重樓水提取液對大鼠離體胃腸運動的影響及雙向調節(jié)作用觀察

黃彥峰，韋家河，農生斌

(右江民族醫(yī)學院，廣西百色53000)

中藥的多成分性已成為共識，而且在同一味中藥中可以含有作用相反的兩種成分，因此某些中藥對胃腸運動功能的調節(jié)表現(xiàn)出既可興奮低下的胃腸運動，又可抑制過亢的胃腸運動[1]。重樓為百合科植物云南重樓或七葉一枝花的干燥根莖[2]，在我國主要分布于云南、四川、廣西等地區(qū)[3]，藥理作用主要有抗腫瘤、抗菌、抗心肌缺血、抗氧化、免疫調節(jié)、止血、驅蟲、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、止咳、平喘等[4，5]。其主要化學成分為甾體皂苷類、黃酮類、三萜類、脂肪酸、多糖、糅質、氨基酸類化學成分以及多種微量元素(如Ca)等，其中甾體皂苷為主要活性成分，可分為螺甾烷醇型、異螺甾烷醇型、呋甾烷醇型和變形螺甾烷醇型[6～10]。本課題組在前期實驗研究發(fā)現(xiàn)，重樓水提和醇提兩種提取液均可抑制在體小鼠胃的運動，而對小鼠小腸的運動則因劑量不同產生不同的效應[11]。2016年5月～2018年6月，我們觀察了重樓水提液對不同機能狀態(tài)(正常、抑制及亢進)大鼠離體胃腸運動的影響，并探討重樓的雙向調節(jié)作用。

1 材料與方法

1.1 主要材料 重樓(廣西省百色市市售藥材，產地為云南，批號：150701)；氯化乙酰膽堿(國藥集團化學試劑有限公司，批號：92720018)；硫酸阿托品注射液(河南潤弘制藥股份有限公司，批號：1606221)。SD大鼠90只，體質量180～220 g，雌雄各半，由右江民族醫(yī)學院實驗動物中心提供，合格證號:SCXK桂2012-0003。BL-420F生物機能實驗系統(tǒng)、HW-400E恒溫平滑肌槽(成都泰盟科技有限公司)，JH-2型肌張力換能器(北京航天醫(yī)學工程研究所)。

1.2 實驗方法

1.2.1 重樓水提液的制備[11]稱取重樓飲片50 g，常溫浸泡18 h；加入10倍量水(500 mL)在加熱回流的條件下提取2 h，過濾留下濾液；取濾渣再加水400 mL提取2 h，合并兩次濾液過濾，隔水蒸發(fā)濃縮，定容為50 mL；冰箱冷藏，用時恢復至室溫，并將藥液pH調至7。

1.2.2 大鼠離體胃、腸平滑肌的制備 取30只大鼠，頸椎脫臼處死后剖腹,立即取出胃和十二指腸，放入盛有室溫臺氏液的培養(yǎng)皿中；培養(yǎng)皿中持續(xù)供應95% O2和5% CO2的混合氣體，去除相連的腸系膜，并用注射器連接圓鈍的針頭小心沖洗腸腔內容物；分別取胃體和十二指腸縱行肌條，每條肌條長約2 cm。

1.2.3 重樓水提液對大鼠正常離體胃腸平滑肌收縮活動的影響觀察 分別取胃和小腸平滑肌肌條各30段，隨機分為3組。取一段肌條安放在38 ℃臺氏液的恒溫平滑肌槽內，一端固定在玻璃通氣鉤上，另一端固定于張力換能器上與生物機能實驗系統(tǒng)相連。維持浴槽內臺氏液溫度(38.0±0.5)℃,并持續(xù)均速通入空氣(約60個/min氣泡)，調節(jié)肌條收縮的前負荷為1.5 g，平衡30 min后記錄正常胃腸平滑肌活動曲線。低、高劑量組用微量移液器向平滑肌槽中加入終濃度分別為4×10-6、6×10-6g/L重樓水提液，正常對照組給等量臺氏液，記錄給藥前后2 min胃腸運動曲線。每一次藥液實驗記錄結束后，用臺氏液沖洗3次，待胃腸管恢復后再進行下一項實驗。每個劑量分別進行10次，計算給藥前后大鼠胃腸平滑肌收縮幅度和收縮頻率。

1.2.4 重樓水提液對阿托品作用后大鼠離體胃腸平滑肌收縮活動的影響觀察 分別取胃和小腸平滑肌肌條各60段，隨機分為6組。前期處理同1.2.3，低、高劑量組分別加入終濃度為4×10-6、6×10-6g/L重樓水提液，阿托品組、阿托品+低劑量組、阿托品+高劑量組均先加入阿托品(2×10-1g/L)，阿托品+低劑量組、阿托品+高劑量組再分別加入終濃度為4×10-6、6×10-6g/L重樓水提液，正常對照組加入等量的臺氏液。記錄加入各組藥液后2 min離體胃腸平滑肌收縮縮幅度和收縮頻率，方法同1.2.3。

1.2.5 重樓水提液對乙酰膽堿作用后大鼠離體胃腸平滑肌收縮活動的影響觀察 分別取胃和小腸平滑肌肌條各60段，前期處理同1.2.3，分組方法、實驗操作及記錄方法同1.2.4，僅操作中將阿托品更換為乙酰膽堿(4×10-6g/L)。

2 結果

2.1 重樓水提液對大鼠離體胃、腸平滑肌收縮活動的影響 與給藥前比較，高、低劑量組大鼠離體胃平滑肌收縮幅度減小、收縮頻率減慢(P均<0.01)，小腸平滑肌收縮幅度增大(P<0.05或<0.01)；低劑量組大鼠離體小腸平滑肌收縮頻率減慢(P均<0.01)，但高劑量組收縮頻率無明顯變化(P均>0.05)。見表1。

2.2 重樓水提液對阿托品誘導的離體胃腸平滑肌收縮活動的影響 與正常對照組比較，其余各組大鼠離體胃平滑肌收縮幅度減小、收縮頻率減慢(P均<0.01)；與阿托品組比較，高劑量組、低劑量組、阿托品+低劑量組胃平滑肌收縮幅度增大、頻率加快(P<0.05或<0.01)。與正常對照組比較，高劑量組小腸平滑肌收縮幅度增大(P﹤0.05)，阿托品組收縮幅度減小、頻率減慢(P均﹤0.01)，阿托品+

表1 重樓水提液對大鼠離體胃腸平滑肌收縮活動的影響

注：與同組給藥前比較，aP<0.05，bP<0.01。低劑量組、阿托品+高劑量組收縮幅度減慢(P均﹤0.01)，阿托品+低劑量組收縮頻率減慢(P﹤0.05)；與阿托品組比較，高劑量組、低劑量組、阿托品+低劑量組、阿托品+高劑量組小腸平滑肌收縮幅度增大、頻率加快(P<0.05或<0.01)。見表2。

表2 重樓水提液對阿托品誘導的離體胃腸平滑肌收縮活動的影響

注：與正常對照組比較，aP<0.05，bP<0.01；與阿托品組比較，cP<0.05，dP<0.01。

2.3 重樓水提液對乙酰膽堿誘導的離體胃腸平滑肌收縮活動的影響 與正常對照組比較，高、低劑量組胃平滑肌收縮幅度減小、收縮頻率減慢(P均﹤0.01)，乙酰膽堿組、乙酰膽堿+低劑量組、乙酰膽堿+高劑量組胃平滑肌收縮幅度增大、收縮頻率減慢(P<0.05或<0.01)；與乙酰膽堿組比較，高劑量組、低劑量組、乙酰膽堿+低劑量組、乙酰膽堿+高劑量組胃平滑肌收縮幅度減小(P均﹤0.01)。與正常對照組比較，高劑量組小腸平滑肌收縮幅度增大(P﹤0.05)，乙酰膽堿組收縮幅度增大且收縮頻率減慢(P均﹤0.05)，乙酰膽堿+低劑量組、乙酰膽堿+高劑量組收縮幅度減小(P均﹤0.01)；與乙酰膽堿組比較，乙酰膽堿+低劑量組、乙酰膽堿+高劑量組小腸平滑肌收縮幅度減小且收縮頻率加快(P<0.05或<0.01)。見表3。

3 討論

胃腸平滑肌痙攣所致腹痛、腹瀉等是臨床常見的疾病[12]，西醫(yī)臨床治療常以抗膽堿能藥解除胃痙攣，不良反應比較大，所以應用中藥治療逐漸被人們重視。

表3 重樓水提液對乙酰膽堿誘導的離體胃腸平滑肌收縮活動的影響

注：與正常對照組比較，aP<0.05，bP<0.01；與乙酰膽堿組比較，cP<0.05，dP<0.01。

食物的研磨、排空、消化及吸收均需要胃腸運動來完成，胃腸運動過快或太慢都不利于營養(yǎng)物質的消化和吸收。重樓水提液能使大鼠離體胃平滑肌收縮幅度減小，收縮頻率減慢；由此推斷，重樓水提液能抑制胃痙攣，緩解胃疼痛，對治療胃痙攣有一定療效，其解痙機制可能與重樓主要化學成分甾體皂苷中的呋甾烷苷元結構有關[13]。重樓水提液能使大鼠離體小腸平滑肌收縮幅度增大，提示重樓水提液能增強小腸運動，對治療便秘、非潰瘍性消化不良等疾病有一定療效；其機制可能與甾體皂苷抑制磷酸二酯酶達到抑制血管擴張有關[13]，是否與其微量元素中Ca的含量有關，尚待進一步研究。

中藥雙向調節(jié)作用，是指同一中藥及其組成的方劑，在機體不同狀態(tài)下以不同的方式應用，可以發(fā)揮出趨向相反的作用[14]。阿托品為膽堿能M受體阻斷劑，與M受體結合后競爭性拮抗乙酰膽堿的激動作用[15]。乙酰膽堿是平滑肌內興奮傳遞的化學物質能,激動M膽堿受體使胞內第二信使三磷酸肌醇和二?；视蜐舛壬仙?進而引起Ca2+釋放和底物蛋白磷酸化激發(fā)平滑肌產生收縮效應[16]。本研究觀察到使用M受體阻斷劑阿托品干預后，重樓水提液能使大鼠離體胃腸平滑肌收縮幅度增大，收縮頻率加快；使用M受體激動劑乙酰膽堿干預后，重樓水提液能使大鼠離體胃腸平滑肌收縮縮幅度減弱；上述結果提示，重樓水提液在機體不同狀態(tài)下發(fā)揮出趨向相反的作用，即中藥雙向調節(jié)作用。劉星等[17]研究發(fā)現(xiàn)，重樓皂苷能激活細胞內多種信號傳遞途徑增加細胞內Ca2+濃度，調節(jié)子宮平滑肌的節(jié)律性收縮。蘇佳等[18]研究發(fā)現(xiàn)，重樓總皂苷對大鼠子宮平滑肌收縮活動的調節(jié)與PLA2/AA信號途徑的激活有關。由此推斷，使用阿托品干預后,重樓皂苷通過激活細胞內多種信號傳遞途徑增加細胞內Ca2+濃度，來增強大鼠離體胃腸平滑肌收縮幅度和頻率。Corea等[19]研究發(fā)現(xiàn)，呋甾烷皂苷可以顯著抑制乙酰膽堿和組胺誘導的豚鼠離體回腸的強烈痙攣。由此推斷，使用乙酰膽堿干預后,呋甾烷皂苷通過直接抑制乙酰膽堿來減弱大鼠離體胃腸平滑肌收縮幅度。

綜上所述，重樓水提液對阿托品、乙酰膽堿誘導的離體胃腸運動具有雙向調節(jié)作用。如今，中藥的雙向調節(jié)作用已廣泛應用于臨床實踐。在臨床應用此類中藥時，應根據機體當時的生理、生化狀態(tài)，采用不同的煎煮、炮制或者使用藥物的不同有效成分，最恰當地發(fā)揮藥物療效。運用好中藥的雙向調節(jié)作用理論，對中藥在臨床的辨證用藥有很大的指導意義，有助于推動中醫(yī)臨床醫(yī)學的發(fā)展。