白酒中愛德萬甜及其他甜味劑的檢測方法研究

劉議蔧，唐善虎*，成桂紅，羅 玥，杜 鋼，伍雯雯，肖 琳

（1.西南民族大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川 成都 610000；2.四川省食品藥品檢驗檢測院，四川 成都 610000）

白酒是中國特有的一種蒸餾酒，據(jù)《本草綱目》記載：“燒酒非古法也，自元時創(chuàng)始，其法用濃酒和糟入甑，蒸令氣上，用器承滴露”[1]。白酒的香味成分有醇類、酯類、酸類、醛酮類化合物、縮醛類化合物、芳香族化合物、含氮類化合物和呋喃類化合物等[2]。醇類除乙醇外，最主要的是異戊醇、異丁醇和正丙醇，屬于醇甜和助香劑的主要物質(zhì)來源，對形成酒的風(fēng)味和促使酒體豐滿、濃厚起著重要的作用；酯類是形成酒體香氣濃郁的主要因素，酸類影響白酒的口感和后味，是影響口味的主要因素。白酒以曲類、酒母為糖化發(fā)酵劑，利用淀粉質(zhì)原料，經(jīng)蒸煮、糖化、發(fā)酵、蒸餾、陳釀和勾兌釀制而成[3]。目前白酒市場繁榮，但不法商家試圖添加甜味劑，改善劣質(zhì)白酒的口感[4]。嚴重損害了白酒消費者及生產(chǎn)者的利益，并給白酒監(jiān)管帶來了困難[5]。

愛德萬甜化學(xué)名為N-{N-[3-（3-羥基-4-甲氧基苯基）丙基]-L-a-天冬氨酰}-L-苯丙氨酸-1-甲酯，分子式為C24H30N2O7·H2O，其化學(xué)結(jié)構(gòu)與紐甜相似[6-7]。由香蘭素和阿斯巴甜經(jīng)化學(xué)反應(yīng)制得，是一種20 000倍甜度的超高倍甜味劑。根據(jù)歐盟專家組對艾德萬甜的穩(wěn)定性、降解產(chǎn)物、毒性及暴露風(fēng)險的評估，認為其每日允許攝入量（acceptable daily intake，ADI）為5 mg/（kg·bw·d）[8]。目前，在國外艾德萬甜被廣泛應(yīng)用于食品、飲料和藥品中。2017年10月30日中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會2017年第8號公告規(guī)定，對新增的食品添加劑愛德萬甜作為甜味劑，規(guī)定了其使用的食品范圍和具體用量，其中白酒不得添加[9]。目前，我國尚未制訂愛德萬甜的食品安全檢測國家標準，相關(guān)資料和文獻非常少，這給監(jiān)管及企業(yè)自控工作帶來了不便。目前，國內(nèi)外關(guān)于甜味劑（如安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素和阿斯巴甜等）的研究較多，阿斯巴甜、糖精、安賽蜜、紐甜和三氯蔗糖都是美國食藥局（food and drug administration，F(xiàn)DA）批準的人造甜味劑[10]。分析方法有高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、氣相色譜（gas chromatography，GC）法、離子色譜（ion chromatography，IC）法[11-14]等，關(guān)于愛德萬甜檢測方法的報道非常少。因此，有必要建立白酒中愛德萬甜及其他多種甜味劑的同時測定的檢測方法，以期為快速、準確測定白酒中新型甜味劑和常用甜味劑提供技術(shù)支撐，促進白酒行業(yè)安全健康發(fā)展[1]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

白酒樣品：市售；乙酸銨（分析純）：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；超純水（電導(dǎo)率為18.2 MΩ）：Milli-Q超純水機制備；安賽蜜標準品（質(zhì)量濃度1.00 mg/mL）：北京海岸鴻蒙標準物質(zhì)技術(shù)有限責(zé)任公司；糖精鈉標準品（質(zhì)量濃度1.00 mg/mL）：中國計量科學(xué)研究院；阿斯巴甜標準品（純度97.2%）：Dr.Ehrenstorfer GmbH公司；阿力甜標準品（純度83.5%）：美國Chromadex公司；乙腈（色譜純）、愛德萬甜標準品（純度99.1%）：美國Sigma公司；紐甜標準品（純度95.1%）：上海安譜科學(xué)儀器有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

1260高效液相色譜儀，配二極管陣列檢測器（diodearray detector，DAD）：美國安捷倫公司；Milli-Q超純水機：密理博中國有限公司；XS105電子天平：瑞士Mettler Toledo集團；吉爾森移液器（100～5 000μL）：法國Gilson公司。

1.3 方法

1.3.1 標準溶液的配制

將阿斯巴甜、阿力甜分別配制成1.00 mg/mL的標準儲備液，愛德萬甜、紐甜分別配制成200μg/mL的標準儲備液，4℃避光冷藏。然后配制成質(zhì)量濃度梯度為0.1μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL的標準系列溶液。

1.3.2 樣品前處理方法

精確稱取白酒樣品10g（精確至1mg）于蒸發(fā)皿中，70℃水浴烘干，放至室溫，加2 mL水復(fù)溶，超聲處理，過0.22μm水相濾膜，待測。用純水作空白，依次對標準使用液各濃度梯度、空白、加標回收液、樣液進行測定。

1.3.3 測定條件優(yōu)化

（1）色譜條件：WATERST3色譜柱（4.6 mm×150 mm，5μm）；流動相為20mmol/L的乙酸銨和乙腈，流速1.0mL/min；檢測波長分別為200nm、218nm、230nm、280nm；柱溫30℃；進樣量20μL。梯度洗脫方式見表1[16-18]。

（2）測定條件：根據(jù)色譜條件，分別考察不同的流動相（甲醇、乙腈）、流動相的比例、采集波長、烘干溫度對測定結(jié)果的影響。

表1 梯度洗脫方式Table 1 Modes of gradient elution

2 結(jié)果與分析

2.1 流動相的選擇

按照1.3.3的色譜條件，6種甜味劑混標多通道共同測定高效液相色譜圖見圖1，白酒樣品甜味劑分析高效液相色譜圖見圖2。

圖1 6種甜味劑標品的高效液相色譜多通道共同測定色譜圖Fig.1 Chromatogram of 6 kinds of sweeteners standards simultaneously detected by HPLC with multiple channels

圖2 白酒樣品的高效液相色譜圖Fig.2 HPLC chromatograms of Baijiu samples

由圖1、圖2可知，該方法在22 min內(nèi)可完成6種甜味劑的共同檢測，且6種甜味劑混標和白酒樣品中各組分分離度好，相互無干擾。

2.2 線性回歸分析

標準品線性范圍、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限結(jié)果見表2。

表2 6種標準品線性范圍、回歸方程、檢出限和定量限Table 2 Linear ranges,regression equations,detection limits and quantitation limits of 6 kinds of standards

由表2可知，6種甜味劑標準品線性范圍為0.1～50.0μg/mL，回歸方程相關(guān)系數(shù)R2均＞0.999。表明6種甜味劑均有良好的線性關(guān)系，愛德萬甜、紐甜、安賽蜜、糖精鈉檢出限為0.02 mg/kg，阿斯巴甜、阿力甜檢出限為0.2 mg/kg，均低于國家標準的檢出限。

2.3 精密度實驗

取陰性樣品加標準品，按照1.3.2操作步驟進行處理，上機質(zhì)量濃度為10μg/mL，進行精密度考察（平行實驗6次），結(jié)果見表3。

表3 各組分的精密度結(jié)果Table 3 Results of precision of each component

由表3可知，6種甜味劑相對標準偏差（relativestandarddeviation，RSD）均＜0.5%，精密度符合GB/T 27404—2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測》的技術(shù)要求＜7.5%。

2.4 回收率實驗

選擇加標質(zhì)量濃度2.0μg/mL、10.0μg/mL兩個不同水平對陰性樣品進行加標實驗，考察方法的準確度，結(jié)果見表4。

表4 兩種方法加標回收率結(jié)果Table 4 Results of adding standard recovery of two methods

續(xù)表

由表4可知，方法的加標回收率為98.35%～105.25%，RSD＜0.5%，表明該方法準確度良好。

3 結(jié)論

愛德萬甜作為新型甜味劑，本實驗通過高效液相色譜法多通道采集對新型甜味劑愛德萬甜及其他5種常用甜味劑分別從條件優(yōu)化到方法學(xué)驗證比較，結(jié)果表明，各項指標均能滿足實驗室要求。線性范圍為0.1～50.0μg/mL，線性相關(guān)系數(shù)R2均＞0.999。愛德萬甜、紐甜、安賽蜜、糖精鈉檢出限均為0.02 mg/kg，阿斯巴甜、阿力甜檢出限均為0.2 mg/kg，加標回收率為98.35%～105.25%，相對標準偏差＜0.5%。前處理過程簡單，損失少，干擾小，簡單快速，精密度高，靈敏度高。