HPLC法測定頸痛顆粒中阿魏酸的含量

景倩

摘 要：建立反相高效液相色譜法測定頸痛顆粒中阿魏酸的含量。方法：采用奧泰公司 C18 色譜柱（250 mm×4.6mm，5μm），甲醇-水-冰醋酸（30∶69∶1），檢測波長為320nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。阿魏酸在8～80μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。阿魏酸平均回收率分別為99.6%。結(jié)論：本法簡便、準(zhǔn)確，可用于頸痛顆粒中阿魏酸的含量測定。

關(guān)鍵詞：頸痛顆粒；含量；測定

頸痛顆粒具有活血化瘀，行氣止痛的功效。頸痛顆粒用于神經(jīng)根型頸椎病屬血瘀氣滯、脈絡(luò)閉阻證。頸痛顆粒由三七、羌活、白芍、川芎、延胡索、威靈仙、葛根、糊精組成。川芎主產(chǎn)于四川（灌縣），在云南、貴州、廣西等地，常用于活血行氣，祛風(fēng)止痛?！秳e錄》記載：“除腦中冷動，面上游風(fēng)去來，目淚出，多涕唾，忽忽如醉，諸寒冷氣，心腹堅痛，中惡，卒急腫痛，脅風(fēng)痛，溫中內(nèi)寒?！贝ㄜ汉写ㄜ亨海╟huanxiongzine）、黑麥草堿、川咖啡酸（coffeic acid）、阿魏酸（ferulic acid），大黃酚（chrysophanic acid）、新川芎內(nèi)酯（neocin-dilide）、洋川芎內(nèi)酯（senkyunolide）、洋川芎內(nèi)酯（senkyunolide）B、洋川芎醌（senkyunone）、香草酸（vanillic acid）、芎萘呋內(nèi)酯（wallichilide）、L-纈氨酰-L-纈氨酸酐（L-valyl-L-valinc achydride）、川芎酚，脲嘧啶（uracil）、棕櫚酸（palmitic acid）、β-谷甾醇（β-sitosterol）等。本文采用高效液相法對頸痛顆粒中的阿魏酸的進(jìn)行了含量測定。

1儀器與試藥

1.1儀器：天瑞儀器LC-310液相色譜（江蘇天瑞儀器股份有限公司）；瑞士梅特勒-托利多MS精密天平（梅特勒-托利多中國公司）；Cascada III.I全新智能純水/超純水一體化系統(tǒng)（頗爾過濾器（北京）有限公司）；天瑞儀器LC-310液相色譜（江蘇天瑞儀器股份有限公司）；KQ-300VDE型雙頻數(shù)控超聲波清洗器；TU-1901 雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。

1.2色譜柱：奧泰公司 C18 色譜柱（250 mm×4.6mm，5μm）。

1.3對照品：阿魏酸 購自中國藥品生物制品檢定所。

1.4試劑：甲醇（上海埃彼化學(xué)試劑有限公司）、冰醋酸（上海埃彼化學(xué)試劑有限公司）、乙酸乙酯（上海埃彼化學(xué)試劑有限公司）、乙腈（上海埃彼化學(xué)試劑有限公司）。

1.5試藥：頸痛顆粒

2測定方法確定

2.1色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下。流動相：甲醇-水-冰醋酸（30∶69∶1），檢測波長：320nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：35℃。理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不得低于3000。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取阿魏酸對照品適量，置棕色容量瓶中，加甲醇制成每1mL含20μg的溶液，即得。

2.3提取方法確定

2.3.1提取溶媒的選擇

在供試品溶液制備中，分別選用了水飽合的乙酸乙酯、乙醇、50%甲醇進(jìn)行熱回流提取，結(jié)果表明水飽合的乙酸乙酯分離效果、峰形及含量為最好，所以選擇水飽合的乙酸乙酯進(jìn)行熱回流提取。

2.3.2提取時間的選擇

取供試品適量，用水飽合的乙酸乙酯提取，熱回流提取分別提取20、40、60分鐘，制備供試品溶液，含量結(jié)果表明：三種提取時間結(jié)果無明顯差異，采用熱回流提取20分鐘。

2.3.3供試品溶液的制備

取供試品精密稱定，精密稱取0.5g，精密加入水飽合的乙酸乙酯50mL，熱回流提取20分鐘，過濾，水浴蒸干，殘渣用5ml甲醇溶解，搖勻，濾過。取續(xù)濾液，即得。

2.4專屬性試驗

依照處方取三七、羌活、白芍、延胡索、威靈仙、葛根、糊精，按樣品制備工藝制成陰性對照樣品，依上述方法測定，結(jié)果在阿魏酸出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)果表明本方法專屬性良好。

2.5精密度試驗

精密稱取阿魏酸對照品適量，加甲醇使溶解，制成濃度為20μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.85%，表明本方法精密度良好。

2.6對照品的線性考察

精密稱取阿魏酸對照品10.0mg，置25ml棕色容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取0.2、0.4、0.6、1.2、1.6、2.0mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程。結(jié)果表明，阿魏酸在8～80μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.7重現(xiàn)性試驗

稱取同一批的頸痛顆粒樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.77%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8準(zhǔn)確度試驗

精密稱取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的阿魏酸對照品，上述方法進(jìn)行測定，計算回收率，平均回收率分別為99.6%，RSD為0.76%。

2.9樣品穩(wěn)定性試驗

取同一批頸痛顆粒樣品，按2.3項下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置棕色瓶中室溫下放置，分別于第0、2、4、6小時，精密吸取供試品溶液10μl 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定頸痛顆粒中阿魏酸的RSD=0.93%。結(jié)果表明供試品6小時內(nèi)穩(wěn)定。

3討論

分別考察甲醇-水-冰醋酸（33∶66∶1），0.025mol/L磷酸二氫銨溶液（以磷酸調(diào)節(jié)pH=2.9）-乙腈（60：40），甲醇-水-冰醋酸（30∶69∶1），乙腈-水-冰醋酸（33∶66∶1）不同比例的流動相，結(jié)果以甲醇-水-冰醋酸（30∶69∶1）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用，甲醇-水-冰醋酸（30∶69∶1）為流動相。本實驗表明此方法可用于頸痛顆粒中阿魏酸的含量測定。

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