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    NT-proBNP 檢測假陽性1例報道

    2018-11-29 08:06:48金文青顧嫣婷
    檢驗醫(yī)學(xué) 2018年11期
    關(guān)鍵詞:復(fù)合物抗體陽性

    金文青,顧嫣婷

    (上海市虹口區(qū)四川北路街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心檢驗科,上海 200080)

    慢性心力衰竭的診斷主要依據(jù)病史、臨床表現(xiàn)、超聲心動圖、胸片等指標(biāo)的綜合評價結(jié)果[1]。但許多心力衰竭患者癥狀和體征可能表現(xiàn)不特異,因此目前常用的診斷和監(jiān)測心力衰竭的指標(biāo)主要有血清氨基末端B型鈉尿肽原(amino-terminal pro-B-type natriuretic peptide,NT-proBNP)和B型鈉尿肽(B-type natriuretic peptide,BNP)。我國相關(guān)指南推薦將NT-proBNP和BNP用于慢性心力衰竭的診斷和鑒別診斷,NT-proBNP<300 pg/mL或BNP<100 pg/mL可排除心力衰竭[2]。我們在采用雙向側(cè)流免疫法測定NT-proBNP時發(fā)現(xiàn)1例可能因患者自身抗體引起NT-proBNP假陽性的病例。

    1 病例資料

    1.1 病例

    患者:男,80歲。2017年5月8日摔倒致右髖部疼痛,急送復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院治療,X線檢查顯示右側(cè)股骨粗隆間骨折,經(jīng)排除手術(shù)禁忌后,于5月22日全麻下行內(nèi)固定術(shù),術(shù)中無輸血。術(shù)后給予頭孢拉定抗感染。術(shù)后收入上海市虹口區(qū)四川北路街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心進(jìn)行康復(fù)治療。既往病史:有2型糖尿病史,病程7年余,給予門冬胰島素降糖,血糖控制不佳。既往史:20年前有甲狀腺功能亢進(jìn)癥病史,于上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院治療,具體不詳;否認(rèn)冠心病、高血壓病、慢性支氣管炎等病史。無胸悶痛、心悸、氣急、少尿、水腫。傳染病史:70余年前有血吸蟲病史,具體治療不詳,否認(rèn)肝炎、結(jié)核、傷寒等傳染病史。手術(shù)外傷史:10年前因摔倒致頸椎骨折,于復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院行內(nèi)固定術(shù);否認(rèn)其他手術(shù)外傷史?;颊哂?017年5月19日NT-proBNP首次檢測結(jié)果無效,將樣本1∶1稀釋后重新檢測,NT-proBNP>15 000 pg/mL,達(dá)到危急值,遂報告臨床,但臨床反饋該患者未有任何心力衰竭的臨床表現(xiàn)。

    1.2 相關(guān)實驗室指標(biāo)檢測結(jié)果

    患者肝、腎功能指標(biāo)均正常,血糖為7.89 mmoL/L,糖化血紅蛋白為8.5%,糖類抗原(carbohydrate antigen,CA)19-9為8.2 U/mL,癌胚抗原為3.8 ng/mL,CA15-3為13.8 U/mL,CA125為6.1 U/mL,總前列腺特異抗原為2.1 ng/mL,游離前列腺特異抗原為0.386 ng/mL,CA72-4為1.10 U/mL,細(xì)胞角蛋白19片段為2.17 ng/mL, 神經(jīng)元特異性烯醇化酶為3.3 ng/mL,鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原為1.51 ng/mL,CA242為3.15 U/mL,抗雙鏈DNA抗體<100 IU/mL,類風(fēng)濕因子為36 IU/mL,抗鏈球菌溶血素O為197 IU/mL ,抗谷氨酸脫羧酶抗體陰性,胰島素抗體陰性,抗胰島素抗體陰性,血吸蟲抗體陰性,抗核抗體(顆粒型)陽性,肌酸激酶-MB同工酶質(zhì)量為2.03 ng/mL,血清肌紅蛋白為35 ng/mL,血清高敏肌鈣蛋白T為11.6 pg/mL。

    1.3 心電圖及超聲檢查

    心電圖:竇性心律,完全性右束支傳導(dǎo)阻滯。B超:左側(cè)頸外動脈斑塊形成,甲狀腺未見明顯異常,頸部未見腫大淋巴結(jié);血吸蟲肝病聲像圖,膽、胰、脾、雙腎未見明顯異常,胸腔腹腔未見積液。心臟超聲:左室收縮舒張功能均正常,主動脈瓣輕度反流。

    1.4 NT-proBNP檢測方法

    采用瑞萊多功能免疫檢測儀[瑞萊生物工程(深圳)有限公司]及配套試劑(雙向側(cè)流免疫法)和cobas h232鈉尿肽原檢測卡(膠體金法,瑞士羅氏公司)檢測NT-proBNP。

    2 NT-proBNP檢測結(jié)果及假陽性原因查找

    2.1 NT-proBNP檢測結(jié)果

    雙向側(cè)流免疫法直接檢測樣本顯示檢測結(jié)果無效,儀器提示:C1內(nèi)控帶吸光度值太小,質(zhì)控失控,請查明原因重新檢測。根據(jù)檢測原理推測可能是異嗜性自身抗體競爭結(jié)合化學(xué)偶合墊上的抗NT-proBNP抗體偶合物導(dǎo)致C1內(nèi)控帶吸光度值太小。由此將樣本1∶1稀釋后重新檢測,結(jié)果為>15 000 pg/mL。隨后采用膠體金法檢測,同樣顯示質(zhì)控帶吸光度小,未能檢測出結(jié)果。而后將樣本送至上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬同仁醫(yī)院檢驗科,采用ADVIA Centaur XP 全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(德國西門子公司)及配套試劑(化學(xué)發(fā)光法)檢測BNP,結(jié)果為BNP<5 pg/mL。因此,根據(jù)該患者的BNP檢測結(jié)果可排除心力衰竭,且與臨床癥狀與體征相符。由此考慮本實驗室檢測系統(tǒng)結(jié)果為假陽性,需考慮存在干擾物質(zhì)。

    2.2 回收試驗

    采用回收試驗驗證是否存在干擾物質(zhì)。因為原倍檢測為無效結(jié)果,將樣本稀釋后檢測,根據(jù)最小稀釋倍數(shù)推出期望值,結(jié)果顯示實測值與期望值的偏移明顯,說明該患者血清中存在干擾物質(zhì)。見表1。

    表1 NT-proBNP回收實驗

    2.3 復(fù)檢

    7月11日患者樣本送檢,復(fù)檢NT-proBNP,檢測結(jié)果與之前相同,顯示檢測無效,將樣本送至上海市第十人民醫(yī)院檢驗科,采用cobas e601全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(瑞士羅氏公司)及配套試劑(電化學(xué)發(fā)光法)檢測NT-proBNP,結(jié)果為72.48 pmol/L,該儀器當(dāng)天質(zhì)控為在控。

    3 隨訪

    該患者于2017年7月14日出院,出院時神清、氣平,心率70次/min,律齊。2017年8月29日隨訪,患者主述未有任何不適,當(dāng)天采集患者靜脈血,同時做心臟超聲檢查。心臟超聲提示左室收縮舒張功能均正常,主動脈瓣輕度反流。本實驗室NT-proBNP檢測結(jié)果仍然為無效。將樣本送至上海蘭衛(wèi)醫(yī)學(xué)檢驗所,采用cobas e601全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(瑞士羅氏公司)及配套試劑(電化學(xué)發(fā)光法)檢測NT-proBNP。結(jié)果為46.16 pg/mL,儀器當(dāng)天質(zhì)控為在控。

    4 討論

    NT-proBNP升高主要見于急慢性心力衰竭、冠心病、慢性腎病。NT-proBNP是慢性心力衰竭最強(qiáng)的獨立預(yù)后因素之一,適用于不同嚴(yán)重程度的心力衰竭。如果檢驗結(jié)果發(fā)生假陽性會引起臨床醫(yī)生的錯誤判斷,因此檢測時更應(yīng)小心謹(jǐn)慎。

    本實驗室使用的瑞萊多功能免疫檢測儀的檢測原理為雙向側(cè)流免疫法,通過雙抗體夾心法制備而成。檢測時樣本中的NT-proBNP首先與化學(xué)偶合墊上的抗NT-proBNP抗體偶合物發(fā)生免疫反應(yīng),形成免疫復(fù)合物。免疫復(fù)合物隨著樣本在硝基纖維素膜上層析流動,當(dāng)免疫復(fù)合物移動至硝基纖維素膜上的檢測區(qū)(NT-proBNP測試帶)時,與預(yù)先包被在硝基纖維素膜上的抗NT-proBNP抗體發(fā)生反應(yīng),從而被固定在檢測區(qū)。血液中的NT-proBNP越多,測試帶上的復(fù)合物越多,條帶上的吸光度值就越高。另外,本研究還采用cobas h232鈉尿肽原檢測卡(膠體金法)檢測NT-proBNP。該檢測方法是對NT-proBNP分子表位進(jìn)行單克隆抗體和多克隆抗體的檢測。在血液樣本中,抗體與NT-proBNP一起形成夾心復(fù)合物,將紅細(xì)胞從樣本中去除后,血漿流過金標(biāo)記NT-proBNP夾心復(fù)合物聚集的檢測區(qū),出現(xiàn)紅色線即表示陽性。

    由于這2種檢測方法均是由2個單克隆抗體組成復(fù)合體或是由單克隆抗體或多克隆抗體組成復(fù)合體的夾心免疫分析法。由于檢測方法的局限性,當(dāng)人體內(nèi)存在人抗大鼠抗體(human anti-mouse antibody,HAMA)或異嗜性自身抗體時,除了正常的抗原抗體復(fù)合物之外,還會形成HAMA介導(dǎo)的固相抗體/標(biāo)記抗體復(fù)合物,使檢測結(jié)果變?yōu)楦咧?,引起假陽性結(jié)果。雖然這類檢測方法已經(jīng)通過特殊方法盡量減少這些抗體對檢測結(jié)果的影響,但在已知患者含有這些抗體時仍需小心檢測[3]。本研究根據(jù)試劑說明書的要求,排除高濃度甘油三酯、膽紅素及由溶血所致的高濃度血紅蛋白導(dǎo)致的錯誤檢測結(jié)果。回收試驗結(jié)果顯示該患者可能存在影響結(jié)果的抗體。檢測發(fā)現(xiàn)該患者抗核抗體為陽性??购丝贵w屬于異嗜性自身抗體的一種。有研究結(jié)果顯示,酶標(biāo)記抗人IgG可與非特異性吸附的IgG或類風(fēng)濕因子、抗核抗體等自身抗體結(jié)合,導(dǎo)致假陽性的產(chǎn)生[4]。故推測該患者自身抗體可能是引起NT-proBNP假陽性的原因[5]。

    綜上所述,采用雙向側(cè)流免疫法或膠體金法檢測NT-proBNP時顯示結(jié)果無效,提示血清中可能存在異嗜性抗體時需注意:(1)了解患者是否已接受大鼠源性單抗免疫藥物治療;(2)檢查樣本是否有高濃度甘油三酯和嚴(yán)重黃疸;(3)稀釋后檢測,了解有無干擾性抗體;(4)采用不同的檢測系統(tǒng)檢測同一樣本,以得到可靠的結(jié)果;(5)保存樣本,以備復(fù)查;(6)告知臨床醫(yī)生可能引起NT-proBNP假陽性的干擾因素。

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