超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定食品中柑橘紅2號(hào)和蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ染料

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(山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院,山東濟(jì)南 250101)

柑橘紅2號(hào)和蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ 均屬于脂溶性偶氮類染料,主要在石油、機(jī)油和其他的一些工業(yè)溶劑中作為工業(yè)染料使用[1]。因這些工業(yè)染料具有著色穩(wěn)定、色澤艷麗、價(jià)格低廉等特點(diǎn),一些不法商家將其添加到食品中進(jìn)行染色,以提高其市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。柑橘紅2號(hào)和蘇丹紅染料在化學(xué)結(jié)構(gòu)上均具有偶氮骨架,這種結(jié)構(gòu)決定了其具有一定的致癌性[2]。據(jù)世界衛(wèi)生組織的國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)1995年確定,蘇丹紅屬第三類致癌物質(zhì);歐盟國(guó)家已在1995年禁止其作為食用色素,我國(guó)已明確將蘇丹紅列在《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單》中。世界衛(wèi)生組織認(rèn)為柑橘紅2號(hào)具有致癌危險(xiǎn),對(duì)人體的肝臟、腎臟器官具有明顯的毒副作用,也不能作為食品添加劑用于食品中[3]。但近幾年各國(guó)仍不斷有食品中添加化工染料的食品安全事件發(fā)生。一些不法食品企業(yè)把蘇丹紅添加到食品中,曾引發(fā)“紅心鴨蛋”、“亨氏辣椒醬”等食品安全事件。而近幾年水果市場(chǎng)也相繼發(fā)現(xiàn)“染色橙”食品安全問題,香港食物環(huán)境衛(wèi)生署抽查39個(gè)橙類樣品,發(fā)現(xiàn)1/3的樣品橙皮中含禁用及可能致癌的柑桔紅2號(hào)色素。濫用非法染料給食品安全及消費(fèi)者健康帶來了巨大的隱患。因此,建立快速、準(zhǔn)確且能同時(shí)檢測(cè)柑橘紅2號(hào)和蘇丹紅的檢測(cè)方法,對(duì)食品中非法染料的市場(chǎng)監(jiān)管具有重要意義。

柑橘紅2號(hào)和蘇丹紅染料的測(cè)定方法有薄層色譜法、液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、氣相色譜法及酶聯(lián)免疫測(cè)定法(ELISA)等方法[4-7]。其中以液相色譜法應(yīng)用最為廣泛,但液相色譜法存在靈敏度較低,特別對(duì)于復(fù)雜基質(zhì),無法滿足痕量檢測(cè)的定性定量等問題[5-10]。高效液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜因其高靈敏度、高選擇性及定量定性準(zhǔn)確等特性,成為目前此類禁用物質(zhì)的最佳檢測(cè)方法[11-14]。前處理過程方面有直接提取法[15]、氧化鋁柱凈化方法[16]、凝膠滲透色譜(GPC)凈化方法[17]和氨基柱凈化方法[1,3]。其中，直接提取和氧化鋁凈化的方法去除背景干擾能力差,凝膠滲透色譜凈化的方法耗時(shí)長(zhǎng),耗溶劑多,易交叉污染。氨基固相萃取柱具有正相和陰離子交換雙重保留作用,被應(yīng)用于復(fù)雜基質(zhì)中結(jié)構(gòu)相近的化合物的檢測(cè)中。目前對(duì)辣椒制品等食品中蘇丹紅的研究報(bào)道較多,而同時(shí)檢測(cè)多種基質(zhì)中柑橘紅2號(hào)和蘇丹紅染料的方法鮮有報(bào)道[17-20]。

本研究采用乙腈提取,NH2固相萃取柱凈化富集,高效液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè),以期建立適用于水果、蜜餞、辣椒制品、火鍋底料及肉制品中柑橘紅2號(hào)和蘇丹紅染料同時(shí)檢測(cè)的方法。并對(duì)該方法的靈敏度、選擇性、檢出限進(jìn)行評(píng)價(jià),為食品中痕量水平非法染料的定性、定量檢測(cè)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

臍橙、蜜餞(山楂卷)、辣椒油、火鍋底料(紅油半固體)及香辣肉灌腸等樣品 均購自濟(jì)南當(dāng)?shù)爻?柑橘紅2號(hào)(純度≥90.0%)、蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(純度≥90.0%) 上海安譜科學(xué)儀器有限公司,4 ℃保存;甲醇、乙腈(色譜純) 美國(guó)Fisher公司;甲酸、醋酸銨(色譜純) 美國(guó)Sigma-Aldrich公司;水 為Milli-Q超純水機(jī)制備;氮?dú)?>99.999%);氨基固相萃取柱(500 mg,3 mL)、色譜柱 Acquity UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7 μm) 美國(guó)Waters公司;有機(jī)微孔濾膜(0.22 μm) 上海安譜科學(xué)儀器有限公司。

ACQUITYTM超高效液相色譜儀、Xevo TQ-S質(zhì)譜儀配有電噴霧(ESI)電離源和MasslynxTM色譜工作站 美國(guó)Waters公司;Sigma 3-18K高速冷凍離心機(jī) 德國(guó)Sigma公司;超聲波清洗器 寧波新芝生物科技有限公司;MS3渦旋混合器 IKA公司;N-EVAP-45位氮吹儀 美國(guó)Organomation公司;SQP-電子天平 塞多利斯科學(xué)儀器有限公司;Milli-Q超純水系統(tǒng) 美國(guó)Millipore公司;粉碎機(jī) 德國(guó)萊馳公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的配制 準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)適量,用乙腈溶解并定容,配制成200 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,于4 ℃條件下保存,分別吸取各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制成10 μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)工作液,4 ℃條件下保存。

1.2.2 色譜及質(zhì)譜條件

1.2.2.1 質(zhì)譜解析及條件的優(yōu)化 柑橘紅2號(hào)同蘇丹紅染料均為含有萘母體骨架的偶氮染料,因此對(duì)其較為相似的子離子碎片進(jìn)行解析,對(duì)于此類物質(zhì)的準(zhǔn)確定性具有較好確證作用。在二級(jí)質(zhì)譜全掃描模式(Q1為單離子監(jiān)測(cè)SIM,Q3為全掃描full scan)下獲得該目標(biāo)物的碎片離子指紋圖譜。二級(jí)全掃描模式為定性的強(qiáng)有力手段,但在定量上相比多反應(yīng)檢測(cè)掃描(MRM)靈敏度還是不足,選用MRM掃描模式,確定定性離子對(duì)及定量離子對(duì),并優(yōu)化裂解電壓、碰撞能量等參數(shù)。

1.2.2.2 色譜條件的優(yōu)化 在優(yōu)化的質(zhì)譜條件下,考察不同流動(dòng)相對(duì)目標(biāo)物質(zhì)譜信號(hào)的影響。選用BEH C18色譜柱,分別以甲醇-水、乙腈-水、乙腈-10 mmol/L乙酸銨溶液和乙腈-0.1%甲酸水溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2.2.3 色譜條件 色譜柱:BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7 μm);流動(dòng)相:乙腈(A)和0.1%甲酸-水溶液(B),梯度洗脫程序(A):0～2.0 min:10%→50%;2.0～3.0 min:50%→95%;3.0～7.0 min:95%保持4 min;7.0～7.1 min:95%→10%;7.1～9.0 min:10%保持。流速:0.3 mL/min;柱溫:40 ℃;進(jìn)樣體積:2 μL。

1.2.2.4 質(zhì)譜條件 離子源:電噴霧離子源(ESI);離子化模式:正離子模式(ESI+);毛細(xì)管電壓:3.0 kV;錐孔電壓:25 V;脫溶劑氣溫度500 ℃;離子源溫度:150 ℃;脫溶劑氣流速:850 L/h;錐孔氣流速:150 L/h;碰撞氣流速:0.12 mL/min;掃描方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM);5種非法染料的定性離子定量離子對(duì)及質(zhì)譜參數(shù)見表1。

1.2.3 前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

1.2.3.1 樣品提取劑的選擇 考慮到5種偶氮染料的親脂性特點(diǎn)和各種食品等基質(zhì)較復(fù)雜等原因,對(duì)實(shí)驗(yàn)提取溶劑進(jìn)行了研究。

1.2.3.2 前處理方式的選擇 為了優(yōu)化較好的前處理凈化手段,分別比較直接提取、中性氧化鋁柱[18]和氨基柱三種前處理方式進(jìn)行比較。并對(duì)三種方式最終提取液的總離子流圖及基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行研究來比較凈化效果。

1.2.3.3 樣品除脂探索 參考文獻(xiàn)[8]方法,以辣椒油和火鍋底料為對(duì)象,考察經(jīng)過正己烷脫脂和不脫脂對(duì)目標(biāo)物回收率的影響。

表1 5種非法染料的質(zhì)譜參數(shù)Table 1 Optimized parameters of MS/MS for five illegal dyes

注：*為定量離子。 1.2.3.4 定容體積的選擇 以臍橙、蜜餞、辣椒油、火鍋底料及香辣肉灌腸等基質(zhì)為研究對(duì)象,每類基質(zhì)添加50 μg/kg含量水平的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),按照1.2.3步驟進(jìn)行前處理,每個(gè)基質(zhì)做3個(gè)平行,定容體積分別為5、10和15 mL,考察不同定容體積對(duì)目標(biāo)物響應(yīng)及基質(zhì)效應(yīng)的影響。

1.2.4 樣品前處理

1.2.4.1 樣品制備 固體樣品(臍橙、蜜餞、香辣肉灌腸)切小塊,以10000 r/min轉(zhuǎn)速粉碎5 min,充分粉碎、混勻,其中水果樣品全果粉碎;半固體樣品(火鍋底料)直接用粉碎機(jī)以5000 r/min轉(zhuǎn)速,粉碎5 min,粉好的樣品分裝于潔凈容器中;液體樣品(辣椒油)搖勻后備用。

1.2.4.2 樣品提取及凈化 稱取1.2.4.1中制備的樣品2 g(精確至0.01 g)于50 mL離心管中,加入2 g氯化鈉,渦旋1 min,加入10 mL乙腈,渦旋1 min,超聲20 min,以8000 r/min轉(zhuǎn)速離心3 min。取上清液乙腈層移入15 mL離心管中,40 ℃氮吹干,加入3 mL乙腈-二氯甲烷(1+99)溶液復(fù)溶,待凈化。

用6 mL乙腈+二氯甲烷(1+99,體積比)活化氨基柱,待液面降至柱床時(shí),將待凈化液轉(zhuǎn)移至固相萃取柱,同時(shí)收集流出液。用3 mL乙腈+二氯甲烷(1+99,體積比)清洗離心管兩次,淋洗并收集流出液。合并流出液,40 ℃氮?dú)饬飨聺饪s至干,以甲酸-乙腈(1%)溶液復(fù)溶,并定容至10 mL,過微孔濾膜后,供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

1.2.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 稱取5份相同的空白基質(zhì)樣品,分別加入一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1.2.1.1),按1.2.4.2的步驟制備得到含量為2、4、10、20、40 ng/mL的基質(zhì)配標(biāo),得到本實(shí)驗(yàn)所用的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.6 線性范圍、決定系數(shù)及定量限 稱取5份相同的空白基質(zhì)樣品,分別加入一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1.2.1.1),按1.2.4.2的步驟制備得到含量為2、4、10、20、40 ng/mL的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。將標(biāo)準(zhǔn)工作溶液按濃度由低到高依次測(cè)定,以各物質(zhì)定量離子對(duì)的峰面積(Y)對(duì)其質(zhì)量濃度(X)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。分別在空白基質(zhì)中加10、5 μg/kg的目標(biāo)物,按1.2.4前處理方法處理后,測(cè)試其信噪比,分別確定定量限和檢出限。

1.2.7 回收率和精密度 分別在臍橙、蜜餞、辣椒油、火鍋底料和香辣肉灌腸5種基質(zhì)的陰性樣品中進(jìn)行10、50、100 μg/kg三個(gè)濃度水平的柑橘紅2號(hào)和蘇丹紅的加標(biāo)回收和精密度實(shí)驗(yàn),每個(gè)濃度水平重復(fù)測(cè)定6次。

1.2.8 基質(zhì)效應(yīng)實(shí)驗(yàn) 取空白基質(zhì)樣品,按1.2.4的步驟制備空白基質(zhì)溶液。分別用空白溶液和定容溶劑稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,得到同濃度水平的測(cè)定液。通過分別測(cè)定樣品空白提取液與純?nèi)軇┲刑砑油侥繕?biāo)成分的響應(yīng)值,計(jì)算二者的相對(duì)比值來評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)(Matrix effect,ME),ME(%)=(基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液響應(yīng)/無基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液響應(yīng)-1)×100?；|(zhì)效應(yīng)為負(fù)值表示存在基質(zhì)抑制效應(yīng);基質(zhì)效應(yīng)為正值表示存在基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng),0為無基質(zhì)效應(yīng),絕對(duì)值越大，基質(zhì)效應(yīng)越強(qiáng)。按所述方法對(duì)5種基質(zhì)中5種非法染料的基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1.2.9 實(shí)際樣品的測(cè)定 在本文建立的試驗(yàn)條件下,對(duì)臍橙、蜜餞、火鍋底料、辣椒油、香辣肉灌腸各10批次共50批次市售實(shí)際樣品進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 儀器條件的優(yōu)化

2.1.1 質(zhì)譜解析及條件的優(yōu)化 從圖1的二級(jí)全掃描質(zhì)譜圖可以看到,在正離子模式下,柑橘紅2號(hào)及蘇丹紅染料主要以[M+H]+離子形式存在。分析5種非法染料的碎片離子指紋圖譜發(fā)現(xiàn),這幾種偶氮染料具有共同的幾種碎裂方式,均易在偶氮處發(fā)生斷裂而得到不同的碎片。首先,該類化合物母體骨架上的酚羥基容易斷裂得到相應(yīng)的碎片離子[M-OH+H]+;與萘母體上的偶氮在N=N處斷產(chǎn)生具有母核碎片離子156[M-R]+和其取代基碎片離子,其中m/z 156碎片部分為偶氮染料的母體骨架部分,可以作為偶氮類染料的共同特征碎片;此外,Sudan Ⅲ和 Sudan Ⅳ在取代基上的偶氮結(jié)構(gòu)仍可以發(fā)生斷裂而得到不同的碎片;柑橘紅2號(hào)在其取代基上的醚鍵也容易發(fā)生斷裂掉甲氧基碎片,5種偶氮非法染料的二級(jí)全掃描質(zhì)譜圖見圖1。為了同時(shí)滿足定性定量的目的,MRM掃描模式下得到5種非法染料的一個(gè)母離子和兩個(gè)子離子。

圖1 柑橘紅2號(hào)和蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的二級(jí)全掃描質(zhì)譜圖Fig.1 MS2 spectra of Citrus Red 2 and Sudan I～Ⅳ dyes注:A:柑橘紅2號(hào);B:蘇丹紅I;C:蘇丹紅Ⅱ;D:蘇丹紅Ⅲ;E:蘇丹紅Ⅳ。

2.1.2 色譜條件的優(yōu)化 選用BEH C18色譜柱,分別以考察甲醇-水、乙腈-水、乙腈-10 mmol/乙酸銨溶液和乙腈-0.1%甲酸水溶液幾種流動(dòng)相條件下目標(biāo)物的響應(yīng),結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乙腈較甲醇作為流動(dòng)相時(shí)，5種染料響應(yīng)值增強(qiáng),且峰形更好。而加入0.1%甲酸水溶液可以提高5種染料的離子化效率,并較好地改善峰形。最終確定采用乙腈-0.1%甲酸水作為流動(dòng)相。通過優(yōu)化梯度洗脫程序,使目標(biāo)物與雜質(zhì)組分有效地分離,且峰形良好。

2.2 前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

2.2.1 樣品提取劑的選擇 考慮到5種偶氮染料的親脂性特點(diǎn)和各種食品等基質(zhì)較復(fù)雜等原因,采用乙腈提取,氯化鈉鹽析,一方面可以有效提高高油脂樣品中偶氮染料的提取效率,另一方面對(duì)于含水較多的柑橘樣品,可以促進(jìn)目標(biāo)物進(jìn)入乙腈層,起到鹽析的作用。本方法采用乙腈-氯化鈉提取體系,氨基柱凈化,較好地除去復(fù)雜基質(zhì)中各種高油脂、高糖、高鹽等雜質(zhì)干擾,結(jié)合液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜,可達(dá)到檢測(cè)要求。

2.2.2 前處理方式的選擇 分別比較直接提取、中性氧化鋁柱[18]和氨基柱三種前處理手段。在前處理過程中發(fā)現(xiàn),對(duì)于高油脂等樣品,直接提取和中性氧化鋁柱不能很好地去除油脂,最后存在明顯的油脂殘留。此外,通過三種前處理方式的總離子流圖(見圖2)發(fā)現(xiàn),直接提取方法干擾成分最多,中性氧化鋁柱雖然起到了一定的凈化效果,但是相比氨基柱還是要差一些。另一方面,對(duì)三種不同的前處理方式的基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)(評(píng)價(jià)方法見1.2.8),發(fā)現(xiàn)中性氧化鋁柱法基質(zhì)效應(yīng)與直接提取法相當(dāng)(基質(zhì)效應(yīng)在60%以上),原因可能是,中性氧化鋁法是采用非極性有機(jī)溶劑進(jìn)行提取,對(duì)于高油脂樣品中的油脂成分提取率過高,帶來較嚴(yán)重的基質(zhì)效應(yīng)。通過乙腈提取后經(jīng)過氨基柱凈化，回收率滿足要求,干擾物較少,基質(zhì)效應(yīng)小。氨基柱是以硅膠為基質(zhì)的氨丙基萃取柱,在非極性有機(jī)溶劑中具有強(qiáng)的正相保留作用和弱的陰離子交換雙重保留作用,特別適合于結(jié)構(gòu)相近的化合物的凈化。最終,選擇氨基柱進(jìn)行凈化。

實(shí)驗(yàn)分別考察了在上樣、淋洗等步驟目標(biāo)物的保留情況,發(fā)現(xiàn)在上樣階段目標(biāo)物即有10%左右的損失。因此本實(shí)驗(yàn)從上樣開始收集,并用乙腈+二氯甲烷(1+99,體積比)繼續(xù)洗脫兩個(gè)柱體積(6 mL),結(jié)果目標(biāo)物回收率滿足要求,即洗脫完全。

2.2.3 樣品除脂探索 對(duì)于高油脂樣品辣椒油和火鍋底料進(jìn)行乙腈飽和正己烷脫脂步驟,結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)正己烷脫脂步驟后,目標(biāo)物回收率降低10%～20%。原因可能是,作為脂溶性較強(qiáng)的偶氮類染料易溶于正己烷,而導(dǎo)致一定的損失。因此,本實(shí)驗(yàn)不進(jìn)行脫脂步驟。

2.2.4 定容體積 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),隨著定容體積的增大,基質(zhì)效應(yīng)逐漸減小,目標(biāo)物響應(yīng)值在定容體積由5 mL變?yōu)?0 mL時(shí)基本沒有變化,當(dāng)定容體積增大到15 mL時(shí)開始有所降低。這是因?yàn)?增大定容體積,樣品基質(zhì)中雜質(zhì)組分隨之變小,使得基質(zhì)效應(yīng)明顯降低,儀器響應(yīng)提高。另一方面,隨著定容體積增大,樣品中目標(biāo)物測(cè)試濃度降低。

表2 5種非法染料回歸方程、決定系數(shù)、線性范圍、檢出限及定量限Table 2 Linear equation,determination coefficient,linear range,limits of detection and quantitation of five illegal dyes

圖2 三種前處理方式下柑橘紅2號(hào)和蘇丹紅I～Ⅳ的總離子流圖Fig.2 TIC chromatograms of Citrus Red 2 and Sudan I～Ⅳdyes by three pretreatment methods注:A:直接提取;B:氨基柱凈化;C:中性氧化鋁凈化。

因此本方法確定在2～40 ng/mL線性范圍內(nèi)定容體積為10 mL。但是,對(duì)于超出線性范圍的陽性樣品,可以根據(jù)需要增加稀釋倍數(shù)。

2.3 線性范圍、決定系數(shù)及定量限

將1.2.4步驟制備的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液按濃度由低到高依次測(cè)定,以各物質(zhì)定量離子對(duì)的峰面積(Y)對(duì)其質(zhì)量濃度(X)作標(biāo)準(zhǔn)曲線,其線性決定系數(shù)均大于0.998。分別在空白基質(zhì)中加10和5 μg/kg的目標(biāo)物,按1.2.2前處理方法處理后,測(cè)試其信噪比,分別確定定量限和檢出限。以信噪比S/N≥10得到目標(biāo)物的定量限(LOQ),以信噪比S/N≥3得到目標(biāo)物的檢出限(LOD),結(jié)果見表2。

2.4 回收率和精密度

結(jié)果顯示在陰性樣品中添加10、50、100 μg/kg三個(gè)濃度水平的目標(biāo)物,其加標(biāo)回收率在80.7%～114%范圍內(nèi),重復(fù)測(cè)定6次相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于8.6%,如表3所示。所附的色譜圖是選擇基質(zhì)復(fù)雜的辣椒油為代表,其空白樣品及加標(biāo)樣品(10 μg/kg)的質(zhì)量色譜圖見圖3。

2.5 基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià)

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜具有較高的靈敏度,但基于其檢測(cè)原理,存在一定的基質(zhì)效應(yīng),特別是對(duì)于油脂和蛋白含量高的等辣椒油和肉制品等樣品會(huì)存在嚴(yán)重的基質(zhì)效應(yīng)。建立HPLC-MS/MS方法的同時(shí)對(duì)該方法的基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià),同時(shí)采取一定的消除或減弱措施是十分必要的。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在5類性質(zhì)差異較大的基質(zhì)中,柑橘紅2號(hào)及蘇丹紅Ⅰ～Ⅱ的ME值基本在20%以下,基質(zhì)效應(yīng)影響較小;蘇丹紅Ⅲ和Ⅳ在蜜餞和辣椒油中存在一定的基質(zhì)效應(yīng),見圖6。鑒于對(duì)基質(zhì)效應(yīng)的考察,本實(shí)驗(yàn)采用基質(zhì)匹配校正曲線定量(見1.2.5),以減少基質(zhì)干擾對(duì)結(jié)果的影響。

圖4 柑橘紅2號(hào)和蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ在5種食品中HPLC-MS基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià)圖Fig.4 Matrix effects in HPLC-MS analysis of Citrus Red 2 and Sudan I～Ⅳ dyes in five matrics

2.6 實(shí)際樣品測(cè)定

對(duì)50批次市售實(shí)際樣品進(jìn)行測(cè)定,包括臍橙、蜜餞(山楂卷)、辣椒油、火鍋底料(紅油半固體)及香辣肉灌腸等樣品,均未檢出含有5種非法染料。

表3 5種基質(zhì)樣品中5種非法染料添加回收率及精密度(n=6)Table 3 Average recoveries and RSDs of five illegal dyes in five sample matrices(n=6)

圖3 辣椒油空白樣品及加標(biāo)樣品(10 μg/kg)中五種非法染料的MRM色譜圖Fig.3 MRM chromatograms of five illegal dyes in chili oil注:A:空白樣品;B:加標(biāo)樣品(10 μg/kg)。

3 結(jié)論

本研究建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定食品中柑橘紅2號(hào)和蘇丹紅染料的方法。采用乙腈提取,氨基固相萃取富集凈化,高效液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè),建立了同時(shí)檢測(cè)水果、果醬、辣椒制品、火鍋底料及肉制品中柑橘紅2號(hào)和蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ 5種染料的方法。柑橘紅2號(hào)和蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ 5種非法染料在2～40 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,決定系數(shù)(R2)為0.998,回收率在80.7%～114%之間,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD<8.6%。方法檢出限為5.0 μg/kg,定量限為10.0 μg/kg,結(jié)果準(zhǔn)確可靠,簡(jiǎn)單易行、靈敏度高、選擇性好,能夠滿足多種食品中非法染料的食品監(jiān)管需求,適用于食品中痕量水平的非法染料的定性、定量檢測(cè)。