張家界地區(qū)土家族人群Citrin蛋白缺陷所致新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥的基因分析及生化指標(biāo)特點(diǎn)

張偉　田昌軍　汪宏波

[摘要]目的 探討張家界地區(qū)土家族人群中Citrin蛋白缺陷所致新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥（NICCD）的SLC25A13基因突變類型及生化特點(diǎn)。方法 選取2014年9月～2016年12月張家界市人民醫(yī)院兒科收治的特發(fā)性膽汁淤積癥（INC）患兒進(jìn)行SLC25A13基因突變分析；確診NICCD為觀察組，隨機(jī)選取除外NICCD的膽汁淤積癥患兒為對(duì)照組，比較兩組生化指標(biāo)的差異。結(jié)果 85例患兒行SLC25A13基因突變分析，確診NICCD者7例，檢出SLC25A13基因突變3種，分別為1851del4、IVS6+5G>A、1638ins23突變，其中1851del4突變占全部突變數(shù)量的57.10%。觀察組膽汁酸（TBA）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、凝血酶原時(shí)間（PT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）/丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）水平高于對(duì)照組，ALT、AST、清蛋白（Alb）、血糖（BS）水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 SLC25A13基因突變所致NICCD是張家界地區(qū)土家族人群特發(fā)性膽汁淤積癥的重要病因之一，以1851del4突變型最常見(jiàn)；NICCD患兒生化指標(biāo)改變有助于早期識(shí)別疾病。

[關(guān)鍵詞] 張家界地區(qū)；土家族；新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥；SLC25A13基因突變

[中圖分類號(hào)] R722.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2018）8（a）-0045-03

[Abstract] Objective To investigate the mutation and biochemical characteristics of SLC25A13 gene in neonatal intrahepatic cholestasis caused by Citrin protein deficiency （NICCD） in Tujia minority in Zhangjiajie Area. Methods SLC25A13 gene mutation analysis was performed in children with idiopathic neonatal cholestasis （INC） admitted to the Department of Pediatrics in our Hospital from September 2014 to December 2016. The patients diagnosed with NICCD were classified into observation group. Pediatric patients randomly selected except for NICCD were assigned to control group. The differences in biochemical indicators between the two groups were compared. Results Among 85 pediatric patients performed with SLC25A13 gene mutation analysis， 7 cases were diagnosed as NICCD. The SLC25A13 gene mutated for three mutations including 1851del4， IVS6+5G>A， and 1638ins23， of which the 1851del4 mutation accounted for 57.10% of the total mutations. The comparison of biochemical indicators showed that the total bile acid， gamma-glutamyl transpeptidase， prothrombin time， and aspartate aminotransferase/alanine aminotransferase （AST/ALT） were higher in the observation group than in the control group， and the levels of ALT， AST， serum albumin， and BS were lower in the observation group than in the control group （P<0.05）. Conclusion NICCD due to SLC25A13 gene mutation is one of the main causes for INC in Tujia minority in Zhangjiajie Area. The 1851del4 mutant is the most common type. Changes in biochemical markers in NICCD children are helpful for early identification of the disease.

[Key words] Zhangjiajie Area； Tujia minority； NICCD； SLC25A13 gene mutation

Citrin是由位于染色體7q21.3的基因SLC25A13編碼而成的蛋白質(zhì)，在合成尿素、蛋白質(zhì)、核苷酸糖的過(guò)程中具有相當(dāng)?shù)纳砉δ堋itrin缺陷病是SLC25A13基因突變所致常染色體隱性遺傳性疾病，其表型之一是Citrin蛋白缺陷所致新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥（neonatal intrahepatic cholestasis caused by citrin deficiency，NICCD），臨床表現(xiàn)主要為黃疸消退延遲、膽汁淤積、肝功能異常、高氨基酸血癥等[1]。近年來(lái)國(guó)內(nèi)多地均有相關(guān)病例報(bào)道，是我國(guó)兒童特發(fā)性膽汁淤積癥最重要的病因之一[2-4]。目前研究報(bào)道SLC25A13基因攜帶者在不同地域及人種間有顯著差異，兩廣、香港、湖南發(fā)病明顯高于其他省份[5]。為探討張家界地區(qū)土家族人群NICCD患兒的SLC25A13基因突變類型，本研究對(duì)85例特發(fā)性膽汁淤積癥患兒進(jìn)行SLC25A13基因突變分析，其中確診NICCD者7例，現(xiàn)將研究?jī)?nèi)容報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2014年9月～2016年12月我院新生兒科收治的特發(fā)性膽汁淤積癥（idiopathic neonatal choholestasis，INC）85例，經(jīng)SLC25A13基因突變分析確診NICCD7例為觀察組，隨機(jī)選擇同期未檢出明確病因的INC患兒14例為對(duì)照組。INC定義為：1歲以內(nèi)起病，總膽紅素超過(guò)85 mmol/L，直接膽紅素比例>20%或總膽紅素<85 mmol/L時(shí)直接膽紅素>17 mmol/L，病因不明。膽汁淤積癥的病因檢測(cè)包括：病毒抗體檢測(cè)（HBV抗體、HCV抗體、TORCH病毒抗體、梅毒螺旋體抗體），感染（血常規(guī)、hs-CRP、血培養(yǎng)），肝膽超聲，血串聯(lián)質(zhì)譜及尿有機(jī)酸分析。確診NICCD者7例，男占比42.9%；出生體重2.35～3.91 kg，平均（2.91±0.41） kg；黃疸起病年齡4～45 d，平均（11.43±6.50） d；初診時(shí)年齡4～94 d，平均（23.57±21.64） d；純母乳喂養(yǎng)2例（28.6%）。對(duì)照組14例，男42.9%；平均出生體重（3.07±0.34） kg；黃疸起病平均年齡（12.86±7.80） d；初診時(shí)平均年齡（22.93±20.61） d；純母乳喂養(yǎng)比例35.7%。兩組患兒性別、年齡、出生體重、起病年齡等比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 DNA提取及SLC25A13基因診斷

抽取靜脈抗凝血2 ml送金域公司，對(duì)SLC25A13基因外顯子進(jìn)行擴(kuò)增，精制純化后測(cè)序。測(cè)序結(jié)果與Genbank中SLC25A13基因（NG_000007.13）標(biāo)準(zhǔn)序列比對(duì)?；蚍治?條等位基因均檢測(cè)出致病性SLC25A13突變的確診為NICCD；僅有1條等位基因致病性突變或不能明確的突變被認(rèn)為是疑診NICCD；沒(méi)有致病性突變或不能檢測(cè)出突變的為非NICCD。

1.3生化指標(biāo)

患兒于清晨進(jìn)食前抽取靜脈血，采用Hitachi7600全自動(dòng)生化分析儀，檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、膽汁酸（TBA）、清蛋白（Alb）、血糖（BS）、凝血酶原時(shí)間（PT）、總膽紅素（TBil）、直接膽紅素（DBil）。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 SLC25A13基因突變分析

85例INC患兒經(jīng)SLC25A13基因突變分析確診NICCD 7例，疑似NICCD 1例。檢測(cè)出基因突變型3種：1851del4、IVS6+5G>A、1638ins23突變，分別為Ⅰ/Ⅰ3例，Ⅰ/Ⅹ1例，Ⅰ/Ⅲ1例，Ⅲ/Ⅹ2例；疑似NICCD者SLC25A13基因突變類型為Ⅰ/-，結(jié)果顯示1851del4是最常見(jiàn)的突變類型（表1）。

2.2兩組生化指標(biāo)的比較

觀察組TBA、GGT、PT、AST/ALT高于對(duì)照組，AST、ALT、Alb、BS低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；觀察組TBil、DBil低于對(duì)照組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表2）。

3討論

Citrin缺乏癥最初由日本學(xué)者報(bào)道，隨后在亞洲多國(guó)及歐美均有報(bào)道[4，6-7]，該疾病具有種族及地域差異，以亞洲多發(fā)[8]。報(bào)道顯示我國(guó)長(zhǎng)江以北SLC25A13基因攜帶者約為1/940，長(zhǎng)江以南為1/48[9-10]。張家界地區(qū)地處長(zhǎng)江以南，屬NICCD高發(fā)地區(qū)，本研究85例INC檢出NICCD患兒7例，發(fā)病率高達(dá)8.23%，與兩廣地區(qū)報(bào)道數(shù)據(jù)相近[3，8]。

基因庫(kù)資料顯示SLC25A13基因突序列變異80余種。日本報(bào)道最常見(jiàn)的突變型是IVS11+1G>A（39%）[11-12]。國(guó)內(nèi)報(bào)道均顯示1851del4為最常見(jiàn)的突變型，其次以c.1638ins23、c.IVS6+5G>A和IVS16ins3kb三種較為常見(jiàn)[3，13-14]。國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)均為漢族人群資料，尚無(wú)任何少數(shù)民族人群NICCD患兒的基因突變型的報(bào)道，本研究顯示張家界地區(qū)土家族人群中罹患NICCD者，其基因突變類型亦以1851del4最常見(jiàn)，其次尚見(jiàn)IVS16ins3kb、IVS6+5G>A突變。

基因檢測(cè)成本較大，難以對(duì)有疑診患兒采用SLC25A13基因突變分析。因此對(duì)比NICCD患兒與INC患兒的生化指標(biāo)差異，對(duì)早期識(shí)別NICCD具有參考意義。Citrin蛋白的主要功能是將線粒體內(nèi)的天冬氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，參與尿素循環(huán)，為合成核苷酸及蛋白質(zhì)提供材料，同時(shí)將胞質(zhì)內(nèi)的谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)至線粒體，參與調(diào)節(jié)還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）比例，維持胞質(zhì)中氧化/還原狀態(tài)的穩(wěn)定性[5，9]。當(dāng)Citrin蛋白缺乏時(shí)，尿素循環(huán)通路受阻，合成蛋白質(zhì)及核苷酸過(guò)程受抑制，而致低蛋白血癥、瓜氨酸大量蓄積及高氨血癥，同時(shí)因蘋果酸穿梭受累，胞漿中NADH被重新氧化為NAD+，而導(dǎo)致脂肪酸和脂肪合成增加，同時(shí)抑制糖酵解及糖異生過(guò)程，致ATP合成不足而出現(xiàn)低血糖癥及高乳酸血癥[13]。本研究結(jié)果與之前類似報(bào)道相符[15-17]。

本研究結(jié)果顯示，SLC25A13基因突變所致Citrin蛋白缺陷是張家界地區(qū)土家族人群INC的重要原因之一，SLC25A13基因的突變熱點(diǎn)與國(guó)內(nèi)報(bào)道一致，以1851del4型最為常見(jiàn)。NICCD患兒生化指標(biāo)的特點(diǎn)有助于早期識(shí)別疾病。

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（收稿日期：2018-03-14 本文編輯：崔建中）