噻蟲胺原藥的高效液相色譜測定

劉玉琪， 楊俊柱

(1.合肥市第八中學，安徽 合肥 230071；2.安徽省化工研究院，安徽 合肥 230041)

引 言

噻蟲胺化學名稱(E)-1-(2-氯-1,3-噻唑-5-基甲基)-3-甲基-2-硝基胍(結(jié)構(gòu)式見圖1),由拜耳公司和日本Takeda武田公司共同開發(fā)，是一種活性高、具有內(nèi)吸活性、觸殺和胃毒作用的新煙堿類廣譜殺蟲劑。適用于葉面噴霧、土壤處理使用。對水稻稻飛虱、小麥蚜蟲、番茄煙粉虱和韭菜韭蛆具有較高活性和較好防治效果[1]。

圖1 噻蟲胺結(jié)構(gòu)式

有關噻蟲胺的常量分析和殘留檢測主要涉及原藥、制劑和土壤、蔬菜等，大多采用液相色譜法[2-4]和液相色譜-質(zhì)譜法[5-6]，但均未涉及對噻蟲胺及其異構(gòu)體的分析，而根據(jù)其結(jié)構(gòu)式可以看出，其存在E式和Z式兩種異構(gòu)體，且二者生物活性和藥效均不一樣，故分離并檢測其有效異構(gòu)體具有十分重要的意義。本文采用正相高效液相色譜法進行分離和外標法定量，具有簡單、迅速、準確度高、精密度好等特點。

1 實驗部分

1.1 試劑及儀器

正己烷、四氫呋喃，色譜純；噻蟲胺標準品物質(zhì)，≥98.5%，由國家農(nóng)藥質(zhì)檢中心(沈陽)提供。

安捷倫1 100液相色譜儀，具可變波長紫外檢測器；色譜工作站；微孔過濾器，0.45 μm有機濾膜；進樣針：20 μL；超聲波清洗器。

1.2 液相色譜操作條件

色譜柱：SiO2, 200×4.6 mm(id)×5 μm不銹鋼柱；柱溫：35 ℃；流動相：v(正己烷)∶v(四氫呋喃)=100∶4，經(jīng)濾膜過濾并超聲脫氣10 min；流速：1.0 mL/min；檢測波長：260 nm；進樣量：5 μL；保留時間：噻蟲胺6.9 min，噻蟲胺Z體8.1 min(圖2、圖3)。

圖2 噻蟲胺標準樣品HPLC譜圖

圖3 噻蟲胺原藥HPLC譜圖

1.3 測定步驟

1.3.1 標準溶液的配制

稱取噻蟲胺標準品0.04 g(準確至0.000 2 g)于50 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，超聲振蕩5 min，取出恢復至室溫，搖勻備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取含噻蟲胺0.04 g(準確至0.000 2 g)的試樣于50 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，超聲振蕩5 min，取出恢復至室溫，搖勻，經(jīng)微孔過濾器過濾，濾液待用。

1.3.3 測定和計算

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后,連續(xù)進數(shù)針標準溶液，待相鄰2針峰面積變化小于1.2%后，按標準溶液、試樣溶液、試樣溶液、標準溶液的順序進行液相色譜測定。

試樣中噻蟲胺的質(zhì)量分數(shù)(X)按式(1)計算。

X=(A2×m1×P)/(A1×m2)

(1)

式中：A1為2針標樣溶液中噻蟲胺峰面積的平均值；A2為2針試樣溶液中噻蟲胺峰面積的平均值；m1為噻蟲胺標準物質(zhì)的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；P為噻蟲胺標準物質(zhì)的質(zhì)量分數(shù),%。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的優(yōu)化

對噻蟲胺標準溶液進行200 nm～300 nm紫外掃描，其在260 nm左右吸收最大，且雜質(zhì)峰較小，噻蟲胺及其異構(gòu)體和雜質(zhì)峰的分離度高，因此，設定檢測波長為260 nm。

2.2 色譜柱的選擇

在分析過程中，選擇了反相色譜柱，甲醇、乙腈與水的混合溶液，改變各成分的配比，噻蟲胺及其異構(gòu)體的分離效果均不理想，且分析時間較長。因此，選用正相色譜柱。

2.3 流動相的優(yōu)化

分析用v(正己烷)∶v(四氫呋喃)=100∶4為流動相，流速為1.0 mL/min時,出峰時間短,峰形對稱、分離度高。

2.4 重復性實驗

在選定的色譜操作條件下，對同一樣品平行測定5次，求得其標準偏差為0.16；相對標準偏差為0.17%(見表1)。

2.5 添加回收率實驗

取5份已知含量的噻蟲胺試樣，分別加入一定量的噻蟲胺標準物質(zhì)，在相同色譜條件下進行重復測定，測得其平均回收率為99.50%(見表2)。

表1 重復性實驗

表2 添加回收率實驗

2.6 線性相關實驗

將10 mg/mL噻蟲胺標準溶液用流動相稀釋配得一系列標準溶液。按上述液相色譜條件測定，以噻蟲胺標準溶液及其峰面積作標準曲線，得到線性回歸方程：y=166.86x-3.8811，相關系數(shù)：r2=0.999 4(見表3)。

表3 線性相關試驗

3 結(jié)語

本方法重復性好、準確度高、線性關系良好，能很好地用于噻蟲胺原藥及其制劑的定量分析。