。人類研究和使用疫苗佐劑的歷史已經(jīng)超過80年，詳細(xì)研究過幾十種候選疫苗佐劑，但是目前批準(zhǔn)使用的人用疫苗佐劑只有少數(shù)幾種。動(dòng)物疫苗佐劑的法規(guī)和技術(shù)要求雖然低于人用疫苗，但同樣是需要經(jīng)過審批的疫苗主要成分。我們期待專業(yè)的疫苗佐劑企業(yè)不斷研發(fā)出滿足行業(yè)需求和發(fā)展的高質(zhì)量安全有效的疫苗佐劑產(chǎn)品。

獸用疫苗生產(chǎn)技術(shù)水平以及市場(chǎng)化程度的提高、新型疫苗的不斷出現(xiàn)導(dǎo)致對(duì)疫苗純化的要求越來越高，因此近兩年獸用疫苗下游純化技術(shù)開發(fā)和應(yīng)用如火如荼。但從投票結(jié)果看，過濾技術(shù)和層析技術(shù)的得票率不相上下，分別為12%和11%，這同樣出人意外。通常蛋白類藥品多采用層析工藝，而病毒類疫苗是以過濾工藝（微濾、超濾）為主，層析工藝為輔;尤其獸用疫苗純度要求低于人用疫苗，但更加注重成本和效率，所以一般不考慮成本更高的層析工藝。筆者認(rèn)為，之所以導(dǎo)致二者不相上下的投票結(jié)果，一方面體現(xiàn)出獸用疫苗行業(yè)對(duì)純化工藝技術(shù)了解不足，另一方面也可能緣于層析供應(yīng)商出于自身商業(yè)目的的引導(dǎo)所致。

純化工藝相對(duì)復(fù)雜，疫苗類型多、純化工藝方法多，因此純化工藝往往是個(gè)性化的（圖2），這也充分體現(xiàn)出獸用疫苗企業(yè)對(duì)疫苗純化技術(shù)人才和技術(shù)咨詢服務(wù)的迫切需求狀況。

病毒樣顆粒（ VLP）疫苗以10%得票率排名第五雖然在意料之中，但筆者也不得不感嘆新型疫苗的迅猛來勢(shì)。資料顯示，在研的病毒樣顆粒疫苗有豬圓環(huán)病毒、口蹄疫病毒、兔瘟病毒、豬細(xì)小病毒、

禽流感病毒、新城疫病毒、禽傳染性法氏囊病毒、禽偏肺病毒等，雖然短期內(nèi)新型疫苗還不能取代傳統(tǒng)病毒疫苗，但幾年后隨著以病毒樣顆粒疫苗為代表的大量新型疫苗上市，勢(shì)必會(huì)對(duì)傳統(tǒng)病毒疫苗及其供應(yīng)商的市場(chǎng)造成顛覆。不過，病毒樣顆粒疫苗也需要解決純化工藝問題，尤其是大腸桿菌表達(dá)的VLP疫苗往往存在變性復(fù)性的技術(shù)問題需要解決。

無血清培養(yǎng)基排名第六，代表了生物制藥中細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)所追求的趨勢(shì)，尤其是單抗藥物，由于安全性和法規(guī)要求，化學(xué)限定無血清培養(yǎng)基得到普遍應(yīng)用，而單抗藥物的價(jià)格又足以承受無血清培養(yǎng)基的高成本。投票率顯示無血清培養(yǎng)基在獸用疫苗行業(yè)過熱，一個(gè)重要原因是質(zhì)量參差不齊的牛血清價(jià)格一直高居不下，用戶難免對(duì)其產(chǎn)生抵觸心理，同時(shí)較高的牛血清價(jià)格也給昂貴的無血清培養(yǎng)基打開了使用空間，給有關(guān)供應(yīng)商帶來機(jī)會(huì)。實(shí)際上不少病毒的生產(chǎn)在無血清培養(yǎng)狀態(tài)下效果不一定好，如果牛血清價(jià)格下降、質(zhì)量提升，目前這種市場(chǎng)狀況很可能再次改觀。南美、印度的口蹄疫疫苗生產(chǎn)企業(yè)至今沿用成牛血清的懸浮培養(yǎng)生產(chǎn)工藝也可以佐證這個(gè)觀點(diǎn)。

獸用疫苗生產(chǎn)企業(yè)生物安全三級(jí)防護(hù)是未來兩年口蹄疫疫苗和禽流感疫苗生產(chǎn)企業(yè)必須通過的關(guān)卡，受到相關(guān)企業(yè)高度重視，因此獲得第七的得票率也屬正常。

一次性生物反應(yīng)器在單抗研發(fā)和生產(chǎn)中已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用，但由于其成本較高，故鮮有用于獸用疫苗生產(chǎn)的案例，但對(duì)于疫苗研發(fā)仍不失為一種選擇。

這兩年全球超級(jí)熱門的CRISPR基因編輯技術(shù)，在獸用生物制品中的應(yīng)用的得票率僅達(dá)到6%，排在第九位，這與其在人的醫(yī)藥領(lǐng)域研發(fā)熱度形成較大反差。不過新技術(shù)在獸用生物制品行業(yè)應(yīng)用往往有滯后性，一旦出現(xiàn)第一個(gè)應(yīng)用，整個(gè)行業(yè)就可能蜂擁而上。有資料顯示，CRISPR基因編輯技術(shù)可以用于病毒診斷、提高病毒滴度、高通量篩選藥物靶點(diǎn)、與其它技術(shù)結(jié)合構(gòu)建更安全更廣譜疫苗等等，因此筆者建議大家對(duì)CRISPR技術(shù)給予更多關(guān)注和嘗試，今天的VLP很可能就是明天的CRISPR。

對(duì)于排名最末兩位的低血清培養(yǎng)基和牛血清，筆者認(rèn)為主要是堅(jiān)持質(zhì)量穩(wěn)定和成本降低的一貫要求。尤其是牛血清，因眾所周知的原因?qū)е聝r(jià)格高居不下，且質(zhì)量良莠不齊、生產(chǎn)工藝落后。特別是牛血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)指標(biāo)與方法，不能科學(xué)的反映出牛血清的核心質(zhì)量和有效功能，用戶不得不長(zhǎng)期沿用試錯(cuò)的方法逐批次選擇牛血清，這給疫苗企業(yè)帶來額外檢測(cè)成本，同時(shí)牛血清供應(yīng)商不得不保持大量庫(kù)存等待用戶檢測(cè)結(jié)果，雙方都造成很大的浪費(fèi)。這種依賴盲目試錯(cuò)的生產(chǎn)工藝和檢測(cè)方法已明顯落后于生物技術(shù)的發(fā)展節(jié)奏和需求，因此牛血清產(chǎn)品的工藝技術(shù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)改革勢(shì)在必行。

由于時(shí)間和能力有限，《您最關(guān)心哪些獸用疫苗工藝技術(shù)？》投票項(xiàng)目未能做到十全十美，統(tǒng)計(jì)也不一定充分，例如有朋友留言提出希望獲得物有所值、高性價(jià)比的上下游全套工藝系統(tǒng)解決方案。筆者認(rèn)為這是一個(gè)很好的建議，代表了用戶需求發(fā)展趨勢(shì)，而這也正是生物咖啡茶的初衷，作為生物制藥行業(yè)共享信息交流平臺(tái)，生物咖啡茶致力于促進(jìn)生物制藥有關(guān)工藝技術(shù)的交流，包括上下游工藝技術(shù)。在此基礎(chǔ)上如果有更多生物工藝技術(shù)專家和供應(yīng)商參與和付諸實(shí)踐，可以更好地滿足獸用疫苗行業(yè)用戶對(duì)工藝研發(fā)的需求，這不僅可以增加用戶的工藝開發(fā)成功率、減少機(jī)會(huì)成本和沉沒成本，也給有技術(shù)能力的供應(yīng)商帶來新的發(fā)展機(jī)遇。本文完成前，生物咖啡茶也做過一些這方面有益的嘗試，積累了一些經(jīng)驗(yàn)，在此歡迎供需雙方的朋友們交流與合作。