P63、P16和ki67在宮頸癌及上皮內(nèi)病變中的表達(dá)及意義

施絨賢 陳 峰

（上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院崇明分院病理科，上海 202150）

宮頸癌是發(fā)生于子宮頸的惡性腫瘤[1]，是婦科最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率有年輕化的趨勢(shì)，世界衛(wèi)生組織（WHO）把其致病原因歸因于高危型HPV人類乳頭狀病毒感染[2]，根據(jù)其組織學(xué)來源大部分為鱗狀細(xì)胞癌，少部分為宮頸腺癌（15%～20%），另有極少數(shù)的腺鱗癌（3%～5%），其發(fā)展過程為上皮內(nèi)病變低級(jí)別-高級(jí)別-鱗狀細(xì)胞癌，對(duì)其精確診斷尤其是對(duì)上皮內(nèi)病變低級(jí)別的診斷，在有效的防止由上皮內(nèi)瘤變向?qū)m頸癌的發(fā)展具有重要的實(shí)際意義，本研究旨在探討其在宮頸癌癌前病變至癌變中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2017年12月本院婦科門診及病房活檢標(biāo)本、leep刀標(biāo)本及宮頸（含全子宮或附件）切除標(biāo)本共161例，其中22例鱗狀細(xì)胞癌，3例宮頸腺癌，上皮內(nèi)病變低級(jí)別104例，上皮內(nèi)病變高級(jí)別32例，另選取超過40例確定無上述病變（包括正常宮頸，急慢性宮頸炎，宮頸萎縮等）的宮頸活檢組織作為對(duì)照實(shí)驗(yàn)，年齡22～72歲，平均年齡42歲。

1.2 方法

所有組織用10%中性福爾馬林固定，采用LEICA ASP300S標(biāo)準(zhǔn)化脫水機(jī)脫水，LEICA組織包埋機(jī)制成蠟塊，使用LEICA 2035石蠟切片機(jī)切成4微米厚度，涂膠片使用江蘇世泰公司的商品化載玻片，P63、P16和ki67抗體采用即用型一抗，由上海長島生物制品公司提供，免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)方法采用全自動(dòng)染色方法，設(shè)備為LEICA BOND-MAX全自動(dòng)免疫組織化學(xué)機(jī)，DAB顯色劑等為LEICA BOND-MAX套裝試劑。

1.3 結(jié)果判斷

以HE染色病變部位及性質(zhì)對(duì)照，病變部位棕黃色染色為判斷陽性依據(jù)，其中P63及KI67為細(xì)胞核染色，P16為胞漿及胞核表達(dá)，染色深度及百分比綜合判斷確定陰性（-），弱陽性（+），陽性（++），強(qiáng)陽性（+++），ki67及 P63的判斷標(biāo)準(zhǔn)為僅位于基底/副基底層并且細(xì)胞陽性數(shù)小于5%為（-），陽性細(xì)胞數(shù)5%～25%為（+），陽性細(xì)胞數(shù)25%～50%為（++），陽性細(xì)胞數(shù)大于50%為（+++）

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用（%）表示，行χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

P63在各級(jí)病變中呈明顯的細(xì)胞核陽性表達(dá)，在顯微鏡下主要位于宮頸外口鱗狀上皮與柱狀上皮的移行部位的基底部，隨著級(jí)別的增高而表達(dá)程度增高，從分布情況而言在對(duì)照組宮頸上皮的基底細(xì)胞中呈散在性的表達(dá)（5%），在上皮內(nèi)病變低級(jí)別中基底層細(xì)胞表達(dá)明顯增多，且棘細(xì)胞層也有部分表達(dá)，在上皮內(nèi)瘤變高級(jí)別中幾何全層均有表達(dá)，在浸潤性鱗狀細(xì)胞癌癌中的表達(dá)100%，在腺癌中不表達(dá)。

表1 P16、ki67和P63在宮頸癌及上皮內(nèi)病變中的表達(dá)

Ki67在各級(jí)病變中的表達(dá)，正常宮頸鱗狀上皮中表達(dá)小于8%，低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變低表達(dá)78%，高表達(dá)約22%，高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變低表達(dá)19%，高表達(dá)約81%，鱗狀上皮癌100%，除了正常鱗狀上皮外，其他上皮內(nèi)病變及鱗狀細(xì)胞癌及宮頸腺癌ki67均表達(dá)良好（P＜0.05）。

P16在正常組織中陰性表達(dá)（以不表達(dá)或散在性表達(dá)作為標(biāo)準(zhǔn)），在鱗狀細(xì)胞癌及高級(jí)別的病變中表現(xiàn)為彌漫陽性，在低級(jí)別的病變中約40%表現(xiàn)為彌漫性陽性，在宮頸腺癌中也陽性表達(dá)，見表1。

3 討論與結(jié)論

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，50年前，宮頸癌是美國婦女癌癥患者最主要的因素，但目前死亡率已經(jīng)下降了2/3，死亡原因的第8位[3]，與死亡率下降明顯不同的是發(fā)現(xiàn)早期癌及癌前期病變的頻率非常之高，而目前中國的發(fā)病率上升很快，從流行病學(xué)資料來看，目前認(rèn)為宮頸的浸潤性鱗狀細(xì)胞癌及腺癌，其致病因素均為高危型人類乳頭狀病毒（HPV），2014年WHO采用了美國病理家協(xié)會(huì)（CAP）及美國陰道鏡和宮頸病理學(xué)會(huì)（ASCCP）的LAST方案，該方案方案提出了對(duì)于包括宮頸在內(nèi)的下生殖道HPV感染相關(guān)鱗狀上皮病變進(jìn)行命名的修訂，推薦采用鱗狀上皮內(nèi)病變（squamous intraepithelial lesion，SIL）來命名，并且將其分為兩級(jí)，即低級(jí)別鱗狀上 皮 內(nèi) 病 變（Low grade squamous intraepithelial lesion，LSIL）和高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變（High grade squamous intraepithelial lesion，HSIL）。在病理診斷中低級(jí)別與高級(jí)別的鑒別診斷尤為重要。

P16為抑癌基因，一旦失活會(huì)導(dǎo)致惡性增殖，在判斷良性宮頸病變，SIL中有十分重要的臨床意義[4]，在大量的文獻(xiàn)報(bào)道中P16與宮頸鱗狀上皮癌的關(guān)系密切[5]，在本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)在良性病變中呈局灶性或單個(gè)細(xì)胞著色，而在SIL以上病變中呈彌漫著色，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果P16著色不能區(qū)分LSIL（40%表達(dá)）及HSIL（100%表達(dá)）以及宮頸鱗狀上皮癌（100%），需要結(jié)合HE切片，其臨床意義是區(qū)分SIL以上病變及以下病變，有文獻(xiàn)報(bào)道P16在宮頸SIL及癌中表達(dá)證實(shí)可能與HPV感染有關(guān)[6]。

P63蛋白是P53蛋白的家族成員，其在增殖的上皮細(xì)胞、宮頸及尿道上皮中表達(dá)，有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道P63表達(dá)和鱗狀細(xì)胞癌有相關(guān)性，為鱗狀上皮癌的診斷標(biāo)志之一[7]，在本研究中在高級(jí)別上皮內(nèi)病變及鱗狀上皮癌中陽性率較高，在宮頸腺癌中無表達(dá) 。

Ki67是一種與細(xì)胞增殖特異相關(guān)的核抗原，主要用于判斷增殖活性在所有細(xì)胞周期活動(dòng)期的增殖細(xì)胞中表達(dá)，但在靜止期細(xì)胞中不表達(dá)，ki67的表達(dá)與多種腫瘤的發(fā)展和浸潤有關(guān)[8]，在宮頸的病變包括SIL及宮頸表達(dá)良好，特別是高度增生表明其異常增殖狀態(tài)，隨著病變的進(jìn)展，特別在宮頸癌陽性細(xì)胞的層次逐步開展至全層，表達(dá)明顯好于SIL。

綜上所述p63、p16和ki67在上皮內(nèi)病變及宮頸癌中的表達(dá)，特別由上皮內(nèi)瘤變向?qū)m頸癌的發(fā)展具有重要的實(shí)際意義，KI67由于其超強(qiáng)的敏感性，P16在SIL中表達(dá)特點(diǎn)對(duì)于臨床也有一定的指導(dǎo)意義，p63、p16和ki67的檢測無論在診斷及判斷預(yù)后中有較大的臨床價(jià)值。